体外定向诱导人胚胎干细胞分化为表皮样干细胞的研究 被引量：13

1

作者 撒亚莲 李海标 黄绍良 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期97-99,103,T001,共5页

[目的]探索体外定向诱导人胚胎干细胞(hES细胞)分化为表皮样干细胞的条件,为研究其定向分化机理及寻找新的皮肤组织工程种子细胞奠定基础.[方法]将人胚胎干细胞单独(对照组)或与人羊膜上皮面向上全铺或半铺布半孔底共培养4～5 d,观察其... [目的]探索体外定向诱导人胚胎干细胞(hES细胞)分化为表皮样干细胞的条件,为研究其定向分化机理及寻找新的皮肤组织工程种子细胞奠定基础.[方法]将人胚胎干细胞单独(对照组)或与人羊膜上皮面向上全铺或半铺布半孔底共培养4～5 d,观察其形态变化并分别用β1整合素,CK15及CK19免疫组化检测人胚胎干细胞向表皮样干细胞的分化.[结果]人胚胎干细胞与人羊膜共培养4～5 d后,在人羊膜上皮面形成表皮样干细胞集落,表达高水平的表皮干细胞特异标记物β1整合素、CK15和CK19.在无羊膜覆盖处,细胞贴壁生长,形成单层表皮样细胞,细胞呈多边形,排列紧密,大部分细胞表达β1整合素.对照组大量细胞死亡,未见β1整合素阳性细胞.[结论]在体外人羊膜可定向诱导人胚胎干细胞分化为表皮样干细胞,并提示在羊膜上皮面的细胞克隆可能是表皮样干细胞,而贴壁生长的细胞可能大部分是表皮样瞬间放大细胞. 展开更多

关键词 人 胚胎干细胞 表皮干细胞 分化 羊膜 免疫组织化学

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不同局部穴位电针对大鼠受损伤脊髓组织降钙素基因相关肽表达的影响 被引量：10

2

作者 李淑敏 李文杰 +1 位作者 曾园山 阮经文 《中国康复医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期823-827,共5页

目的:观察不同局部穴位电针对大鼠受损伤脊髓组织降钙素基因相关肽CGRP表达和分布的影响。方法:将25只SD大鼠分为5组:正常对照组、脊髓损伤组、非穴位电针组、夹脊穴电针组和督脉穴电针组。在显微镜下予脊髓全横断术(正常对照组除外),... 目的:观察不同局部穴位电针对大鼠受损伤脊髓组织降钙素基因相关肽CGRP表达和分布的影响。方法:将25只SD大鼠分为5组:正常对照组、脊髓损伤组、非穴位电针组、夹脊穴电针组和督脉穴电针组。在显微镜下予脊髓全横断术(正常对照组除外),自术后第7天分别采用局部选取电针非穴位、电针夹脊穴和电针督脉穴的方法治疗3d(脊髓损伤组不予任何治疗),取材并以免疫荧光组织化学染色的方法观察脊髓背角CGRP阳性染色区面积变化,用蛋白免疫印迹杂交法检测脊髓CGRP含量变化。结果:非穴位电针组和夹脊穴电针组的脊髓背角CGRP含量与脊髓损伤组比较,均有所升高(P<0.05),但其CGRP阳性染色区面积没有明显差异(P>0.05)。督脉穴电针组的脊髓背角CGRP含量和CGRP阳性染色区面积与非穴位电针组、夹脊穴电针组和脊髓损伤组比较,有明显增高、增大(P<0.05)。结论:不同局部穴位电针对大鼠受损伤脊髓组织表达CGRP有不同的影响,其中督脉穴电针能够明显促进大鼠受损伤脊髓组织表达CGRP。 展开更多

关键词 电针 督脉 脊髓损伤 降钙素基因相关肽

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督脉电针与NSCs移植联合应用对大鼠脊髓全横断损伤组织NT-3含量及受体表达的影响 被引量：5

3

作者 陈雅云 曾园山 +2 位作者 张伟 陈玉玲 陈穗君 《中国康复医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期779-781,F0005,共4页

目的:探讨督脉电针与神经干细胞(NSCs)联合应用对大鼠脊髓全横断损伤组织神经营养素-3(NT-3)含量及其受体表达的影响。方法:将30只成年大鼠分为对照14d组、督脉电针14d组(电针14d组)、神经干细胞移植14d组(NSCs14d组)、督脉电针+神经干... 目的:探讨督脉电针与神经干细胞(NSCs)联合应用对大鼠脊髓全横断损伤组织神经营养素-3(NT-3)含量及其受体表达的影响。方法:将30只成年大鼠分为对照14d组、督脉电针14d组(电针14d组)、神经干细胞移植14d组(NSCs14d组)、督脉电针+神经干细胞移植14d组(电针NSCs14d组)、神经干细胞移植30d组(NSCs30d组)和督脉电针+神经干细胞移植30d组(电针NSCs30d组)6组,所有动物均实施T10段脊髓全横断手术,其中电针组和电针NSCs组于术后5d进行电针治疗。结果:①电针NSCs14d组受损伤的脊髓组织含有较高水平的NT-3,其次是电针14d组和NSCs14d组,对照14d组受损伤的脊髓组织含有较低水平的NT-3。②NSCs30d组和电针NSCs30d组脊髓全横断处的移植神经干细胞均有TrkC表达。结论:督脉电针与神经干细胞移植联合应用能够明显增高大鼠脊髓全横断损伤处邻近组织的NT-3水平;在大鼠脊髓损伤处及邻近组织有些移植神经干细胞表达TrkC。 展开更多

关键词 督脉电针 神经干细胞移植 脊髓损伤 神经营养素-3 神经营养素-3受体 大鼠

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人胚胎干细胞源性表皮样干细胞分化潜能 被引量：10

4

作者 撒亚莲 梁玉香 李海标 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期15-18,共4页

[目的]探讨人胚胎干细胞源性表皮样干细胞的分化潜能,为研究其分化的调控机制及寻找新的人皮肤组织工程种子细胞奠定基础。[方法]将人胚胎干细胞与人羊膜共培养4 d,定向诱导其分化为表皮样干细胞克隆,用胰酶消化后移植裸鼠皮下20 d、30 ... [目的]探讨人胚胎干细胞源性表皮样干细胞的分化潜能,为研究其分化的调控机制及寻找新的人皮肤组织工程种子细胞奠定基础。[方法]将人胚胎干细胞与人羊膜共培养4 d,定向诱导其分化为表皮样干细胞克隆,用胰酶消化后移植裸鼠皮下20 d、30 d及50 d。对移植后细胞的分化情况进行了形态学和免疫组织化学观察分析。[结果]人胚胎干细胞源性表皮样干细胞在裸鼠皮下20-30 d后,细胞分化为由单层或复层上皮样细胞构成的管状或泡状结构,它们可分别呈CEA和CK18阳性。种植50 d后,除上述结构外,可见角化复层扁平上皮、毛囊样、汗腺样及皮脂腺样等结构。[结论]研究结果提示人胚胎干细胞源性表皮样干细胞具有分化为角化复层扁平上皮及毛囊样、汗腺样和皮脂腺样等结构的潜能。 展开更多

关键词 人 胚胎干细胞 表皮干细胞 细胞分化

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人羊膜定向诱导胚胎干细胞分化为表皮样细胞机理的初步探讨 被引量：7

5

作者 张仁礼 李海标 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第7期1163-1166,共4页

目的 :初步探讨人羊膜诱导小鼠胚胎干细胞向表皮样细胞定向分化的机理。方法 :小鼠胚胎干细胞与人羊膜在双层 6孔培养板中共培养 4 - 5d ,对照组未加羊膜 ,观察其形态学分化。分别用β1整合素、角蛋白 19/15和套膜蛋白免疫组化检测胚胎... 目的 :初步探讨人羊膜诱导小鼠胚胎干细胞向表皮样细胞定向分化的机理。方法 :小鼠胚胎干细胞与人羊膜在双层 6孔培养板中共培养 4 - 5d ,对照组未加羊膜 ,观察其形态学分化。分别用β1整合素、角蛋白 19/15和套膜蛋白免疫组化检测胚胎干细胞向表皮样细胞的分化。结果 :共培养 4 - 5d后 ,小鼠胚胎干细胞分化为表皮细胞样的单层细胞 ,细胞排列紧密 ,呈多边形 ,免疫组织化学染色显示 ,大部分细胞呈现 β1整合素阳性 ,少数细胞呈角蛋白 19和角蛋白 15阳性 ,未见套膜蛋白阳性细胞 ,对照组大部分细胞死亡 ,存活细胞形态各异 ,未见β1整合素、角蛋白 19/15和套膜蛋白免疫组化染色阳性细胞。结论 展开更多

关键词 胚胎干细胞 羊膜 细胞分化 表皮细胞

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小鼠胚胎干细胞源表皮样细胞β_1整合素的表达与序列分析

6

作者 张仁礼 高劲松 李海标 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期417-420,共4页

【目的】研究小鼠胚胎干细胞源表皮样细胞分化过程中β1整合素(integrinβ1)表达情况与序列分析,为在分子水平上了解胚胎干细胞分化为表皮样干细胞时相关特异性蛋白表达量的变化打下基础。【方法】用双层培养板将小鼠胚胎干细胞与人羊... 【目的】研究小鼠胚胎干细胞源表皮样细胞分化过程中β1整合素(integrinβ1)表达情况与序列分析,为在分子水平上了解胚胎干细胞分化为表皮样干细胞时相关特异性蛋白表达量的变化打下基础。【方法】用双层培养板将小鼠胚胎干细胞与人羊膜共培养4～5d,显微镜下观察其形态分化,分别用免疫组化法和Actin内参照逆转录聚合酶链反应(reversetranscriptionpolymerasechainreaction,RT-PCR)定量检测β1整合素蛋白和mRNA的表达情况,并对RT-PCR产物进行测序,对照组未加羊膜。【结果】与人羊膜共培养4～5d后,ES细胞分化为表皮细胞样的单层细胞,细胞排列紧密,呈多边形;免疫组化结果显示诱导4d后部分细胞呈β1整合素阳性;RT-PCR结果显示实验组β1整合素mRNA有较强的表达;对照组细胞形态各异,不能形成细胞单层,几乎不表达β1整合素,测序及同源性比对结果表明两条扩增序列分别与β1整合素具有100%的同源性。【结论】小鼠ES细胞源表皮样细胞表达较高水平的β1整合素,而未加羊膜诱导的ES细胞几乎不表达β1整合素。 展开更多

关键词 Β1整合素 表达 表皮 干细胞 人羊膜 对照组 RT-PCR 小鼠胚胎 ES细胞 RNA

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督脉电针与神经干细胞移植在脊髓损伤修复中的作用 被引量：17

7

作者 曾园山 李晓滨 +3 位作者 郭家松 陈雅云 丁英 陈玉玲 《中国康复医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期468-470,共3页

关键词 神经干细胞移植 损伤修复 督脉电针 急性脊髓损伤 主要表现 脊髓损害 治疗方法 有效方法 经济负担 生存质量 外伤性 发生率 社会 患者

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神经干细胞与NT-3基因修饰雪旺细胞联合移植促进全横断脊髓损伤大鼠功能修复的实验研究 被引量：15

8

作者 郭家松 曾园山 +4 位作者 李海标 黄文林 李晓君 刘甘泉 李晓滨 《中国康复医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期323-326,共4页

目的:探讨神经干细胞(NSCs)与神经营养素-3(NT-3)基因修饰雪旺细胞(SCs)联合移植对全横断脊髓损伤大鼠的后肢运动及神经传导功能修复的作用。方法:将NSCs与NT-3基因修饰SCs或未基因修饰SCs联合移植,或NSCs单独移植到大鼠全横断性脊髓损... 目的:探讨神经干细胞(NSCs)与神经营养素-3(NT-3)基因修饰雪旺细胞(SCs)联合移植对全横断脊髓损伤大鼠的后肢运动及神经传导功能修复的作用。方法:将NSCs与NT-3基因修饰SCs或未基因修饰SCs联合移植,或NSCs单独移植到大鼠全横断性脊髓损伤处,60d后进行爬网格测验和BBB评分检测运动功能。第67d,进行皮质运动诱发电位(CMEP)和皮质感觉诱发电位(CSEP)检测脊髓的神经传导功能。结果:脊髓损伤大鼠后肢的运动功能及CMEP和CSEP的修复程度依次为NSCs与NT-3基因修饰SCs联合移植组,NSCs与未基因修饰SCs联合移植组,NSCs单独移植组和实验对照组。结论:NSCs与NT-3基因修饰SCs联合移植能够促进脊髓损伤后大鼠的后肢运动及神经传导功能的修复。 展开更多

关键词 NT-3基因修饰 全横断脊髓损伤 联合移植 神经干细胞 功能修复 雪旺细胞 大鼠 实验研究 全横断性脊髓损伤 神经传导功能 NSCs 感觉诱发电位 运动诱发电位 单独移植 运动功能 神经营养素 CSEP 后肢 BBB EP) 对照组 检测

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督脉电针与夹脊电针对受损伤的大鼠脊髓背核神经元存活及其NOS表达的影响比较 被引量：10

9

作者 丁英 曾园山 +2 位作者 陈雅云 张燕青 陈穗君 《中国康复医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期8-10,共3页

目的比较督脉电针和夹脊电针对受损伤的脊髓背核神经元存活及其表达NOS的影响。方法将10只SD雌性大鼠(180—200g)分为督脉电针组和夹脊电针组。将两组动物制备全横断脊髓损伤模型,术后第5d进行电针治疗,一组行督脉电针治疗,另一组行夹... 目的比较督脉电针和夹脊电针对受损伤的脊髓背核神经元存活及其表达NOS的影响。方法将10只SD雌性大鼠(180—200g)分为督脉电针组和夹脊电针组。将两组动物制备全横断脊髓损伤模型,术后第5d进行电针治疗,一组行督脉电针治疗,另一组行夹脊电针治疗。电针治疗30d后,将两组动物灌注、固定和取材,冰冻切片,做NADPH-黄递酶组织化学染色检测脊髓背核神经元一氧化氮合酶(NOS)的活性。分别计数L1脊髓背核存活神经元数目及其表达NOS神经元数。结果督脉电针组L1脊髓背核存活神经元数目是218.50±7.23,表达NOS的神经元数是8.20±0.82,夹脊电针组L1脊髓背核存活神经元数目是188.60±6.48,表达NOS的神经元数是17.80±1.79。督脉电针组L1脊髓背核存活神经元数目多于夹脊电针组(P<0.05),并且督脉电针组L1脊髓背核表达NOS的神经元数明显少于夹脊电针组(P<0.05)。结论督脉电针比夹脊电针能够更好地促进受损伤的脊髓背核神经元存活以及抑制受损伤的脊髓背核神经元表达NOS。 展开更多

关键词 电针 脊髓损伤 背核 神经元存活 一氧化氮合酶

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督脉电针与神经干细胞移植联合应用促进SCI横断大鼠前角运动神经元存活及减轻后肢肌萎缩的研究 被引量：10

10

作者 李晓滨 曾园山 +1 位作者 陈玉玲 陈穗君 《中国康复医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期104-107,共4页

目的:探讨督脉电针与神经干细胞移植联合应用对大鼠脊髓全横断损伤的前角运动神经元存活以及减轻后肢肌萎缩有无促进作用。方法:将正常组、对照组、督脉电针组(电针组)、神经干细胞移植组(NSCs组)和督脉电针+神经干细胞移植组(电针NSCs... 目的:探讨督脉电针与神经干细胞移植联合应用对大鼠脊髓全横断损伤的前角运动神经元存活以及减轻后肢肌萎缩有无促进作用。方法:将正常组、对照组、督脉电针组(电针组)、神经干细胞移植组(NSCs组)和督脉电针+神经干细胞移植组(电针NSCs组)成年大鼠T10脊髓段做全横断损伤,其中NSCs组和电针NSCs组在损伤处移植神经干细胞,电针组和电针NSCs组在术后开始接受督脉电针治疗。所有实验动物在脊髓损伤后存活65天。结果:电针NSCs组大鼠其腰段脊髓受损伤运动神经元的存活数量明显多于其他实验对照组大鼠。电针NSCs组大鼠后肢的股二头肌萎缩程度明显小于其他实验对照组大鼠。结论:督脉电针与神经干细胞移植联合应用能够促进大鼠脊髓全横断损伤后受损伤的脊髓前角运动神经元存活,以及减轻大鼠脊髓全横断损伤后瘫痪的后肢股二头肌的萎缩状况。 展开更多

关键词 督脉 电针 神经干细胞移植 脊髓损伤 运动神经元 肌萎缩 大鼠

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三七总皂甙对成年大鼠视网膜节细胞再生的影响 被引量：11

11

作者 项平 黄锦桃 +1 位作者 李卉 李海标 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期319-321,共3页

【目的】探讨三七总皂甙(tPNS)对成年大鼠视网膜节细胞(RGCs)再生的影响。【方法】成年SD大鼠近端切断视神经(ON)并缝接自体一段坐骨神经(AG),腹腔注射tPNS。动物随机分为AG+溶剂(生理盐水)组;AG+tPNS组;量效关系组。用粒蓝逆行标记再生... 【目的】探讨三七总皂甙(tPNS)对成年大鼠视网膜节细胞(RGCs)再生的影响。【方法】成年SD大鼠近端切断视神经(ON)并缝接自体一段坐骨神经(AG),腹腔注射tPNS。动物随机分为AG+溶剂(生理盐水)组;AG+tPNS组;量效关系组。用粒蓝逆行标记再生的RGCs,在荧光镜下观察视网膜平铺片再生RGCs的数量变化。【结果】①AG+溶剂组术后3和4周,每个视网膜再生的节细胞数分别为698±111和568±107;②在上述两个时间点AG+tPNS组每个视网膜再生的节细胞数分别为1656±135和1329±144约为对照组的2倍,P<0.05。【结论】三七总皂甙可促进视网膜节细胞再生。 展开更多

关键词 三七总皂甙 成年大鼠 况网膜 节细胞再生 tPNS

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缬草对慢性应激导致的抑郁大鼠体质量和行为的影响 被引量：9

12

作者 唐久余 曾园山 +3 位作者 陈巧格 秦亚静 陈穗君 钟志强 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期541-545,共5页

【目的】探讨缬草对慢性应激导致的抑郁大鼠体质量和行为的影响。【方法】70只大鼠随机分为低、中和高剂量缬草模型组、阳性对照模型组、阴性对照模型组、未用药模型组和正常对照组各10只。给予各模型组大鼠慢性应激4周建立抑郁症模型... 【目的】探讨缬草对慢性应激导致的抑郁大鼠体质量和行为的影响。【方法】70只大鼠随机分为低、中和高剂量缬草模型组、阳性对照模型组、阴性对照模型组、未用药模型组和正常对照组各10只。给予各模型组大鼠慢性应激4周建立抑郁症模型。模型建立后除未用药模型组大鼠正常饲养外,其余6组相应灌服低、中和高剂量缬草、氟西汀(阳性对照)和羧甲基纤维素钠(阴性对照)等药物3周。每周测定大鼠的体质量、自来水摄取量和10g/L糖水摄取量。【结果】灌服低、中和高剂量缬草以及阳性对照药氟西汀均不能促使抑郁大鼠的体质量恢复至正常大鼠水平。在整个实验期间,7组大鼠之间自来水摄取量的差异无统计学意义。氟西汀与低剂量缬草能够促使抑郁大鼠的糖水摄取量恢复性增加到正常大鼠水平。【结论】一定剂量的缬草能够促使抑郁大鼠恢复正常的行为活动。 展开更多

关键词 慢性应激 抑郁症 缬草 体质量 行为学

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神经营养素-3基因修饰雪旺细胞和神经营养素-3受体基因修饰脊髓间充质干细胞联合移植促进脊髓损伤大鼠神经元存活的研究 被引量：6

13

作者 张燕青 曾园山 +2 位作者 曾湘 丁英 李燕 《中国康复医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期577-581,I0001,共6页

目的:探讨神经营养素-3(NT-3)基因修饰雪旺细胞(SCs)和神经营养素-3受体(TrkC)基因修饰骨髓间充质干细胞(MSCs)联合移植对全横断脊髓损伤(SCI)大鼠的大脑皮质感觉运动区、红核和背核受损伤神经元存活的影响,为细胞治疗和基因治疗的临床... 目的:探讨神经营养素-3(NT-3)基因修饰雪旺细胞(SCs)和神经营养素-3受体(TrkC)基因修饰骨髓间充质干细胞(MSCs)联合移植对全横断脊髓损伤(SCI)大鼠的大脑皮质感觉运动区、红核和背核受损伤神经元存活的影响,为细胞治疗和基因治疗的临床应用提供依据。方法:将含有NT-3-SCs和TrkC-MSCs的PLGA高分子支架移植到大鼠脊髓全横断损伤处。在术后第67天,取其大脑和脊髓进行冷冻切片。用免疫荧光组织化学染色方法,检测SCI处SCs和MSCs的存活及其外源性基因的表达,并计算大脑皮质感觉运动区内锥体细胞层、中脑红核和L1脊髓背核的神经元数量。结果:2个月后,可见SCI处有移植的SCs和MSCs,其中转染的外源性基因NT-3和TrkC可在移植细胞内表达。NT-3-SCs+TrkC-MSCs移植组大脑皮质感觉运动区内锥体细胞层、中脑红核和L1脊髓背核的神经元数量明显高于其他组。结论:NT-3基因修饰SCs和TrkC基因修饰MSCs联合移植能够促进全横断SCI大鼠的大脑皮质感觉运动区、中脑红核和脊髓背核受损伤神经元的存活。 展开更多

关键词 骨髓间充质干细胞 雪旺细胞 神经营养素-3 神经营养素-3受体 脊髓损伤 大脑皮质 红核 背核

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体外培养的嗅鞘细胞能够促进骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞 被引量：6

14

作者 张燕青 曾园山 +3 位作者 张静 丁英 闫清 陈穗君 《中国神经精神疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期612-614,共3页

目的探讨体外培养的嗅鞘细胞(OECs)对骨髓间充质干细胞(MSCs)分化的影响。方法实验分为OECs+MSCs共培养组和MSCs单独培养组,在7d和14d两时间点观察MSCs的分化情况。用p75抗体免疫细胞化学染色鉴定OECs细胞的纯度;用巢蛋白(nestin)、神... 目的探讨体外培养的嗅鞘细胞(OECs)对骨髓间充质干细胞(MSCs)分化的影响。方法实验分为OECs+MSCs共培养组和MSCs单独培养组,在7d和14d两时间点观察MSCs的分化情况。用p75抗体免疫细胞化学染色鉴定OECs细胞的纯度;用巢蛋白(nestin)、神经丝蛋白(NF)、微管相关蛋白2(MAP2)、胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)、突触后膜致密区蛋白(PSD)等抗体免疫细胞化学染色鉴定已分化的细胞表型。结果体外培养的MSCs经OECs诱导后分化为神经元样细胞,这些细胞能够表达NF、MAP2和PSD等神经元标记物,而不表达星形胶质细胞标记物GFAP。在培养7d,MSCs+OECs7d组的MSCs分化为神经元样细胞的百分率与MSCs7d组比较有明显增高。在培养14d,MSCs+OECs14d组的MSCs分化为神经元样细胞的百分率与MSCs14d组比较,也有明显增高。结论体外培养的嗅鞘细胞能够促进骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞。 展开更多

关键词 骨髓间充质干细胞 嗅鞘细胞 细胞共培养 细胞分化 神经元样细胞

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NT-3基因修饰施万细胞促进神经干细胞体外分化为神经元样细胞 被引量：9

15

作者 郭家松 曾园山 +2 位作者 李海标 黄文林 刘然义 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期26-30,共5页

目的观测神经营养素-3(NT-3)基因修饰施万细胞(SCs)对神经干细胞体外分化为神经元样细胞的影响。方法神经干细胞(NSCs)分别与NT-3基因修饰SCs(NT-3-SCs)、LacZ基因基因修饰SCs(LacZ-SCs)和SCs在体外共培养,7d后用免疫组化方法观测NSCs... 目的观测神经营养素-3(NT-3)基因修饰施万细胞(SCs)对神经干细胞体外分化为神经元样细胞的影响。方法神经干细胞(NSCs)分别与NT-3基因修饰SCs(NT-3-SCs)、LacZ基因基因修饰SCs(LacZ-SCs)和SCs在体外共培养,7d后用免疫组化方法观测NSCs的分化并计算其中神经元样细胞的分化率。结果NSCs在体外可分化为神经元样细胞(NF阳性)和神经胶质样细胞(GFAP阳性),与未基因修饰的SCs相比,NT-3-SCs能更有效地提高神经元样细胞的分化率,而LacZ-SCs与SCs没有明显区别。结论NT-3-SCs能促进NSCs向神经元样细胞分化。 展开更多

关键词 干细胞 许旺细胞 神经营养素3 神经元样细胞

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黄连素诱导大鼠骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞 被引量：31

16

作者 项平 李海标 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期51-53,共3页

目的 :黄连素体外定向诱导SD大鼠骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞。方法 :用全骨髓细胞悬液体外扩增和纯化骨髓间质干细胞。选用第 5代以后骨髓间质干细胞进行诱导分化 ,用含 10 μg/L碱性细胞生长因子 (bFGF)的完全培养液预诱导 2 4... 目的 :黄连素体外定向诱导SD大鼠骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞。方法 :用全骨髓细胞悬液体外扩增和纯化骨髓间质干细胞。选用第 5代以后骨髓间质干细胞进行诱导分化 ,用含 10 μg/L碱性细胞生长因子 (bFGF)的完全培养液预诱导 2 4h ,后更换含黄连素的无血清DMEM诱导骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞。免疫组化鉴定神经元烯醇酶 (NSE)、神经丝蛋白 (NF)、胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)的表达。结果 :大鼠骨髓间质干细胞体外扩增第 5代后细胞形态达到均一 ,成梭形。加黄连素诱导 1h -8h ,间质干细胞胞体逐渐增大并伸出细长突起 ,形似神经细胞。免疫组化显示诱导的神经元样细胞NSE、NF表达阳性 ,GFAP阴性。结论 展开更多

关键词 黄连素 大鼠 骨髓间质干细胞 神经元样细胞 细胞分化

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灵芝孢子对妊娠高血压致胎鼠及幼鼠海马NOS表达和学习记忆功能异常的干预作用 被引量：4

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作者 程进军 曾园山 +2 位作者 张惠君 陈穗君 钟志强 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第B03期72-76,共5页

【目的】探讨妊娠高血压对胎鼠及其生后幼鼠大脑海马NOS表达和学习记忆功能的影响以及灵芝孢子的干预作用。【方法】将40只SD妊娠大鼠分为正常对照组、L-NAME+蒸馏水组、L-NAME+精氨酸组、L-NAME+灵芝孢子8g组、L-NAME+灵芝孢子4g组和... 【目的】探讨妊娠高血压对胎鼠及其生后幼鼠大脑海马NOS表达和学习记忆功能的影响以及灵芝孢子的干预作用。【方法】将40只SD妊娠大鼠分为正常对照组、L-NAME+蒸馏水组、L-NAME+精氨酸组、L-NAME+灵芝孢子8g组、L-NAME+灵芝孢子4g组和生理盐水+灵芝孢子8g组,采用血清NO检测、尾动脉血压检测、NADPH酶组织化学染色和Morris水迷宫等技术对孕鼠及其胎鼠和生后幼鼠进行分析。【结果】应用L-NAME后,孕鼠血清NO水平下降和血压上升,其胎鼠和幼鼠的体质量减轻,大脑海马的NOS阳性神经元和NOS阳性微血管先减少后增加,以及其生后幼鼠的空间学习记忆和运动能力下降。应用高剂量灵芝孢子治疗后,孕鼠血清NO水平和血压恢复到正常对照组水平,其胎鼠和幼鼠体质量恢复性增加,大脑海马的NOS阳性神经元和NOS阳性微血管恢复到正常对照组水平,以及其生后幼鼠的空间学习记忆和运动能力恢复性增强。【结论】高剂量灵芝孢子能够干预妊娠高血压引起的胚鼠及其生后幼鼠大脑海马神经元和微血管异常表达NOS,保护出生后幼鼠的学习记忆和运动能力。 展开更多

关键词 妊娠高血压 灵芝孢子 N硝基左旋精氨酸甲酯 一氧化氮合酶 海马神经元 空间学习记忆

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三七总皂甙诱导骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞 被引量：57

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作者 撒亚莲 李海标 《中山医科大学学报》 CSCD 北大核心 2002年第6期409-410,437,共3页

【目的】用三七总皂甙 (totalPanaxnotoginsengsaponins)在体外定向诱导SD青年鼠骨髓间质干细胞 (mesenchy malstemcell,rMSC)分化为神经元样细胞。【方法】用低糖DMEM冲洗骨髓腔 ,收集骨髓细胞悬液 ,接种在塑料培养瓶中。经体外扩增、... 【目的】用三七总皂甙 (totalPanaxnotoginsengsaponins)在体外定向诱导SD青年鼠骨髓间质干细胞 (mesenchy malstemcell,rMSC)分化为神经元样细胞。【方法】用低糖DMEM冲洗骨髓腔 ,收集骨髓细胞悬液 ,接种在塑料培养瓶中。经体外扩增、纯化 ,选用第 5代后的间质干细胞进行诱导分化。用 10 μg/LbFGF预诱导 2 4h ,更换成含三七总皂甙的无血清培养基DMEM诱导间质干细胞分化为神经元样细胞。用免疫组化SABC法鉴定神经丝蛋白 (NF M )、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、巢蛋白 (nestin)、微管联合蛋白 2 (MAP 2 )、生长相关蛋白 4 3(GAP 4 3)、胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)的表达。【结果】第5代间质干细胞形态达到均一 ,呈梭形。用三七总皂甙诱导 30min到 5h ,间质干细胞胞体逐渐增大并伸出细长突起 ,形似神经细胞。免疫组化显示NF M、NSE、MAP 2、GAP 4 3、nestin表达阳性 ,而GFAP阴性。【结论】三七总皂甙可诱导骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞。 展开更多

关键词 三七总皂甙 骨髓间质干细胞 分化 神经元样细胞

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人原始生殖细胞分离培养的初步研究 被引量：4

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作者 撒亚莲 黄锦桃 李海标 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期325-328,共4页

[目的]探讨分离培养人原始生殖细胞的最佳条件。[方法]用胰蛋白酶消化5～9周人流组织中的人胚生殖嵴,获取人原始生殖细胞。以小鼠胚胎成纤维细胞作饲养层,在高糖DMEM培养基中添加10μmol/L福司克林(forskolin)和5～μg/L碱性成纤维细胞... [目的]探讨分离培养人原始生殖细胞的最佳条件。[方法]用胰蛋白酶消化5～9周人流组织中的人胚生殖嵴,获取人原始生殖细胞。以小鼠胚胎成纤维细胞作饲养层,在高糖DMEM培养基中添加10μmol/L福司克林(forskolin)和5～μg/L碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的培养液中培养、传代,并对子代细胞进行碱性磷酸酶活性检测和体外分化实验。[结果]原代培养时形成许多大小不等,形态各异的由人原始生殖细胞组成的集落,约5～7d传代。传代后,集落生长,变大。细胞培养到第七代,检测碱性磷酸酶染色为强阳性,体外分化实验有拟胚体形成。[结论]人原始生殖细胞可以用胰蛋白酶消化分离培养。用高糖DMEM培养基,添加forskolin和bFGF有利于人原始生殖细胞增殖。体外分化实验初步证实人原始生殖细胞具有多向分化潜能。 展开更多

关键词 人原始生殖细胞 细胞培养 胰蛋白酶消化法 福司克林 碱性成纤维细胞生长因子 高糖DMEM培养基

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成年SD鼠骨髓基质干细胞向神经元样细胞分化过程中分化与凋亡关系的研究 被引量：10

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作者 张蒙夏 谢富康 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期32-35,I003,共5页

目的 :探讨体外诱导骨髓基质干细胞向神经元样细胞分化过程中分化和凋亡间的关系 ,为进一步延长神经元样细胞的存活提供理论和实验依据。方法 :采用全骨髓法分离培养成年SD鼠骨髓基质干细胞至第 5代 ,以 β-巯基乙醇 (1mmol/L)及维甲酸 ... 目的 :探讨体外诱导骨髓基质干细胞向神经元样细胞分化过程中分化和凋亡间的关系 ,为进一步延长神经元样细胞的存活提供理论和实验依据。方法 :采用全骨髓法分离培养成年SD鼠骨髓基质干细胞至第 5代 ,以 β-巯基乙醇 (1mmol/L)及维甲酸 (RA ,1 0 - 6 mol/L)诱导分化 ,于诱导后 1h、3h、5h分别行神经元特异性抗原MAP- 2免疫组化鉴定 ,并计数神经元样细胞数 ,计算分化率。核荧光染料DAPI检测诱导后 5h和 2 4h细胞核的凋亡特异性形态学改变 ,流式细胞仪对细胞凋亡峰的分析检测诱导后 1h、3h、5h细胞凋亡率。结果 :成年鼠骨髓基质干细胞经 β -巯基乙醇 (1mmol/L)及维甲酸 (RA ,1 0 - 6 mol/L)诱导 30min后可见神经元样细胞出现 ,经MAP - 2免疫组化鉴定 ,此类细胞呈阳性 ,诱导后 1h、3h、5h神经元样细胞分化率分别为 41 %、44 %、73 %和 2 4 %、37%、61 %。但诱导后 5h见细胞漂浮并死亡 ,此时DAPI染色显示部分细胞核浓缩 ,出现核碎片。流式细胞仪检测经 β -巯基乙醇诱导后 1h、3h、5h细胞的凋亡率分别为 1 .5 %、6 .1 %、2 1 .5 % ,经RA诱导后的凋亡率分别为 1 .5 %、1 .7%、1 2 .3 %。结论 :①β -巯基乙醇及RA诱导骨髓基质干细胞分化成为神经元样细胞的能力不同。 展开更多

关键词 骨髓基质干细胞 神经元样 细胞分化 免疫组织化学 流式细胞术 中枢神经系统疾病

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