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碱性成纤维细胞生长因子对大鼠骨髓间质干细胞增殖的影响 被引量:12
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作者 刘爱军 项平 +1 位作者 黄锦桃 李海标 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期508-511,共4页
【目的】研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对大鼠骨髓基质干细胞(MSC)增殖的影响。【方法】用α-MEM冲洗骨髓腔,收集骨髓细胞悬液,接种在塑料培养瓶中,经体外扩增、纯化,观察其生长特性,用免疫组织化学SABC法检测波形蛋白和纤粘连蛋白... 【目的】研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对大鼠骨髓基质干细胞(MSC)增殖的影响。【方法】用α-MEM冲洗骨髓腔,收集骨髓细胞悬液,接种在塑料培养瓶中,经体外扩增、纯化,观察其生长特性,用免疫组织化学SABC法检测波形蛋白和纤粘连蛋白的表达,并研究不同浓度bFGF对MSC生长曲线和克隆形成率的影响。【结果】原代培养时形成由基质干细胞组成的细胞集落,细胞集落14d时接近融合,传代后细胞体积变大,约5~7d传代1次;免疫组化显示MSC呈波形蛋白阳性,而纤粘连蛋白阴性。浓度10ng/mL和20ng/mLbFGF组的MSC的细胞数和克隆形成率比5ng/mLbFGF组和对照组(无bFGF)明显增加,具有高度显著性(P<0.01)。【结论】bFGF可明显促进MSC的增殖。 展开更多
关键词 FGF 增殖 大鼠 集落 克隆形成率 纤粘连蛋白 碱性成纤维细胞生长因子 细胞体积 传代 纯化
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β-巯基乙醇和bFGF分别诱导大鼠骨髓基质干细胞成神经元样细胞的生物学性状 被引量:5
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作者 冯英 王会军 +1 位作者 黄锦涛 谢富康 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期28-32,共5页
【目的】比较β-巯基乙醇(BME)和bFGF分别诱导大鼠骨髓基质干细胞(MSC)所分化神经元样细胞的生物学性状。【方法】BME和bFGF分别作用于大鼠的MSC,分别于9h和5d后,进行神经元样细胞的细胞计数,然后用免疫荧光进行神经元特异性蛋白NF200... 【目的】比较β-巯基乙醇(BME)和bFGF分别诱导大鼠骨髓基质干细胞(MSC)所分化神经元样细胞的生物学性状。【方法】BME和bFGF分别作用于大鼠的MSC,分别于9h和5d后,进行神经元样细胞的细胞计数,然后用免疫荧光进行神经元特异性蛋白NF200的鉴定,RT-PCR的方法分析神经元特异性基因NF的表达;Western blotting对检测神经元特异性蛋白NF200的表达。【结果】BME诱导的细胞在加入药物1h后形态发生改变,9h时有突起伸出,胞体变亮;bFGF诱导的细胞在诱导后第3天开始有突起伸出,呈神经元样,第5天突起之间相互连接,第7天胞体死亡;而两种药物所分化的神经元样细胞NF200的免疫荧光均成阳性,但bFGF诱导的神经元样细胞的阳性率要显著高于BME所诱导的神经元样细胞;在RT-PCR中,bFGF诱导的神经元样细胞神经元特异性基因NF200的表达要高于BME所诱导的细胞;western blotting中,bFGF诱导的神经元样细胞神经元特异性蛋白NF200的表达要高于BME所诱导的细胞。【结论】bFGF和BME均可诱导MSC分化为神经元样细胞。但bFGF所诱导的神经元样细胞在从形态上更接近于神经元,而神经元特异性基因NF200mRNA及神经元特异性蛋白NF200蛋白的表达,均高于BME所诱导的细胞。 展开更多
关键词 骨髓基质干细胞 神经元 诱导
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ES细胞源性表皮干细胞与类真皮构成皮肤类似物的分化 被引量:4
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作者 刘爱军 黄锦桃 李海标 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期11-14,共4页
【目的】以ES细胞源性表皮干细胞为种子细胞构建皮肤类似物,探讨其在皮下的分化潜能。【方法】Hoechst33342标记E14-ES细胞,经羊膜诱导4d后,形成表皮干细胞克隆,并以其作为种子细胞,取129胎鼠成纤维细胞与复合凝胶-明胶海绵复合,形成皮... 【目的】以ES细胞源性表皮干细胞为种子细胞构建皮肤类似物,探讨其在皮下的分化潜能。【方法】Hoechst33342标记E14-ES细胞,经羊膜诱导4d后,形成表皮干细胞克隆,并以其作为种子细胞,取129胎鼠成纤维细胞与复合凝胶-明胶海绵复合,形成皮肤类似物,埋植于129小鼠皮下组织。术后2周、4周、6周、8周取材,做HE染色观察,β1整合素、CK15、CK19、CEA、CK18免疫组化荧光双标和免疫组化观察。【结果】术后2周和4周,植块内可见单层立方或柱状上皮构成的管状和泡状结构,6周和8周后,可见角化复层上皮、毛囊样、汗腺样、皮脂腺样等结构,免疫双标结果显示,植入2周和4周,带有蓝色核标记的细胞形成的管状或泡状结构呈β1整合素、CK15、CK19、CEA和CK18阳性,6周和8周后,HE染色中汗腺样结构呈CEA、CK18阳性。【结论】ES细胞源性表皮干细胞与类真皮构建的皮肤类似物,在同种小鼠皮下有分为角化复层上皮、汗腺样、毛囊样、皮脂腺样等结构的潜能。 展开更多
关键词 ES细胞 表皮干细胞 皮肤附属结构 定向分化 羊膜
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褪黑激素对新生大鼠神经干细胞向神经元样细胞分化的影响 被引量:4
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作者 胡黎平 谢富康 李海标 《中山医科大学学报》 CSCD 北大核心 2002年第3期180-182,203,共4页
【目的】探讨褪黑激素对体外培养新生大鼠神经干细胞分化的影响。【方法】从新生SD大鼠室管膜下区分离依赖碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)和表皮细胞生长因子 (EGF)生存的神经干细胞进行培养 ,原代及子代细胞鉴定后用于实验。实验细胞... 【目的】探讨褪黑激素对体外培养新生大鼠神经干细胞分化的影响。【方法】从新生SD大鼠室管膜下区分离依赖碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)和表皮细胞生长因子 (EGF)生存的神经干细胞进行培养 ,原代及子代细胞鉴定后用于实验。实验细胞均在无生长因子而含 10mL/L胎牛血清条件下培养 ,经褪黑激素或Luzindole作用 1周后做免疫组织化学染色 ,比较Map2阳性细胞出现率。【结果】①依赖bFGF和EGF生长的神经干细胞体外呈集落样生长 ,表达抗原蛋白巢蛋白(Nestin) ,无生长因子培养基中可分化形成胶质原纤维酸性蛋白 (GFAP)、S10 0蛋白、微管相关蛋白 (Map2 )阳性细胞。②褪黑激素能够提高Map2阳性细胞生成率 (2 3 4 5 % ,2 1 82 % ) (P <0 0 1)。③褪黑激素膜受体竞争性阻断剂Luzindole可阻断高浓度 (10 0 μmol/L)褪黑激素促神经干细胞分化作用 ,但不能抑制低浓度褪黑激素 (10nmol/L)的作用。【结论】褪黑激素能促进神经干细胞向神经元样细胞分化 ,不同浓度褪黑激素可能存在不同的作用机制。 展开更多
关键词 褪黑激素 干细胞/神经 细胞分化
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