隐丹参酮诱导猴骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞 被引量：23

1

作者 原清涛 邓宇斌 +3 位作者 刘晓刚 胡军 李树浓 刘祖国 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期993-996,共4页

目的体外培养猴骨髓间质干细胞(MSCs)并定向诱导分化为神经元样细胞。方法体外分离培养猴MSCs,流式细胞仪检测其表面标志,用含隐丹参酮的无血清L-DMEM诱导MSCs分化为神经元样细胞,免疫细胞化学检测单克隆抗体特异性神经元烯醇化酶(NSE)... 目的体外培养猴骨髓间质干细胞(MSCs)并定向诱导分化为神经元样细胞。方法体外分离培养猴MSCs,流式细胞仪检测其表面标志,用含隐丹参酮的无血清L-DMEM诱导MSCs分化为神经元样细胞,免疫细胞化学检测单克隆抗体特异性神经元烯醇化酶(NSE)、神经丝蛋白(NF)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。结果体外培养的猴MSCs表达CD29、CD44、CD105、CD166,并且具有正常的二倍体核型,不随传代而发生改变。bFGF预诱导24h后,隐丹参酮可以将MSCs诱导为神经元样细胞,免疫细胞化学显示NSE、NF表达阳性,阳性率分别为68.3%±3.5%、70.3%±1.5%,而GFAP表达阴性。结论隐丹参酮可以在体外将猴MSCs诱导分化为神经元样细胞。 展开更多

关键词 骨髓 干细胞 神经元 隐丹参酮 成束猴

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纤溶酶原K5抗血管增生活性依赖其完整Kringle结构域 被引量：6

2

作者 李朝阳 蔡卫斌 +6 位作者 杨中汉 杨霞 宋志宏 周世豪 李明友 刘祖国 高国全 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期17-23,共7页

根据K5蛋白(Pro451—Ala541)的结构特征和二硫键分布特点,设计K5的两个缺失突变体K5 mut1(Cys461—Cys540,保留K5 kringle环3个完整二硫键但去除N端和C端多余氨基酸)和K5mut2(Cys482—Cys535,打开kringle环,只保留2个二硫键).以野生型... 根据K5蛋白(Pro451—Ala541)的结构特征和二硫键分布特点,设计K5的两个缺失突变体K5 mut1(Cys461—Cys540,保留K5 kringle环3个完整二硫键但去除N端和C端多余氨基酸)和K5mut2(Cys482—Cys535,打开kringle环,只保留2个二硫键).以野生型人纤溶酶原K5 cDNA为模板,用PCR方法得到编码缺失突变体的DNA片段,定向克隆入pET22b(+)质粒载体,重组体转化进大肠杆菌BL21(DE3),诱导表达,产物经亲和层析和高浓度甘油透析纯化后进行鉴定和生物活性测定.K5 mut1蛋白特异性抑制人视网膜微血管内皮细胞增殖,且活性强度是完整的K5蛋白2倍;K5mut2对人视网膜微血管内皮细胞无显著抑制作用.结果提示,完整的Kringle结构(包含3个二硫键)是维持人纤溶酶原K5抗血管增生活性的必需结构域,而K5分子中Kringle结构域外的N端和C端氨基酸臂则并非其活性所必需. 展开更多

关键词 纤溶酶原 KRINGLE 5 血管增生抑制因子 缺失突变体 结构与功能

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人类视网膜血管内皮细胞的培养与鉴定 被引量：20

3

作者 李斌 唐仕波 +2 位作者 张革 陈剑虹 李宝金 《眼科研究》 CSCD 北大核心 2005年第1期20-22,共3页

目的建立人视网膜血管内皮细胞培养的简便方法.方法胰蛋白酶消化供角膜移植术后留下的眼球,获得新鲜视网膜血管,用5%胎牛血清的人内皮细胞培养基培养(HE-SFM BGM),添加生长因子和胰岛素-转铁蛋白-硒添加物,并用纤维连接蛋白促进内皮细... 目的建立人视网膜血管内皮细胞培养的简便方法.方法胰蛋白酶消化供角膜移植术后留下的眼球,获得新鲜视网膜血管,用5%胎牛血清的人内皮细胞培养基培养(HE-SFM BGM),添加生长因子和胰岛素-转铁蛋白-硒添加物,并用纤维连接蛋白促进内皮细胞贴壁.第Ⅷ因子相关抗原鉴定内皮细胞.结果内皮细胞第1 d贴壁,第6 d形成克隆,第15 d细胞融合.传至7～8代转化为成纤维细胞.第Ⅷ因子相关抗原鉴定纯净度达95%.结论利用5%胎牛血清的人内皮细胞培养基,添加生长因子和胰岛素-转铁蛋白-硒添加物,并用纤维连接蛋白包被培养瓶,能简单有效地培养人视网膜血管内皮细胞. 展开更多

关键词 人 视网膜 内皮细胞 培养

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人纤维蛋白溶酶原kringle5(K5)抑制小鼠肝癌的血管生成和肿瘤生长 被引量：4

4

作者 刘倩平 杨霞 +6 位作者 李朝阳 杨中汉 蔡卫斌 宋志宏 葛啸虎 周世豪 高国全 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期380-383,共4页

【目的】体内、体外实验观察人纤维蛋白溶酶原kringle5(K5)对肝癌血管生成和肿瘤生长的影响。【方法】大肠杆菌中表达,组氨酸结合柱亲和层析、纯化获得K5蛋白,SDS-PAGE和Westernblot方法鉴定K5蛋白的表达;MTT法分析K5对牛视网膜毛细血... 【目的】体内、体外实验观察人纤维蛋白溶酶原kringle5(K5)对肝癌血管生成和肿瘤生长的影响。【方法】大肠杆菌中表达,组氨酸结合柱亲和层析、纯化获得K5蛋白,SDS-PAGE和Westernblot方法鉴定K5蛋白的表达;MTT法分析K5对牛视网膜毛细血管内皮细胞(BRCEC)和肝癌细胞株Bel-7402、HepG2增殖的影响;建立皮下种植肝癌鼠模型,瘤内注射K5,检测抑瘤率及肝癌组织微血管密度(MVD)。【结果】SDS-PAGE及Westernblot鉴定获得K5纯化蛋白;K5特异性地抑制BRCEC的增殖,IC50=160nmol/L,而对肝癌细胞株Bel-7402、HepG2的增殖无抑制作用;K5显著抑制小鼠肝癌生长,治疗组肝癌组织MVD明显低于对照组。【结论】K5抑制移植性小鼠肝癌血管生成和肿瘤生长,特异性抑制血管内皮细胞的增殖可能是K5抑制肝癌血管生成的主要机制。K5具有治疗肝癌的潜在临床价值。 展开更多

关键词 纤维蛋白溶酶原 血管生成 肿瘤生长 小鼠肝癌 视网膜毛细血管内皮细胞 Bel-7402 微血管密度(MVD) Western SDS-PAGE HEPG2增殖 肝癌细胞株 blot 肝癌组织 mol/L 实验观察 大肠杆菌 亲和层析 MTT法 瘤内注射 纯化蛋白 抑制作用

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FK506纳米粒对大鼠角膜移植排斥反应的影响 被引量：10

5

作者 费文雷 陈家祺 +5 位作者 庞志清 骆新兰 刘永民 王铮 袁进 蔡秀玲 《眼科研究》 CSCD 北大核心 2006年第2期156-159,共4页

目的观察FK506纳米粒对大鼠角膜移植排斥反应模型的作用。方法Wistar大鼠为供体,对70只SD大鼠行异体穿透角膜移植,14只SD大鼠接受自体角膜移植,观察不同组别植片的存活时间及免疫病理改变。结果各组植片存活时间分别为Ⅰ组(不用药)(7.90... 目的观察FK506纳米粒对大鼠角膜移植排斥反应模型的作用。方法Wistar大鼠为供体,对70只SD大鼠行异体穿透角膜移植,14只SD大鼠接受自体角膜移植,观察不同组别植片的存活时间及免疫病理改变。结果各组植片存活时间分别为Ⅰ组(不用药)(7.90±1.20)d;Ⅱ组(PLGA)(8.44±0.88)d;Ⅲ组(0.05%地塞米松)(10.44±1.42)d;Ⅳ组(0.05%FK506)(11.60±2.55)d;Ⅴ组(0.01%FK506纳米胶体)(15.09±4.81)d。Ⅰ组与Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组植片存活时间有显著统计学差异。Ⅴ组与Ⅲ、Ⅳ组植片存活时间也有显著统计学差异。排斥反应的植片有多量CD8+、中等量CD4+T细胞浸润和巨噬细胞浸润,ICAM、VEGF等免疫分子与炎症和排斥反应程度吻合。Ⅴ、Ⅳ组植片的炎性细胞较少。结论FK506局部滴眼可延长植片存活时间,FK506纳米胶体较FK506滴眼液能维持更长时间的植片透明。 展开更多

关键词 FK506 纳米微粒 角膜移植 大鼠

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双波长等吸收紫外分光法测定玻璃体内苏拉明浓度 被引量：5

6

作者 朱晓波 唐仕波 +2 位作者 蔡葵花 陈红英 黄强 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期225-230,共6页

【目的】设计并论证检测玻璃体内苏拉明质量浓度的双波长等吸收紫外分光法?【方法】 25只白兔摘除眼球冷冻后获取玻璃体,经过匀浆?沉淀?稀释等系列预处理后首先检验正常兔眼玻璃体个体差异性及紫外分光法测定玻璃体内苏拉明浓度的方法... 【目的】设计并论证检测玻璃体内苏拉明质量浓度的双波长等吸收紫外分光法?【方法】 25只白兔摘除眼球冷冻后获取玻璃体,经过匀浆?沉淀?稀释等系列预处理后首先检验正常兔眼玻璃体个体差异性及紫外分光法测定玻璃体内苏拉明浓度的方法学特异性?接着建立标准曲线方程,考察检测方法的精密度和准确度,确立最低检测定量限,最后检测苏拉明在玻璃体内的样品稳定性?【结果】选取261 nm和269 nm两波长,全部6个个体及混合玻璃体的吸光值差ΔA(A261-A269)介于±0.002之间;外加高?低浓度苏拉明的曲线以及实际注药的高?低浓度苏拉明曲线与空白玻璃体的曲线走势一致且位于其上,各曲线的波峰波谷位置未见偏移;标准曲线方程为y = 4 234 x + 2,r = 0.999 1;次低?中浓度?次高标准浓度点的日内相对标准差(RSD)分别为13.16%?9.67%?10.35%,日间RSD分别为17.59%?10.09%?11.11%,相对回收率分别为:(95.89±0.08) %?(96.69±0.07) %?(97.43±0.01) %;设计标准曲线的最低质量浓度45 μg/mL;其日内?日间相对标准差分别为14.14%?15.94%,检验回收率为(94.92±0.01) %;常温组样品,8 h及以内稳定性尚好,之后不稳定?低温组及3次冻融组稳定性良好?【结论】在给定条件下,白兔玻璃体的个体差异可以忽略。 展开更多

关键词 双波长等吸收紫外分光法 玻璃体 苏拉明 药物浓度

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突变型K5重组蛋白抑制小鼠肝癌血管生成和肿瘤生长的作用 被引量：4

7

作者 杨霞 王青松 +6 位作者 程锐 李朝阳 蔡卫斌 杨中汉 李民友 何光耀 高国全 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期220-224,共5页

目的:体内实验观察人纤溶酶原K5缺失突变体Ⅰ(K5 mut1)对HepA小鼠肝癌血管生成和肿瘤生长的影响。方法:大肠杆菌中表达,组氨酸结合柱亲和层析、纯化获得K5 mut1蛋白,SDS-PAGE和Western blot-ting方法鉴定其表达;建立皮下种植肝癌小鼠模... 目的:体内实验观察人纤溶酶原K5缺失突变体Ⅰ(K5 mut1)对HepA小鼠肝癌血管生成和肿瘤生长的影响。方法:大肠杆菌中表达,组氨酸结合柱亲和层析、纯化获得K5 mut1蛋白,SDS-PAGE和Western blot-ting方法鉴定其表达;建立皮下种植肝癌小鼠模型,腹腔注射不同剂量K5 mut1重组蛋白,检测抑瘤率及肝癌组织微血管密度(MVD)。结果:SDS-PAGE及Western blotting鉴定获得K5 mut1纯化蛋白;K5 mut1剂量依赖性地抑制小鼠肝癌(HepA)实体瘤生长,不同剂量K5 mut1治疗组肝癌组织MVD低于对照组,并随K5 mut1用药剂量增加而降低。结论:K5 mut1具有抑制小鼠肝癌生长的作用,抑制肿瘤血管生成可能是K5 mut1抑制肿瘤生长的主要机制。结果提示K5 mut1具有治疗肝癌的潜在临床价值。 展开更多

关键词 纤维蛋白溶酶原 突变 癌 肝细胞 新生血管化 病理性

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葛根素腹腔注射在家兔房水中的药代动力学研究 被引量：16

8

作者 邓新国 胡世兴 +4 位作者 张清炯 张晓慧 钟国平 汤丽芬 吴珏珩 《眼科研究》 CSCD 北大核心 2003年第3期258-260,共3页

目的　测定腹腔注射葛根素后不同时间家兔房水中的质量浓度 ,计算其药代动力学参数 ,研究药代动力学特点。方法　 44只健康新西兰成年家兔随机分为 11组 ,各组每只家兔腹腔注射葛根素 80mg/kg加等量 5 %葡萄糖液 ,在用药后 0、0 5、1、... 目的　测定腹腔注射葛根素后不同时间家兔房水中的质量浓度 ,计算其药代动力学参数 ,研究药代动力学特点。方法　 44只健康新西兰成年家兔随机分为 11组 ,各组每只家兔腹腔注射葛根素 80mg/kg加等量 5 %葡萄糖液 ,在用药后 0、0 5、1、2、3、4、6、8、12、16、2 4h取房水 ,采用反向高效液相色谱法 (RP HPLC)进行测定。 3P87软件拟合药代动力学参数。结果　注射后其质量浓度在正常家兔房水呈二室模型 ,3P87软件拟合药代动力学参数数值为 :达峰质量浓度(Cmax)为 1 613 μg/ml,达峰时间tmax为 1 680h ,半衰期t1/ 2α为 1 3 5 8h、半衰期t1/ 2 β为 19 72 2h ,表观分布面积 (V/F)为 4 888L ,曲线下面积 (AUC)为 8 5 0 1μg/(ml·h) ,清除率 (CL)为 2 165L/h。实测值 :3 0min为 ( 0 778± 0 2 89) μg/ml,2h达峰值为( 2 3 18± 0 14 7) μg/ml ,随后逐渐下降 ,2 4h几乎测不到。 结论　本方法灵敏、特异、准确 ,可用于房水中葛根素质量浓度测定 ;葛根素通过腹腔注射能透过血房水屏障进入房水 ,半衰期长。此结果为葛根素全身用药治疗眼部疾病提供了实验依据。 展开更多

关键词 葛根素 反向高效液相包谱法 房水 家兔

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人纤溶酶原K5突变体Ⅰ的构建及其在大肠杆菌中的表达与纯化 被引量：3

9

作者 蔡卫斌 李朝阳 +5 位作者 杨中汉 骆晓枫 周世豪 李民友 刘祖国 高国全 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期241-244,共4页

【目的】 构建人纤溶酶原Kringle 5(K5)的突变体Cys461-Cys540(K5 mut1),在大肠杆菌中表达,亲和层析纯化,为探讨K5抗血管增生活性与Kringle结构域的关系提供基础?【方法】 以K5全长cDNA为模板用PCR的方法扩增人纤溶酶原K5 mut1基因,将... 【目的】 构建人纤溶酶原Kringle 5(K5)的突变体Cys461-Cys540(K5 mut1),在大肠杆菌中表达,亲和层析纯化,为探讨K5抗血管增生活性与Kringle结构域的关系提供基础?【方法】 以K5全长cDNA为模板用PCR的方法扩增人纤溶酶原K5 mut1基因,将其克隆进表达载体pET-22b(+)中,并用限制性核酸内切酶酶切和DNA测序鉴定其连接正确;pET-22b(+)/K5 mut1 转化大肠杆菌BL21(DE3), IPTG诱导表达,表达产物用固化Ni2+-His Bind Resin亲和层析方法纯化,用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western blot方法分析鉴定?【结果】 PCR扩增获得258 bp的人纤溶酶原K5 mut1基因片段,正确插入pET-22 b(+)载体,在大肠杆菌中该基因编码蛋白的表达量占菌体总蛋白13%左右;SDS-PAGE显示其相对分子质量Mr≈14.1×103,Western blot证实该表达蛋白为K5 mut1重组蛋白,经亲和层析后K5 mut1重组蛋白纯度大于90%,获得率约为10 mg/L?【结论】 成功构建人纤溶酶原K5 mut1,实现在大肠杆菌中高效表达,亲和层析纯化获得较高纯度K5 mut1重组蛋白? 展开更多

关键词 纤溶酶原 突变型K5 血管增生抑制因子 基因突变 层析法 大肠杆菌 血管增生

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环孢素A对小鼠脾细胞IFN-γ产生的影响 被引量：5

10

作者 黄俊 马瑞 +1 位作者 杨培增 吴长有 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期346-349,共4页

目的研究在不同刺激条件下,环孢素A(CsA)对小鼠γ-干扰素(IFN-γ)产生的影响。方法小鼠脾淋巴细胞分别使用抗CD3单克隆抗体(mAb)、抗CD3mAb+抗CD28mAb及抗CD3mAb+rIL-12刺激后,用ELISA法检测CsA对小鼠脾细胞IFN-γ产生的影响。在单个细... 目的研究在不同刺激条件下,环孢素A(CsA)对小鼠γ-干扰素(IFN-γ)产生的影响。方法小鼠脾淋巴细胞分别使用抗CD3单克隆抗体(mAb)、抗CD3mAb+抗CD28mAb及抗CD3mAb+rIL-12刺激后,用ELISA法检测CsA对小鼠脾细胞IFN-γ产生的影响。在单个细胞水平上,用流式细胞仪检测CsA对脾细胞表面CD25和CD69表达及IFN-γ产生的影响。结果CsA对不同条件下诱导的小鼠脾细胞IFN-γ产生,均表现为剂量依赖性的抑制作用,其抑制机制与细胞的活化有关。结论CsA可以剂量依赖的方式抑制小鼠脾细胞表达CD25、CD69及产生IFN-γ。 展开更多

关键词 环孢素A(CsA) 脾细胞 IFN-Γ 小鼠

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^3H-TdR标记人骨髓间充质干细胞移植治疗mdx鼠的实验研究 被引量：6

11

作者 柳太云 李经伦 +8 位作者 姚晓黎 董群伟 苏全喜 冯善伟 李才明 曾缨 刘祖国 张成 刘长征 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2005年第5期498-502,共5页

目的探讨人骨髓间充质干细胞移植mdx鼠能否修复骨骼肌肌膜病变及干细胞在其体内的分布特点.方法用氚-脱氧胸腺嘧啶(3H-TdR)标记人骨髓间充质干细胞(hBM-MSCs),以每只鼠干细胞1×107/0.3 ml经尾静脉注入18只免疫抑制的mdx鼠(8～10周... 目的探讨人骨髓间充质干细胞移植mdx鼠能否修复骨骼肌肌膜病变及干细胞在其体内的分布特点.方法用氚-脱氧胸腺嘧啶(3H-TdR)标记人骨髓间充质干细胞(hBM-MSCs),以每只鼠干细胞1×107/0.3 ml经尾静脉注入18只免疫抑制的mdx鼠(8～10周龄).于移植后24 h、48 h、2周、1月、2月、4月处死鼠,分别测定各组织器官的放射活性;用免疫荧光法检测骨骼肌肌膜营养障碍基因(dystrophin,Dys)表达情况.结果移植后1月,多数组织、器官放射活性显著高于对照组,其中以骨髓、肝、脾放射活性增高更为明显.大多数组织器官放射活性随时间推移逐渐下降,而骨骼肌放射活性的从2周时开始逐渐升高,于1月时达到高峰(27.65±3.53 Bq/mg湿重).1月之后,骨髓、骨骼肌放射活性仍保持较高水平.免疫荧光显示移植后24 h、48 h、2周骨骼肌Dys免疫荧光呈阴性,1月后呈阳性,1月、2月、4月阳性率分别为:6.6%、8.4%、8.9%.结论 hBM-MSCs能植入mdx鼠体内,并融合、分化为骨骼肌,部分修复骨骼肌肌膜病变;hBM-MSCs移植入mdx鼠后早期主要分布在骨髓、肝、脾,后期主要分布在骨髓、骨骼肌. 展开更多

关键词 肌营养不良 间充质干细胞 氚-脱氧胸腺嘧啶

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血管抑制因子在前列腺癌及前列腺增生组织中的表达及意义 被引量：3

12

作者 杨中汉 李朝阳 +6 位作者 杨霞 蔡卫斌 王青松 周世豪 邓春华 高国全 丘少鹏 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期126-129,共4页

【目的】探讨前列腺增生(BPH)和前列腺癌(PCa)组织中血管增生抑制因子,如视网膜色素上皮细胞源因子(PEDF)、血管抑素(angiostatin)、内皮抑素endostatin的表达情况及其血管依赖性生长的分子机制。【方法】收集正常前列腺、前列腺增生和... 【目的】探讨前列腺增生(BPH)和前列腺癌(PCa)组织中血管增生抑制因子,如视网膜色素上皮细胞源因子(PEDF)、血管抑素(angiostatin)、内皮抑素endostatin的表达情况及其血管依赖性生长的分子机制。【方法】收集正常前列腺、前列腺增生和前列腺癌组织标本,RT-PCR技术检测样品中PEDF、angiostatin、endostatin的mRNA表达量,Westernblot技术检测样品中PEDF蛋白的表达量。【结果】和正常前列腺组织相比,PEDF表达量在BPH中无明显变化(P>0.05),在前列腺癌中普遍显著下降(P<0.05);良性前列腺增生组织中endostatin表达量较正常前列腺组织显著升高(P<0.05),前列腺癌比正常前列腺显著升高(P<0.05),而且前列腺癌组织较良性前列腺增生进一步显著增高(P<0.05);三种组织中均未检测到angiostatin的表达。【结论】良性前列腺增生及前列腺癌组织抑制因子表达变化可能和其血管依赖性生长相关;PEDF可能是前列腺组织最主要的血管增生内源性抑制因子。 展开更多

关键词 前列腺增生 前列腺癌 血管增生 抑制因子

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环孢素对正常人PBMCs产生IFN-γ的抑制作用 被引量：2

13

作者 迟秀文 杨培增 吴长有 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期366-370,共5页

【目的】探讨在不同刺激条件下,环孢素(ciclosporine,CsA)对正常人外周血单个核细胞(PBMCs)γ-干扰素(interferon-gamma,IFN-γ)的产生,以及对细胞亚群的影响。【方法】PBMCs在抗CD3单克隆抗体(anti-CD3)、抗CD3和抗CD28(anti-CD28)单... 【目的】探讨在不同刺激条件下,环孢素(ciclosporine,CsA)对正常人外周血单个核细胞(PBMCs)γ-干扰素(interferon-gamma,IFN-γ)的产生,以及对细胞亚群的影响。【方法】PBMCs在抗CD3单克隆抗体(anti-CD3)、抗CD3和抗CD28(anti-CD28)单克隆抗体、IL-12(Th1细胞分化因子)刺激的情况下或在混合淋巴细胞反应中,观察CsA对IFN-γ产生和Th1细胞分化的影响。同时使用流式细胞仪,在单个细胞水平上评价CsA对T淋巴细胞表面活化分子CD25及细胞内细胞因子IFN-γ和IL-2产生的影响。【结果】CsA对由不同条件诱导产生的IFN-γ,均表现为剂量依赖性抑制关系。此外,CsA抑制IL-12诱导的Th1分化。进一步研究结果表明,CsA可抑制CD4+和CD8+T细胞IFN-γ的表达。【结论】CsA剂量依赖性抑制T淋巴细胞的活化,抑制CD4+、CD8+T淋巴细胞产生IFN-γ和Th1细胞的分化,其抑制机理可能与细胞的活化有关。 展开更多

关键词 IFN-Γ PBMCS 环孢素 抑制作用 CD8^+T淋巴细胞 剂量依赖性抑制 正常人 人外周血单个核细胞 抗CD3单克隆抗体 混合淋巴细胞反应 细胞内细胞因子 CD4^+ 细胞分化因子 单个细胞水平 CsA gamma γ-干扰素 流式细胞仪 IL-12

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伏立康唑对眼部常见分离真菌的体外药敏实验研究 被引量：3

14

作者 孙明霞 陈家祺 +3 位作者 刘长秀 江丽芳 陈晓莲 梁洪光 《眼科研究》 CSCD 北大核心 2005年第2期186-188,共3页

目的探讨新一代氮唑类抗真菌药伏立康唑(VCZ)对眼部常见分离真菌的体外抗菌活性,并与两性霉素B(AMB)、氟康唑(FCZ)作对比。方法参照美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)制定的M38-A方案,共对3属43株眼部常见分离真菌进行研究,VCZ、AMB和... 目的探讨新一代氮唑类抗真菌药伏立康唑(VCZ)对眼部常见分离真菌的体外抗菌活性,并与两性霉素B(AMB)、氟康唑(FCZ)作对比。方法参照美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)制定的M38-A方案,共对3属43株眼部常见分离真菌进行研究,VCZ、AMB和FCZ体外单独用药时分别取100%、100%和≥80%的生长抑制为最低抑菌浓度(MIC),质控菌株采用近平滑念珠菌(Candidaparapsilosis,ATCC22019)。结果VCZ对白色念珠菌的MIC90最低(0.016μg/mL),对镰刀菌菌属的MIC90值偏高(4μg/m),对曲霉菌属的MIC50、MIC90分别为0.125μ/mL和1斗g/mL,明显低于AMB(分别为0.5、2μg/mL)。除白色念珠菌外的其他眼部分离菌株对FCZ耐药(MIC90≥128μg/mL)。VCZ对镰刀菌和曲霉菌的体外抑制率均为100%,高于AMB的61.5%和46.7%。结论VCZ对眼部常见分离真菌均有显著的体外抗菌活性,其眼用剂型的开发对临床上治疗真菌性角膜溃疡具有重要的意义。 展开更多

关键词 抗真菌药 伏立康唑 微生物敏感试验

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FK506滴眼液的高效液相色谱分析及稳定性研究 被引量：2

15

作者 陈家祺 费文雷 +2 位作者 庞志清 汤丽芬 叶成添 《眼科研究》 CSCD 北大核心 2004年第4期355-357,共3页

目的　建立FK5 0 6滴眼液含量检测方法并考察其稳定性。方法　采用反相HPLC测定FK5 0 6含量 ;恒温加速法考察制剂对热及强光的稳定性。结果　线性范围为 6 5 5～ 13 1μg/mL ,平均回收率为 99 88% (RSD 2 88% )。FK5 0 6滴眼液对热和... 目的　建立FK5 0 6滴眼液含量检测方法并考察其稳定性。方法　采用反相HPLC测定FK5 0 6含量 ;恒温加速法考察制剂对热及强光的稳定性。结果　线性范围为 6 5 5～ 13 1μg/mL ,平均回收率为 99 88% (RSD 2 88% )。FK5 0 6滴眼液对热和光的稳定性较差 ,预测 2 5℃贮存有效期 70d。结论　反相HPLC分析方法精密、可行。FK5 0 6滴眼液需低温和避光保存。 展开更多

关键词 FK506 滴眼液 高效液相色谱法 稳定性

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中国人前列腺特异膜抗原基因真核表达载体的构建和序列测定 被引量：1

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作者 曹开源 戴淑琴 +4 位作者 徐霖中 袁广卿 黄小荣 丘少鹏 郭琳洁 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期1009-1012,共4页

目的 :构建中国人前列腺特异膜抗原 (PSMA)基因编码区序列的真核表达载体并进行序列测定。方法 :从前列腺癌组织中提取总RNA ,采用RT -PCR技术扩增前列腺特异膜抗原的基因编码区序列 ,将序列定向克隆至真核表达载体pcDNA3 0 ,并进行序... 目的 :构建中国人前列腺特异膜抗原 (PSMA)基因编码区序列的真核表达载体并进行序列测定。方法 :从前列腺癌组织中提取总RNA ,采用RT -PCR技术扩增前列腺特异膜抗原的基因编码区序列 ,将序列定向克隆至真核表达载体pcDNA3 0 ,并进行序列测定。结果 :本实验所扩增的中国人PSMA基因编码区序列与Israeli等报道的序列同源性为 99 7% ,目的基因与载体正确连接。结论 :成功克隆了PSMA编码区序列 ,并构建了其真核表达载体 ,为PSMA基因修饰的树突状细胞疫苗的前列腺癌生物治疗奠定基础。 展开更多

关键词 前列腺特异抗原 逆转录聚合酶链式反应 克隆 分子 序列分析

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hIL-2分泌肽序列在HepG2细胞中对hEndostatin表达和分泌差异的影响

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作者 岳滔 刘鹏 +4 位作者 邓庆丽 张平 吉琼梅 张海涛 朱振宇 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第9期1242-1245,共4页

目的 :了解分泌肽序列在HepG2细胞中对人内皮抑素基因 (hEndostatin)的cDNA表达和分泌差异的影响。方法 :构建不含hIL - 2分泌肽序列的真核表达载体pBlast-hEndo质粒 ,转染人的HepG2细胞株 ,用RT -PCR的方法检测HepG2 (pBlast-hIL2 -hEn... 目的 :了解分泌肽序列在HepG2细胞中对人内皮抑素基因 (hEndostatin)的cDNA表达和分泌差异的影响。方法 :构建不含hIL - 2分泌肽序列的真核表达载体pBlast-hEndo质粒 ,转染人的HepG2细胞株 ,用RT -PCR的方法检测HepG2 (pBlast-hIL2 -hEndo) ,HepG2 (pBlast-hEndo) ,HepG2 (pBlast-Mcs)和HepG2中hEndostatin的mR NA表达水平 ,及制备 4种细胞的总蛋白和收集各自的培养上清 ,进行Westernblot分析蛋白表达和分泌的差异。结果 :发现HepG2 (pBlast-hIL2 -hEndo)中hEndostatin的mRNA的水平显著高于HepG2 (pBlast -hEndo)。而仅在HepG2(pBlast-hIL - 2 -hEndo)的细胞总蛋白和上清 ,及HepG2 (pBlast -hEndo)的细胞总蛋白中检测到hEndostatin表达 ,在其它各株细胞总蛋白及上清中 ,未检测到hEndostatin。结论 :hIL - 2分泌肽序列能促进hEndostatin基因在HepG2细胞中表达及分泌。 展开更多

关键词 内皮抑素 肿瘤血管生成 信号肽 白细胞介素2

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钙调蛋白在大鼠晶状体生长发育和白内障形成中作用的研究 被引量：2

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作者 王晓贞 刘奕志 顾熊飞 《眼科研究》 CSCD 北大核心 2004年第3期236-239,共4页

目的　探讨钙调蛋白 (CaM)活性变化在大鼠晶状体生长发育和白内障形成中的作用。方法　从大鼠脑组织中提取钙调蛋白 ,从牛心中提取钙调蛋白依赖型磷酸二酯酶 (PDE Ⅰ) ,测定不同生长发育阶段和硒性白内障大鼠晶状体中钙调蛋白的相对活... 目的　探讨钙调蛋白 (CaM)活性变化在大鼠晶状体生长发育和白内障形成中的作用。方法　从大鼠脑组织中提取钙调蛋白 ,从牛心中提取钙调蛋白依赖型磷酸二酯酶 (PDE Ⅰ) ,测定不同生长发育阶段和硒性白内障大鼠晶状体中钙调蛋白的相对活性。结果　钙调蛋白相对活性随大鼠年龄增长下降 ,硒性白内障晶状体中钙调蛋白相对活性高于同年龄正常晶状体。结论　钙调蛋白参与晶状体的生长发育过程 ,钙调蛋白相对活性升高是白内障形成的原因之一。 展开更多

关键词 晶状体 钙调蛋白 发育 白内障

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