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华支睾吸虫钙调节蛋白的生物学特性及与肝纤维化的关系
被引量：
7
1
作者
郑明慧
胡坤华
+1 位作者
刘炜
余新炳
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第5期659-664,共6页
目的：对华支睾吸虫成虫（Clonorchis sinensis, Cs）钙调节蛋白（CaM）进行生物学及功能分析，以确定其在肝纤维化中的作用。方法从Cs cDNA质粒文库中寻找CsCaM全长序列，以BLASTx搜索其同源序列并进行比对分析。以生物信息学进行同源...
目的：对华支睾吸虫成虫（Clonorchis sinensis, Cs）钙调节蛋白（CaM）进行生物学及功能分析，以确定其在肝纤维化中的作用。方法从Cs cDNA质粒文库中寻找CsCaM全长序列，以BLASTx搜索其同源序列并进行比对分析。以生物信息学进行同源比对、理化性质分析及功能域预测。以分子生物学方法进行原核克隆，大肠杆菌表达，亲和层析纯化，并将纯化蛋白免疫大鼠，产生多克隆抗体。ELISA检测CsCaM抗体滴度及产生曲线。免疫印迹实验分析CsCaM重组蛋白纯化及其抗体识别效果。免疫组化分析其组织定位；腹腔注射法建立CsCaM致大鼠肝纤维化模型。结果重组、表达及纯化了CsCaM，其编码150位氨基酸，理论相对分子质量23400。结构域预测其具有EF手位模序。pET-30a-CsCaM重组质粒其目的蛋白表达于宿主菌BL21 E. coli上清，相对分子质量约23400。总IgG抗体滴度于2~4周达较高峰，效价大于1∶51200。免疫组织化学定位显示CsCaM在成虫睾丸表达丰富。CsCaM腹腔注射大鼠的肝脏均显示不同程度病变，HE染色可见炎症反应较严重，可见气球样变、门管区炎及碎片状坏死；网状纤维染色显示小胆管周围胶原增生，有轻到中度纤维化。结论 CsCaM促进大鼠肝脏炎症病变及纤维化的作用，提示其可能参与了华支睾吸虫病致肝纤维化的作用。
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关键词
华支睾吸虫
钙调节蛋白
肝纤维化
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职称材料
华支睾吸虫膜抗原/排泄分泌抗原酸性磷酸酶的克隆、表达、生物学特征分析及组织定位
被引量：
3
2
作者
郑明慧
胡坤华
+2 位作者
张彤
刘炜
余新炳
《中国病理生理杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第11期2059-2065,共7页
目的:对华支睾吸虫(Clonorchis sinensis,Cs)成虫酸性磷酸酶(acid phosphatase,AP)进行克隆、表达、生物学特征分析、组织定位及膜抗原/排泄分泌抗原鉴定。方法:对Cs AP进行生物信息学、分子生物学、免疫组化及明胶酶谱分析。结果:从Cs ...
目的:对华支睾吸虫(Clonorchis sinensis,Cs)成虫酸性磷酸酶(acid phosphatase,AP)进行克隆、表达、生物学特征分析、组织定位及膜抗原/排泄分泌抗原鉴定。方法:对Cs AP进行生物信息学、分子生物学、免疫组化及明胶酶谱分析。结果:从Cs c DNA文库中筛选出编码AP新基因,全长1 410 bp,重组并由大肠杆菌表达、纯化,得到分子量为55 k D的重组蛋白Cs AP。Western blotting分析表明,Cs AP既是膜抗原又是分泌排泄抗原;免疫组化显示,Cs AP荧光显示于成虫的表皮层和肠支,在囊蚴也有显示,在雷蚴和尾蚴未显示荧光;ELISA分析表明Cs AP识别华支睾吸虫病人和日本血吸虫病人存在吸虫间的交叉免疫反应,Cs AP及粗抗原识别轻、中、重度感染程度华支睾吸虫病人的差别不明显。重组蛋白免疫大鼠后,总Ig G抗体滴度于3周达较高峰,抗体效价大于1∶25 600。明胶降解实验表明:Cs AP具降解胶原能力。结论:上述结果表明,Cs AP在大肠杆菌中高效表达,具有较好的免疫原性,但血清诊断价值不理想;Cs AP可能既是膜抗原,又是排泄分泌抗原。
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关键词
华支睾吸虫
酸性磷酸酶
排泄分泌抗原
膜抗原
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职称材料
题名
华支睾吸虫钙调节蛋白的生物学特性及与肝纤维化的关系
被引量：
7
1
作者
郑明慧
胡坤华
刘炜
余新炳
机构
中山大学
孙逸仙纪念医院检验科
中山大学中山医学院热带病防治重点实验室病原生物学教研室
中山大学
药理学
教研室
第三附属医院广东省肝脏疾病研究
重点
实验室
出处
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第5期659-664,共6页
基金
国家自然科学青年科学基金(81401689)
广东省医学科研基金(B2014137)
中央高校基本科研业务费专项资金资助(14ykpy23)~~
文摘
目的：对华支睾吸虫成虫（Clonorchis sinensis, Cs）钙调节蛋白（CaM）进行生物学及功能分析，以确定其在肝纤维化中的作用。方法从Cs cDNA质粒文库中寻找CsCaM全长序列，以BLASTx搜索其同源序列并进行比对分析。以生物信息学进行同源比对、理化性质分析及功能域预测。以分子生物学方法进行原核克隆，大肠杆菌表达，亲和层析纯化，并将纯化蛋白免疫大鼠，产生多克隆抗体。ELISA检测CsCaM抗体滴度及产生曲线。免疫印迹实验分析CsCaM重组蛋白纯化及其抗体识别效果。免疫组化分析其组织定位；腹腔注射法建立CsCaM致大鼠肝纤维化模型。结果重组、表达及纯化了CsCaM，其编码150位氨基酸，理论相对分子质量23400。结构域预测其具有EF手位模序。pET-30a-CsCaM重组质粒其目的蛋白表达于宿主菌BL21 E. coli上清，相对分子质量约23400。总IgG抗体滴度于2~4周达较高峰，效价大于1∶51200。免疫组织化学定位显示CsCaM在成虫睾丸表达丰富。CsCaM腹腔注射大鼠的肝脏均显示不同程度病变，HE染色可见炎症反应较严重，可见气球样变、门管区炎及碎片状坏死；网状纤维染色显示小胆管周围胶原增生，有轻到中度纤维化。结论 CsCaM促进大鼠肝脏炎症病变及纤维化的作用，提示其可能参与了华支睾吸虫病致肝纤维化的作用。
关键词
华支睾吸虫
钙调节蛋白
肝纤维化
Keywords
Clonorchis sinensis
calmodulin
hepatic fibrosis
分类号
R575.2 [医药卫生—消化系统]
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题名
华支睾吸虫膜抗原/排泄分泌抗原酸性磷酸酶的克隆、表达、生物学特征分析及组织定位
被引量：
3
2
作者
郑明慧
胡坤华
张彤
刘炜
余新炳
机构
中山大学
孙逸仙纪念医院检验科
中山大学中山医学院热带病防治重点实验室病原生物学教研室
中山大学
中山医学院
药理学
教研室
中山大学
第三附属医院广东省肝病
重点
实验室
出处
《中国病理生理杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第11期2059-2065,共7页
基金
国家自然科学青年科学基金资助项目(No.81401689)
广东省医学科研基金资助项目(No.B2014137)
中央高校基本科研业务费专项资金资助(No.14ykpy23)
文摘
目的:对华支睾吸虫(Clonorchis sinensis,Cs)成虫酸性磷酸酶(acid phosphatase,AP)进行克隆、表达、生物学特征分析、组织定位及膜抗原/排泄分泌抗原鉴定。方法:对Cs AP进行生物信息学、分子生物学、免疫组化及明胶酶谱分析。结果:从Cs c DNA文库中筛选出编码AP新基因,全长1 410 bp,重组并由大肠杆菌表达、纯化,得到分子量为55 k D的重组蛋白Cs AP。Western blotting分析表明,Cs AP既是膜抗原又是分泌排泄抗原;免疫组化显示,Cs AP荧光显示于成虫的表皮层和肠支,在囊蚴也有显示,在雷蚴和尾蚴未显示荧光;ELISA分析表明Cs AP识别华支睾吸虫病人和日本血吸虫病人存在吸虫间的交叉免疫反应,Cs AP及粗抗原识别轻、中、重度感染程度华支睾吸虫病人的差别不明显。重组蛋白免疫大鼠后,总Ig G抗体滴度于3周达较高峰,抗体效价大于1∶25 600。明胶降解实验表明:Cs AP具降解胶原能力。结论:上述结果表明,Cs AP在大肠杆菌中高效表达,具有较好的免疫原性,但血清诊断价值不理想;Cs AP可能既是膜抗原,又是排泄分泌抗原。
关键词
华支睾吸虫
酸性磷酸酶
排泄分泌抗原
膜抗原
Keywords
Clonorchis sinensis
Acid phosphatase
Excretory-secretory antigen
Membrane antigen
分类号
R383.22 [医药卫生—医学寄生虫学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
华支睾吸虫钙调节蛋白的生物学特性及与肝纤维化的关系
郑明慧
胡坤华
刘炜
余新炳
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015
7
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下载PDF
职称材料
2
华支睾吸虫膜抗原/排泄分泌抗原酸性磷酸酶的克隆、表达、生物学特征分析及组织定位
郑明慧
胡坤华
张彤
刘炜
余新炳
《中国病理生理杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014
3
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