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人类CD8^+记忆T细胞体外扩增方法的研究 被引量:3
1
作者 罗海华 周南 +3 位作者 张旭 郭学敏 张辉 刘超 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期1339-1344,共6页
目的:研究体外扩增人类CD8+记忆T细胞的新方法,为抗病毒与抗肿瘤的过继性免疫治疗提供新的手段。方法:将anti-CD3抗体、anti-CD28抗体、CD70、白细胞介素(IL)-2、IL-7和IL-15进行排列组合,设计出63种刺激方式,对体外分离得到的正常人外... 目的:研究体外扩增人类CD8+记忆T细胞的新方法,为抗病毒与抗肿瘤的过继性免疫治疗提供新的手段。方法:将anti-CD3抗体、anti-CD28抗体、CD70、白细胞介素(IL)-2、IL-7和IL-15进行排列组合,设计出63种刺激方式,对体外分离得到的正常人外周血CD8+T细胞进行体外扩增;培养14 d后进行细胞计数,并检测CD8+T细胞的纯度以及CD8+中枢记忆T细胞(TCM)和CD8+效应记忆T细胞(TEM)所占的比例,进而计算出CD8+T细胞、CD8+TCM和CD8+TEM的体外扩增倍数,从而确定理想的刺激方法。结果:体外扩增CD8+T细胞、CD8+TCM和CD8+TEM的理想刺激方式均为anti-CD3抗体、IL-2和IL-7三者的组合;该刺激方式使3种细胞在培养14 d后分别扩增了13.19、13.28和15.27倍。结论:Anti-CD3抗体、IL-2和IL-7三者的组合,是刺激人类CD8+记忆T细胞体外扩增的相对理想方法。 展开更多
关键词 过继性免疫治疗 CD8+记忆T细胞 体外扩增
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HCV细胞感染模型研究进展及其在药物研究中的应用
2
作者 李义平 《临床肝胆病杂志》 CAS 2015年第11期1825-1830,共6页
利用从基于JFH1克隆的HCV嵌合体或者复制子中鉴定的适应性突变,已经建立了代表基因1~3型HCV的细胞感染模型。迄今,JFH1仍然是唯一能在肝细胞系中自主高效复制的克隆,因此迫切需要建立能培养所有HCV临床分离株的通用细胞感染模型。概述... 利用从基于JFH1克隆的HCV嵌合体或者复制子中鉴定的适应性突变,已经建立了代表基因1~3型HCV的细胞感染模型。迄今,JFH1仍然是唯一能在肝细胞系中自主高效复制的克隆,因此迫切需要建立能培养所有HCV临床分离株的通用细胞感染模型。概述了建立HCV细胞感染模型的历程、现有细胞感染性克隆和支持HCV复制的细胞系,同时简述HCV细胞复制和感染模型在药物研究中的一些应用。 展开更多
关键词 肝炎病毒属 细胞 培养的 抗病毒药
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基础医学类实验室安全管理探究与实践 被引量:9
3
作者 张旭 刘炳峰 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期511-518,共8页
科研实验室是科学研究和人才培养的基地,在“双一流”建设发展的背景下,实验室安全管理一直面临着严峻的挑战。本文通过梳理中山大学中山医学院实验室管理办法,从学科实验室分类及特点、实验室安全准入培训和考核等各工作方面进行剖析,... 科研实验室是科学研究和人才培养的基地,在“双一流”建设发展的背景下,实验室安全管理一直面临着严峻的挑战。本文通过梳理中山大学中山医学院实验室管理办法,从学科实验室分类及特点、实验室安全准入培训和考核等各工作方面进行剖析,总结了基础医学类实验室结合实际情况制定安全管理体系的建设。从管理制度建设、安全管理、安全检查监督、全员安全意识和制度执行力等方面的实验室管理视角进行阐述,以期望为高校实验室生物安全管理工作提供可行性、创见性的科学指导依据,期望建立健康、安全的实验环境,保障实验室工作安全进行。 展开更多
关键词 基础医学类实验室 管理制度 实验室安全 实验室管理 生物安全
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口腔鳞癌患者外周血单核细胞型髓系抑制细胞的变化及临床意义 被引量:5
4
作者 刘志国 钟丽梅 +4 位作者 燕王翔 陈宇 陈丹 丁学强 张辉 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期613-620,共8页
【目的】评价口腔鳞癌(OSCC)患者外周血中髓系抑制细胞(MDSC)变化及与临床意义。【方法】收集2012年1月至2012年10月间在中山大学附属第一医院口腔颌面外科住院的58例口腔鳞癌患者(OSCC组)及20例健康志愿者(对照组)外周血标本,采用流式... 【目的】评价口腔鳞癌(OSCC)患者外周血中髓系抑制细胞(MDSC)变化及与临床意义。【方法】收集2012年1月至2012年10月间在中山大学附属第一医院口腔颌面外科住院的58例口腔鳞癌患者(OSCC组)及20例健康志愿者(对照组)外周血标本,采用流式细胞分析术检测对照组和OSCC组术前外周血中MDSC的表型及比例,比较分析20例口腔鳞癌患者术后3天、7天、30天外周血中MDSC的动态变化;分选CD11b+CD33highHLA-DR-细胞,采用T淋巴细胞增殖实验、精氨酸酶活性检测,以及一氧化氮含量检测验证该群细胞功能;检测血清IL-6含量及与外周血CD11b+CD33highHLA-DR-MDSC变化的相关性。【结果】(1)OSCC组与对照组外周血中CD11b+CD33highHLA-DR-细胞百分率分别为(2.68±0.21)%和(0.65±0.05)%,OSCC组明显高于对照组,两组比较差异具有统计学意义(P<0.001)。(2)口腔鳞癌患者外周血中CD11b+CD33highHLA-DR-细胞是一群CD14+CD15-的有免疫抑制功能单核细胞型髓系抑制细胞(M-MDSC),可抑制T淋巴细胞增殖。(3)M-MDSC的变化与患者临床分期有关,临床Ⅲ、Ⅳ期口腔鳞癌患者与临床Ⅰ、Ⅱ期患者外周血M-MDSC比例分别为(3.01±0.35)%和(2.19±0.19)%,前者明显高于后者,差异具有统计学意义(P<0.05),但M-MDSC的变化与患者年龄、性别、淋巴结转移及病理分级无明显相关性,差异无明显统计学意义(P<0.05)。(4)术后患者外周血中M-MDSC比例在术后3天内明显升高(7.46±0.57)%,7天后逐渐下降(2.56±0.20)%,至术后30天可逐渐下降接近健康者水平(1.07±0.06)%,各组间比较差异有统计学意义(P<0.001)。(5)患者外周血中M-MDSC变化与IL-6含量呈正相关性(P<0.001)。【结论】口腔鳞癌患者外周血M-MDSC的变化与口腔鳞癌发生发展有一定相关性,针对M-MDSC的治疗可能成为加强肿瘤免疫治疗疗效的有效途径。 展开更多
关键词 口腔鳞癌 髓系抑制细胞 免疫抑制 白细胞介素6
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N-乙酰半胱氨酸对CD4^+中央记忆性T细胞体外扩增的影响 被引量:1
5
作者 武双鑫 罗海华 +1 位作者 张辉 刘超 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期577-581,共5页
【目的】探讨小分子药物(N-乙酰半胱氨酸,NAC)对CD4+中央记忆性T细胞(TCM)体外扩增的影响从而改善过继免疫治疗的效果。【方法】体外分离人类的外周血CD4+T淋巴细胞,将细胞分为两组(实验组和对照组)进行细胞培养,实验组加入N-乙酰半胱... 【目的】探讨小分子药物(N-乙酰半胱氨酸,NAC)对CD4+中央记忆性T细胞(TCM)体外扩增的影响从而改善过继免疫治疗的效果。【方法】体外分离人类的外周血CD4+T淋巴细胞,将细胞分为两组(实验组和对照组)进行细胞培养,实验组加入N-乙酰半胱氨酸后,通过流式细胞仪和细胞计数仪对两组细胞中的CD4+TCM的扩增情况进行检测。【结果】在CD4+T细胞体外扩增实验中,10 mmol/L的NAC为促进细胞扩增的最佳浓度;NAC对TCM在CD4+T细胞中的比例无明显的影响;在CD4+T细胞扩增的第15天检测其中TCM的细胞数量,对照组中TCM的数量为(7.24±0.54)×105,实验组中TCM的数量为(5.13±0.47)×106,较之对照组,其TCM的数量有着7倍左右的扩增;对上述两组数据进行统计学分析(t检验),P<0.01,表明差异具有统计学意义;对上述两组细胞进行凋亡检测,发现实验组中凋亡细胞的比例低于对照组。【结论】NAC可有效地促进CD4+TCM细胞的扩增,为过继免疫治疗提供简单、安全及有效的体外扩增方法 。 展开更多
关键词 N-乙酰半胱氨酸 中央记忆性T细胞 过继免疫治疗
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不同分子亚型乳腺癌组织中TRAIL蛋白表达及意义 被引量:7
6
作者 陈欣欣 罗海华 +1 位作者 张辉 李晓曦 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期65-70,共6页
【目的】探讨不同分子亚型乳腺癌组织中TRAIL蛋白(肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体,TRAIL)的表达差异及TRAIL与乳腺癌各临床病理因素之间的关系。【方法】采用streptavidin-perosidase(SP)法检测110例乳腺癌及12例乳腺良性病变组织中TRAI... 【目的】探讨不同分子亚型乳腺癌组织中TRAIL蛋白(肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体,TRAIL)的表达差异及TRAIL与乳腺癌各临床病理因素之间的关系。【方法】采用streptavidin-perosidase(SP)法检测110例乳腺癌及12例乳腺良性病变组织中TRAIL蛋白的表达水平,分析不同分子亚型乳腺癌组织中TRAIL蛋白表达差异,以及TRAIL表达与乳腺癌临床分期、淋巴结转移以及Ki-67表达等临床因素的关系。【结果】与其他分子亚型相比较,TRAIL蛋白在Luminal B HER-2+型乳腺癌组织中的表达水平明显下调(P=0.035),在Ki-67高表达的乳腺癌组织中也发现了TRAIL表达水平下调(P=0.045),并且TRAIL在乳腺癌组织中的表达水平还受到肿瘤大小、淋巴结状态和TNM分期等因素影响(P=0.004、P=0.006、P=0.001),而不受乳腺癌的病理类型、癌细胞分级、肿瘤有无坏死和神经浸润及患者年龄等因素的影响。【结论】TRAIL蛋白在不同分子亚型乳腺癌组织中的表达有显著差异,并且其与乳腺癌的临床分期、肿瘤大小、淋巴结有无转移等临床特征密切相关,可能有助于判断乳腺癌的预后。 展开更多
关键词 乳腺癌 TRAIL 分子亚型 临床分期 预后指标
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TREM-1在细菌性化脓性角膜炎中的作用及其分子机制 被引量:5
7
作者 聂鑫鑫 朱敏 +5 位作者 李美玉 苏家豪 李海波 刘畅 吴敏昊 黄曦 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期305-310,共6页
【目的】探讨髓样细胞诱发受体1(TREM-1)在铜绿假单胞菌(PA)感染角膜炎中的作用及其分子机制。【方法】为了揭示TREM-1在细菌性角膜炎中的作用,我们建立了PA角膜炎小鼠模型和PA感染的腹腔巨噬细胞模型,real-timePCR和免疫荧光法检测感... 【目的】探讨髓样细胞诱发受体1(TREM-1)在铜绿假单胞菌(PA)感染角膜炎中的作用及其分子机制。【方法】为了揭示TREM-1在细菌性角膜炎中的作用,我们建立了PA角膜炎小鼠模型和PA感染的腹腔巨噬细胞模型,real-timePCR和免疫荧光法检测感染前后TREM-1的表达水平;用丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)的抑制剂或磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)抑制剂预处理巨噬细胞,再用脂多糖(LPS)和TREM-1活化抗体刺激,real-time PCR检测IL-1β、MIP-2、TNF-α和IL-6等促炎因子的表达水平,进一步探讨TREM-1调控PA角膜炎的分子机制;用Th1细胞因子IFN-γ或者Th2细胞因子IL-4、IL-10刺激巨噬细胞,real-time PCR检测Th1/Th2细胞因子对TREM-1表达的调控。【结果】PA感染的C57BL/6小鼠角膜中TREM-1表达高于BALB/c小鼠;体外研究显示PA感染和LPS刺激均诱导TREM-1高表达;TREM-1通过MAPK和PI3K-Akt通路调节促炎因子生成;Th1细胞因子促进TREM-1表达,而Th2细胞因子不影响TREM-1的表达。【结论】PA感染上调TREM-1的表达,TREM-1通过调控Th1/Th2细胞因子的表达进一步放大炎症,导致角膜溃疡穿孔,这一发现可能为化脓性角膜炎的防治提供了新的理论依据。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 角膜炎 TREM-1 TH1/TH2 细胞因子 巨噬细胞
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血管内皮细胞生长因子在抗结核免疫中的作用及机制 被引量:2
8
作者 黄春宇 尹琳 +5 位作者 何军芳 陈涛 周琳 钟球 张萍 黄曦 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期287-292,共6页
【目的】探讨血管内皮细胞生长因子(VEGF)对巨噬细胞抗结核免疫作用的影响。【方法】为了研究VEGF与结核病(TB)之间的相关性,分离健康人和肺结核病人的外周血单核细胞(PBMC),Real-time PCR检测VEGF的表达水平;体外实验中,用卡介苗(BCG)... 【目的】探讨血管内皮细胞生长因子(VEGF)对巨噬细胞抗结核免疫作用的影响。【方法】为了研究VEGF与结核病(TB)之间的相关性,分离健康人和肺结核病人的外周血单核细胞(PBMC),Real-time PCR检测VEGF的表达水平;体外实验中,用卡介苗(BCG)感染佛波酯(PMA)诱导分化的THP-1细胞,PCR检测VEGF的表达水平。进一步探讨VEGF在抗结核免疫中的作用,分别用BCG单独处理或BCG与VEGF共同处理THP-1诱导分化的细胞,Real-time PCR检测促炎因子TNF-α,IL-6,IFN-γ,MIP-2的表达水平;Griess法检测培养上清中一氧化氮(NO)的产生。【结果】肺结核病人的PBMC中VEGF表达水平相对于健康人明显升高。BCG感染THP-1诱导分化的巨噬细胞后,VEGF表达水平上调;VEGF显著增强BCG感染的巨噬细胞中TNF-α,IL-6,IFN-γ,MIP-2的表达和NO的产生。【结论】肺结核病人的PBMC和BCG感染的巨噬细胞中VEGF表达均显著上调,并可能通过影响促炎因子和NO的产生调节巨噬细胞的抗菌活性,提示VEGF可能是治疗结核病的一个靶点。 展开更多
关键词 血管内皮细胞生长因子 结核分枝杆菌 巨噬细胞 促炎因子 一氧化氮
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维生素C对CD4+效应记忆性T细胞体外扩增的影响 被引量:1
9
作者 张译文 罗海华 +2 位作者 张旭 张辉 刘超 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期1471-1475,共5页
目的:探讨小分子药物维生素C(VC)对CD4+效应记忆性T细胞(TEM)体外扩增的影响从而改善过继免疫治疗的效果。方法:体外分离正常人的外周血CD4+T淋巴细胞,将细胞分为2组(实验组和对照组)进行细胞培养。实验组加入VC后,通过细胞计数仪和流... 目的:探讨小分子药物维生素C(VC)对CD4+效应记忆性T细胞(TEM)体外扩增的影响从而改善过继免疫治疗的效果。方法:体外分离正常人的外周血CD4+T淋巴细胞,将细胞分为2组(实验组和对照组)进行细胞培养。实验组加入VC后,通过细胞计数仪和流式细胞仪对2组细胞中TEM的扩增情况进行检测。结果:(1)在CD4+T细胞体外扩增实验中,VC对CD4+T细胞的总数无显著影响。(2)VC使TEM在CD4+T细胞中的比例显著升高,100 mg/L为扩增的最佳浓度。(3)在CD4+T细胞扩增的第10天检测其中TEM的细胞数量,对照组TEM的数量为(1.22±0.15)×106,实验组TEM的数量为(3.56±0.35)×106,两者的差异有统计学意义(P<0.01)。结论:VC可有效地促进CD4+TEM的体外扩增,为过继免疫治疗提供简单、安全及有效的体外扩增方法。 展开更多
关键词 维生素C 效应记忆性T细胞 过继免疫治疗
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MicroRNA-4279通过靶向核心启动子区域上调Notch-1基因表达进而抑制细胞凋亡
10
作者 彭高 黄卓琼 +2 位作者 罗海华 刘超 张意军 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期641-649,共9页
【目的】寻找与Notch-1基因核心启动子结合的micro RNA(miRNA)并阐明其调控功能,研究免疫细胞肿瘤的发生发展机制。【方法】首先使用生物信息学手段筛选与Notch-1基因核心启动子区域结合的miRNA,进而利用荧光素酶报告系统对其调控作用... 【目的】寻找与Notch-1基因核心启动子结合的micro RNA(miRNA)并阐明其调控功能,研究免疫细胞肿瘤的发生发展机制。【方法】首先使用生物信息学手段筛选与Notch-1基因核心启动子区域结合的miRNA,进而利用荧光素酶报告系统对其调控作用进行实验验证;通过突变核心启动子上的结合位点进一步确定该miRNA特异性靶向基因核心启动子区域。检测转染该miRNA后H9细胞中Notch-1的mRNA与内源蛋白表达水平。另外通过转染该miRNA并用H2O2诱导凋亡,研究该miRNA对H9细胞凋亡的影响。进一步在上述实验条件下,使用siRNA降低靶基因(Notch-1)的表达,然后检测miRNA对H9细胞系的凋亡的影响。【结果】首先通过软件预测,我们发现了miR-4279可以与Notch-1的核心启动子序列结合。荧光素酶报告实验表明miR-4279可以增强Notch-1启动子的转录活性;而在miR-4279的靶位点引入突变后,该增强作用消失。RT-qPCR和Western Blot实验表明miR-4279能够显著增强内源Notch-1 mRNA与蛋白的表达。H2O2诱导凋亡实验表明,miR-4279可以抑制H9细胞的凋亡。siRNA干扰实验表明,当Notch-1通路被抑制后,miR-4279导致的细胞凋亡抑制的效果消失。【结论】miR-4279通过靶向Notch-1基因核心启动子区域,特异性增加Notch-1基因的表达,进而增强H9细胞对H2O2诱导的凋亡的抗性。 展开更多
关键词 miR-4279 核心启动子 Notch-1基因 凋亡 H9细胞系
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过表达IGF-1对脐带间充质干细胞氧化损伤的抑制作用
11
作者 赵雷 陈昕 +1 位作者 冯业童 刘朋飞 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期160-166,共7页
目的:分析过表达胰岛素样生长因子1(IGF-1)对脐带间充质干细胞(UC-MSCs)氧化损伤的抑制作用,开发UC-MSCs新的应用模式。方法:通过酶消化法,从脐带组织中分离UC-MSCs,并采用流式细胞术对细胞的表面特异标志物进行鉴定,通过逆转录病毒感... 目的:分析过表达胰岛素样生长因子1(IGF-1)对脐带间充质干细胞(UC-MSCs)氧化损伤的抑制作用,开发UC-MSCs新的应用模式。方法:通过酶消化法,从脐带组织中分离UC-MSCs,并采用流式细胞术对细胞的表面特异标志物进行鉴定,通过逆转录病毒感染体系,构建过表达IGF-1的UC-MSCs(UC-MSCs-IGF-1),并进一步通过实时荧光定量PCR和流式细胞术对UC-MSCs-IGF-1的IGF-1表达水平进行评价,同时分析UC-MSCs-IGF-1的表面标志物及成骨成脂分化能力;用不同浓度的H_2O_2(0μmol/L、10μmol/L、50μmol/L和100μmol/L)处理细胞,分析UC-MSCs-IGF-1在增殖活力维持、抗氧化损伤和抗凋亡方面的优势。结果:UC-MSCs表面标志物CD29、CD90和CD105的表达均呈阳性,而CD34的表达为阴性,符合正常间充质干细胞的表型特征;实时荧光定量PCR和流式细胞术结果表明,应用逆转录病毒感染体系构建的UC-MSCs-IGF-1在IGF-1表达方面远高于正常UC-MSCs,同时干细胞表型与UC-MSCs一致,且具备正常的成脂成骨分化能力;在H_2O_2的氧化损伤作用下,与UC-MSCs相比,UC-MSCs-IGF-1具有较强的增殖活力和抗氧化、抗凋亡功能,同时细胞中的SOD活性略高于UC-MSCs。结论:过表达IGF-1对UC-MSCs的氧化损伤及氧化引起的凋亡均具有一定的防护作用,与正常UC-MSCs相比,UC-MSCsIGF-1可能在临床应用方面具有一定的优势。 展开更多
关键词 脐带间充质干细胞 胰岛素样生长因子1 氧化损伤 细胞凋亡
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