重组人蛋白激酶CK2β亚基cDNA的克隆与测序 被引量：33

1

作者 刘新光 梁念慈 +1 位作者 马涧泉 刘文 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1999年第2期228-231,共4页

蛋白激酶ＣＫ２是一种存在的信使非依赖性丝／苏氨酸蛋白激酶．它是由两个催化亚基（α或α′）和两个调节亚基（β）组成的不均一四聚体．用反转录ＰＣＲ从ＨＬ－６０细胞中获得了人蛋白激酶ＣＫ２β亚基编码区ｃＤＮＡ，将ＮｄｅⅠ／... 蛋白激酶ＣＫ２是一种存在的信使非依赖性丝／苏氨酸蛋白激酶．它是由两个催化亚基（α或α′）和两个调节亚基（β）组成的不均一四聚体．用反转录ＰＣＲ从ＨＬ－６０细胞中获得了人蛋白激酶ＣＫ２β亚基编码区ｃＤＮＡ，将ＮｄｅⅠ／ＨｉｎｄⅢ双酶切ＰＣＲ产物连接到表达载体ｐＴ７－７的ＮｄｅⅠ／ＨｉｎｄⅢ双酶切位点中．转化感受态细菌ＤＨ５α获得转化子，阳性筛选率为７２％．限制性酶切分析结果表明，插入片段和重组质粒的大小与理论推测值相符．随机挑选４个阳性质粒测定其插入片段ＤＮＡ序列，结果显示有２个含有正确插入的人蛋白激酶ＣＫ２βｃＤＮＡ，命名为ｐＴＣＫＢ．其余２个克隆分别存在１个和２个点突变，即在其编码区ｃｏｎｄｏｎ１４８的ＴＣＡ→ＴＴＡ，结果Ｓｅｒ→Ｌｅｕ；另一个则在Ｃｏｎｄｏｎ１４３ＧＴＧ→ＡＴＧ，Ｖａｌ→Ｍｅｔ；Ｃｏｎｄｏｎ１７０ＧＴＧ→ＧＣＧ，Ｖａｌ→Ａｌａ．重组质粒（ｐＴＣＫＢ）克隆的成功，将为在原核细胞中表达蛋白激酶ＣＫ２β亚基以及利用ＣＫ２βｃＤＮＡ作为探针进行深入研究打下基础． 展开更多

关键词 人蛋白激酶CK2 Β亚基 DNA测序 重组 CDNA

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人癌胚抗原-重组痘苗病毒的构建和制备 被引量：20

2

作者 杨洁 罗超权 +2 位作者 卢方安 杨英浩 伍新尧 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1999年第1期54-57,共4页

痘苗病毒的基因组庞大，结构复杂而特殊，不可能将外源基因直接插入它的基因组，必须利用一种特殊的痘苗病毒质粒，才能构建成功重组痘苗病毒．在分析了痘苗病毒质粒ｐＪ１２０〔含有我国天花疫苗－痘苗病毒天坛株７６１的启动子和胸苷... 痘苗病毒的基因组庞大，结构复杂而特殊，不可能将外源基因直接插入它的基因组，必须利用一种特殊的痘苗病毒质粒，才能构建成功重组痘苗病毒．在分析了痘苗病毒质粒ｐＪ１２０〔含有我国天花疫苗－痘苗病毒天坛株７６１的启动子和胸苷激酶（ｔｈｙｍｉｄｉｎｅｋｉｎａｓｅ，简称ＴＫ基因），及含有人癌胚抗原（ｃａｒｃｉｎｏｅｍｂｒｙｎｉｃａｎｔｉｇｅｎ，简称ＣＥＡ）ｃＤＮＡ全序列的质粒ｐ９１０２３Ｂ－ｃｅａ－１７结构的基础上，设计出三步法构建了重组疫苗病毒质粒ｐＪ－ＣＥＡ．经酶切及ＰＣＲ鉴定ｐＪ－ＣＥＡ中ＣＥＡｃＤ－ＮＡ的存在，进一步用同源重组方法构建了表达人ＣＥＡ的重组痘苗病毒，并以人体成纤维细胞作为宿主细胞，对ＣＥＡ－重组痘苗病毒进行了大量培养．再次证实痘苗病毒是良好的真核表达载体，可以高效而准确地表达细胞膜糖蛋白ＣＥＡ． 展开更多

关键词 质粒 癌胚抗原 痘苗病毒 同源重组

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PCR-SSP技术对广东汉族人HLA-DR基因分型 被引量：13

3

作者 罗超权 陈汉奎 +1 位作者 杨英浩 伍新尧 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1998年第1期87-91,共5页

探索具有高分辨率、高特异性和简捷快速的方法对ＨＬＡ－ＤＲ基因分型，为临床器官移植配型和疾病相关性分析提供实用的方法和基础资料．利用ＤＲ１～ＤＲｗ１８序列特异性的１９组引物及１对内参照引物进行ＰＣＲ扩增即ＰＣＲ－ＳＳＰ... 探索具有高分辨率、高特异性和简捷快速的方法对ＨＬＡ－ＤＲ基因分型，为临床器官移植配型和疾病相关性分析提供实用的方法和基础资料．利用ＤＲ１～ＤＲｗ１８序列特异性的１９组引物及１对内参照引物进行ＰＣＲ扩增即ＰＣＲ－ＳＳＰ对ＨＬＡ－ＤＲ进行基因分型，扩增产物经琼脂糖凝胶电泳，溴乙锭染色，在紫外光下观察分型结果．每个被检个体的ＤＲ型别可由特异引物扩增出现的电泳谱带直接判断．双盲检测２２例的结果１００％正确．在１０２例中国广东地区汉族人中，ＤＲ９和ＤＲ２的基因频率最高，分别为０．２２０５和０．１９１２，ＤＲ１０为最低（０．００９８）．与用ＰＣＲ－ＳＳＯ方法分型获得的结果比较，基因型别分布基本一致，但一些等位基因的频率有差异，表明ＨＬＡ－ＤＲ基因频率的分布在不同地区、不同种族的人群间存在着差异．ＰＣＲ－ＳＳＰ法分辨率和特异性虽不及ＰＣＲ－ＳＳＯ法但比血清学方法精细，分型的全过程只需２～４ｈ能满足临床器官移植配型的要求．基因频率调查结果为器官移植配型和疾病相关性分析提供了基础资料． 展开更多

关键词 HLA PCR 基因分型 基因频率 器官移植

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CEA-重组痘苗病毒对CEA阳性肿瘤疗效的实验研究 被引量：5

4

作者 卢方安 杨洁 +4 位作者 郭俊明 杨英浩 伍新尧 罗超权 黄冰 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 1999年第4期302-304,共3页

目的:为探讨CEA-重组痘苗病毒对CEA阳性肿瘤的治疗作用.方法:构建CEA阳性小鼠Hepa肝癌细胞模型(Hepa-CEA);对4组实验鼠进行颈背部皮下注射CEA阳性或CEA阴性同源鼠Hepa肝癌细胞,再接种痘苗病毒(野生型W-VV或重组型CEA-rV)3次:观察动物反... 目的:为探讨CEA-重组痘苗病毒对CEA阳性肿瘤的治疗作用.方法:构建CEA阳性小鼠Hepa肝癌细胞模型(Hepa-CEA);对4组实验鼠进行颈背部皮下注射CEA阳性或CEA阴性同源鼠Hepa肝癌细胞,再接种痘苗病毒(野生型W-VV或重组型CEA-rV)3次:观察动物反应,并在接种癌细胞后每周测量一次皮下肿瘤大小.结果:4组实验鼠颈背部皮下均可见瘤块形成,但3个对照组肿瘤生长迅速,组间差异无统计学意义(P>0.05),而接种Hepa-CEA/CEA-rV组小鼠皮下肿瘤生长缓慢,瘤块较小,与3个对照组比较有统计学上的显著差异(P<0.01),整个实验过程中接种鼠未表现有毒副反应,结论:CEA-rV可能通过诱导机体免疫系统产生CEA特异性的细胞或体液免疫应答反应,对CEA阳性肿瘤的生长明显产生抑制作用. 展开更多

关键词 痘苗病毒 癌胚抗原 肿瘤 免疫疗法 小鼠

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重组人蛋白激酶CK 2α亚基的原核表达、纯化与鉴定 被引量：17

5

作者 刘新光 梁念慈 马涧泉 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 2000年第1期17-22,共6页

将构建成功的人蛋白激酶 CK2 α亚基 c DNA的重组质粒 ,转化大肠杆菌 BL2 1 ( DE3) ,IPTG诱导后获特异高效表达 ,表达蛋白占菌体总蛋白的 30 % ,但大多数重组蛋白以不溶形式存在 .表达产物依次进行 DE- 5 2、P1 1磷酸纤维素和肝素 - Sep... 将构建成功的人蛋白激酶 CK2 α亚基 c DNA的重组质粒 ,转化大肠杆菌 BL2 1 ( DE3) ,IPTG诱导后获特异高效表达 ,表达蛋白占菌体总蛋白的 30 % ,但大多数重组蛋白以不溶形式存在 .表达产物依次进行 DE- 5 2、P1 1磷酸纤维素和肝素 - Sepharose柱层析分离 ,最后从 30 9mg可溶性蛋白质中得到 6.1 mg纯化蛋白 . SDS- PAGE显示纯化的蛋白质为一分子量 4 2 k D的单一蛋白带 .Western- blot的结果证明 :纯化的表达产物与抗人 CK2α抗体可发生特异性免疫反应 . CK2α和β亚基等摩尔分子混合可组成有完全活性的全酶 .重组的 CK2全酶的性质和功能与该酶的已知特性一致 .这些结果证明重组蛋白是人蛋白激酶 CK2 展开更多

关键词 人蛋白激酶CK2α亚基 原核表达 纯化 鉴定

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亚致死量^(60)Coγ射线照射后小鼠骨髓造血细胞程序性死亡特性研究 被引量：8

6

作者 潘景轩 朱振宇 +1 位作者 李树浓 黄绍良 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 1996年第2期195-199,共5页

照射可引起免疫器官萎缩和免疫功能抑制,研究发现其机制为照射后胸腺细胞发生了程序性死亡(programmed cell death,PCD)。骨髓组织对射线也很敏感,造血细胞辐射损伤机制目前尚不清楚。本实验研究从超微结构、DNA裂解、PI染色FACS分析等... 照射可引起免疫器官萎缩和免疫功能抑制,研究发现其机制为照射后胸腺细胞发生了程序性死亡(programmed cell death,PCD)。骨髓组织对射线也很敏感,造血细胞辐射损伤机制目前尚不清楚。本实验研究从超微结构、DNA裂解、PI染色FACS分析等方面,动态地观察了^(60)Coγ射线照射后小鼠骨髓细胞的变化。实验采用成年SPFBALB/c小鼠。2.0,4.0,6.0Gy照射后6小时透射电镜显示细胞出现空泡,有不同程度的固缩;第3,6,9,12,24,36小时测得DNA裂解百分率较对照组增高;27000×g上清DNA琼脂糖凝胶电泳有大量小分子片段,分子量约为180bp的整倍数,呈典型梯状图谱;FACS分析也表明PCD细胞百分率于第3小时增高,渐增强,24小时达高峰。实验表明,亚致死量照射可引起骨髓有核细胞PCD。由于造血干细胞在形态上难以辨认,故射线有无引起造血干细胞PCD尚不能肯定,有待进一步研究。 展开更多

关键词 Γ线照射 骨髓细胞 细胞程序性死亡

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融合基因pCEAcd-tk/前体药物体系的体外旁观者效应的差异性 被引量：4

7

作者 郭语彬 伍新尧 +3 位作者 罗超权 郭俊明 许道松 刘敏 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2000年第1期42-45,共4页

目的：探讨融合自杀基因ｐＣＥＡｃｄ－ｔｋ在导入到肺癌细胞后，其体外旁观者效应的细胞差异性。方法：融合基因ｐＣＥＡｃｄ－ｔｋ提取后，脂质体介导的方法转染到６种肺癌细胞株（ＳＰＣＡ－１，ＧＬＣ－８２，Ａ５４９，ＳＣ，ＨＩ... 目的：探讨融合自杀基因ｐＣＥＡｃｄ－ｔｋ在导入到肺癌细胞后，其体外旁观者效应的细胞差异性。方法：融合基因ｐＣＥＡｃｄ－ｔｋ提取后，脂质体介导的方法转染到６种肺癌细胞株（ＳＰＣＡ－１，ＧＬＣ－８２，Ａ５４９，ＳＣ，ＨＩＡＭＰ，Ｌ－７８），用ＭＴＴ法测定在细胞转染前后对前体药物５－氟胞嘧啶（５－ＦＣ）和丙氧鸟苷（ＧＣＶ）的敏感性和在体外的旁观者效应。结果：①脂质体介导的基因转染效率很低。②在６种已转染的肺癌细胞株中，有２种肺癌细胞株（ＳＰＣＡ－１，Ａ５４９）对前体药物５－ＦＣ和ＧＣＶ有较高的敏感性；③旁观者效应显示，２种细胞株（ＳＰＣＡ－１，ＳＣ）有强的体外旁观者效应，１种细胞株（Ａ５４９）有较强的旁观者效应，而另外３种细胞株（ＧＬＣ－８２，ＨＩＡＭＰ和Ｌ－７８）的旁观者效应较差。结论：不同的细胞在转染了融合自杀基因以后，其体外旁观者效应存在较大的差异。 展开更多

关键词 旁观者效应 基因治疗 pCEAcd-tK 肺肿瘤

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人癌胚抗原cDNA-重组痘苗病毒接种动物的研究 被引量：4

8

作者 杨洁 赖晃文 +3 位作者 罗超权 杨太成 徐国恒 王晓怀 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 1997年第S1期46-48,52,共4页

将构建的表达人癌胚抗原（ＣＥＡ）的重组痘苗病毒接种于纯种新西兰兔，在兔血清中测到高水平的ＣＥＡ以及高滴度抗ＣＥＡ抗体，而在兔的非淋巴组织器官中未检测到ＣＥＡ的表达及免疫复合物的沉积，接种后的兔也没有明显的毒副反应，显... 将构建的表达人癌胚抗原（ＣＥＡ）的重组痘苗病毒接种于纯种新西兰兔，在兔血清中测到高水平的ＣＥＡ以及高滴度抗ＣＥＡ抗体，而在兔的非淋巴组织器官中未检测到ＣＥＡ的表达及免疫复合物的沉积，接种后的兔也没有明显的毒副反应，显示痘苗病毒作载体在体内应用是安全可行的。 展开更多

关键词 痘苗病毒 癌胚抗原/治疗应用 抗体生成/免疫学 接种

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大鼠脑、肝和前列腺一氧化氮合酶mRNA表达 被引量：4

9

作者 高国全 姚志彬 马涧泉 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 1997年第S1期30-33,共4页

根据大鼠脑型一氧化氮合酶（ｂＮＯＳ）和内皮型一氧化氮合酶（ｅＮＯＳ）的ｃＤＮＡ序列分别设计特异引物，用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法检测２种ＮＯＳ在脑、肝脏和前列腺中的ｍＲＮＡ表达差异。结果表明：ｂＮＯＳ在小... 根据大鼠脑型一氧化氮合酶（ｂＮＯＳ）和内皮型一氧化氮合酶（ｅＮＯＳ）的ｃＤＮＡ序列分别设计特异引物，用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法检测２种ＮＯＳ在脑、肝脏和前列腺中的ｍＲＮＡ表达差异。结果表明：ｂＮＯＳ在小脑、大脑皮质和海马中有表达，并且在肝脏和前列腺组织中也有表达：ｅＮＯＳ在肝组织中有表达，在小脑、大脑皮质和海马等脑组织中均有表达，但前列腺组织中未检测到ｍＲＮＡ表达。２种ＮＯＳ在上述组织中的广泛分布提示ＮＯ具有多种复杂的、有时甚至是相反的生理功能可能与ｂＮＯＳ和ｅＮＯＳ甚至诱导型一氧化氮合酶（ｉＮＯＳ）分别或共同作用有关。 展开更多

关键词 一氧化氮 裂合酶类 RNA.信使/生物合成 聚合酶链反应/方法 脑/酶学 肝/酶学 前列腺/酶学 大鼠

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老年大鼠空间记忆减退与cNOS基因表达变化 被引量：4

10

作者 高国全 姚志彬 +1 位作者 张静 马涧泉 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第9期789-792,共4页

目的：从基因表达角度研究原生型NOS（cNOS，包括神经元型nNOS和内应型eNOS）与老年记忆减退发生的关系。方法：用Morris水迷宫将老年大鼠筛选为记忆正常和记忆减退两组，以老年记忆减退大鼠作为老年记忆减退模型；用半定量反转录一聚... 目的：从基因表达角度研究原生型NOS（cNOS，包括神经元型nNOS和内应型eNOS）与老年记忆减退发生的关系。方法：用Morris水迷宫将老年大鼠筛选为记忆正常和记忆减退两组，以老年记忆减退大鼠作为老年记忆减退模型；用半定量反转录一聚合酶链反应（RT－PCR）方法测定nNOS和eNOS的mRNA含量。结果：（1）海马组织中老年记忆正常组和老年记忆减退组较青年组nNOS和eNOSmRNA含量均下降，nNOS以记忆减退组下降更为显著；（2）小脑组织中老年记忆减退组nNOS和eNOSmRNA含量的下降与老年记忆正常组和青年组均有显著差异。（3）额叶组织nNOSmRNA含量三组之间均无显著差异；eNOSmRNA含量老年记忆正常组和老年记忆减退组技青年组均下降，以记忆减退组下降更为显著。结论：老年记忆减退的发生可能与有关脑区cNOS基因表达下降有关。 展开更多

关键词 衰老 记忆 一氧化氮合酶 基因表达 大鼠

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AG1112对重组人蛋白激酶CK2全酶的抑制作用 被引量：3

11

作者 刘新光 梁念慈 马涧泉 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期657-660,共4页

目的　观察Tyrphostin中的AG1112对重组人蛋白激酶CK2全酶的直接作用及其酶动力学机制。方法　利用基因工程克隆、表达和纯化获得重组人蛋白激酶CK2α和 β亚基 ,在体外等摩尔数混合构成有最大生物活性的重组CK2全酶 ,在不同条件下测定... 目的　观察Tyrphostin中的AG1112对重组人蛋白激酶CK2全酶的直接作用及其酶动力学机制。方法　利用基因工程克隆、表达和纯化获得重组人蛋白激酶CK2α和 β亚基 ,在体外等摩尔数混合构成有最大生物活性的重组CK2全酶 ,在不同条件下测定CK2的活性。CK2活性通过测定转移到CK2底物上的 [γ 3 2 P]ATP或 [γ 3 2 P]GTP的 [3 2 P]放射活度来检测。结果　重组人CK2是一种Ca2 + 、cAMP和cGMP等第二信使非依赖性蛋白激酶 ,与天然CK2的性质一致。AG1112对重组人CK2全酶具有很强的抑制作用 ,IC50 为 6 0 μmol·L-1,抑制作用大于CK2已知抑制剂DRB和A3。AG1112对重组人CK2的动力学研究表明 :它与GTP和酪蛋白分别呈混合性和非竞争性抑制作用。结论　由于AG1112对重组人CK2显示出很强的抑制作用 。 展开更多

关键词 蛋白激酶CK2 重组蛋白 全酶 TYRPHOSTINS AG1112 IC50 酶动力学

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系统性红斑狼疮与HLA-DQA1基因的相关性 被引量：6

12

作者 古洁若 余步云 +4 位作者 周俊宜 杨英浩 罗超权 陈国庆 聂泳梅 《中山医科大学学报》 CSCD 1996年第4期286-289,共4页

为了探讨系统性红斑狼疮（ＳＬＥ）易感基因，用ＰＣＲ－ＰＡＧＥ法结合银染色对４１例无亲缘关系广东籍汉人ＳＬＥ患者进行ＨＬＡ－ＤＱＡ１基因分型。结果显示检出的６种ＤＱＡ１等位基因中，ＳＬＥ患者组ＤＱＡ１ｘ０１０１（３９．... 为了探讨系统性红斑狼疮（ＳＬＥ）易感基因，用ＰＣＲ－ＰＡＧＥ法结合银染色对４１例无亲缘关系广东籍汉人ＳＬＥ患者进行ＨＬＡ－ＤＱＡ１基因分型。结果显示检出的６种ＤＱＡ１等位基因中，ＳＬＥ患者组ＤＱＡ１ｘ０１０１（３９．０２％，ＲＲ＝４．０３９，Ｐ＜０．０１，ＥＦ＝０．２９３）显著高于健康人组，对ＳＬＥ有易感倾向，而ＤＱＡ１＊０１０２基因（１．２２％，ＲＲ＝０．０８３，Ｐ＜０．００５，ＰＦ＝０．１１８）则显著下降，对ＳＬＥ可能有抵抗作用。ＤＱＡ１＊０１０１／０１０１和＊０１０１／０４０１两种基因型在ＳＬＥ组显著增高，而ＤＱＡ１＊０１０２／０３０１显著减少；ＤＱＡ１＊０１０１纯合子患者出现ＡＣＬ的阳性率较高，提示两者关系值得进一步探讨。 展开更多

关键词 红斑狼疮 系统性红斑狼疮 病因学 遗传学 基因

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痘苗病毒介导人癌胚抗原的免疫原性实验研究 被引量：2

13

作者 杨洁 江悦华 +4 位作者 罗超权 杨太成 伍新尧 王晓怀 杨英浩 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1997年第5期283-283,共1页

痘苗病毒介导人癌胚抗原的免疫原性实验研究①杨洁江悦华②罗超权杨太成②伍新尧王晓怀③杨英浩（中山医科大学生化教研室，广州５１００８９）①本课题为广东省卫生厅“九五”五个一工程资助项目②广州军区总医院医学实验科，广州５１... 痘苗病毒介导人癌胚抗原的免疫原性实验研究①杨洁江悦华②罗超权杨太成②伍新尧王晓怀③杨英浩（中山医科大学生化教研室，广州５１００８９）①本课题为广东省卫生厅“九五”五个一工程资助项目②广州军区总医院医学实验科，广州５１００６０③广州军区总医院放射肿瘤科... 展开更多

关键词 痘苗病毒 癌胚抗原 免疫原性 肿瘤疫苗

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表达人癌胚抗原重组痘苗病毒的构建 被引量：5

14

作者 杨洁 杨太成 +4 位作者 罗超权 王晓怀 杨英浩 江悦华 伍新尧 《中山医科大学学报》 CSCD 1997年第1期9-12,共4页

用痘苗病毒作载体，成功构建了高效表达人癌胚抗原（ＣＥＡ）的ＣＥＡ－重组痘苗病毒，用１４３ＴＫ－细胞作为宿主细胞，表达的蛋白质只在细胞膜上能检测到，而胞质内和细胞上清液中均未能检测到，可见所表达的蛋白质保持了其原有特性... 用痘苗病毒作载体，成功构建了高效表达人癌胚抗原（ＣＥＡ）的ＣＥＡ－重组痘苗病毒，用１４３ＴＫ－细胞作为宿主细胞，表达的蛋白质只在细胞膜上能检测到，而胞质内和细胞上清液中均未能检测到，可见所表达的蛋白质保持了其原有特性，再次证实痘苗病毒是真核表达的有效载体。本结果为进一步研究ＣＥＡ－重组痘苗病毒能否激活机体的免疫系统杀伤表达ＣＥＡ的肿瘤提供了物质基础。 展开更多

关键词 痘苗病毒 癌胚抗原 基因重组 肿瘤 基因治疗

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EB病毒特异的胸苷激酶基因在大肠杆菌中的表达 被引量：3

15

作者 陈尚武 朱振宇 +2 位作者 陈瑞君 黄迪 马涧泉 《中山医科大学学报》 CSCD 1996年第4期256-259,共4页

３０℃培养基因工程菌，迅速转移至４２℃培养４ｈ诱导重组质粒中外源ＥＢ病毒胸苷激酶（ＥＢＶＴＫ）基因的表达。菌体蛋白作十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）分析表明，重组蛋白分子大小与ＥＢＶＴＫ分子大小... ３０℃培养基因工程菌，迅速转移至４２℃培养４ｈ诱导重组质粒中外源ＥＢ病毒胸苷激酶（ＥＢＶＴＫ）基因的表达。菌体蛋白作十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）分析表明，重组蛋白分子大小与ＥＢＶＴＫ分子大小的理论值６７ｋｕ相符，占菌体总蛋白的６％以上。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析表明重组蛋白可与混合ＮＰＣ病人血清中ＥＢＶＴＫ特异性抗体反应，呈现良好的抗原性。以３ＨｄＴ为底物测定菌体总蛋白的ＴＫ比活性，结果提示，重组蛋白具有胸苷激酶活性。研究为ＥＢＶＴＫ在ＮＰＣ诊断中的应用打下了基础。 展开更多

关键词 疱疹病毒 4型 胸腺嘧啶激酶 基因 大肠杆菌

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转染自杀基因pCEAcd-tk的SPC-A-1细胞的死亡机制 被引量：3

16

作者 郭语彬 伍新尧 +3 位作者 骆晓枫 李芳 徐平 何光耀 《中山医科大学学报》 CSCD 2000年第2期120-122,共3页

【目的】探讨自杀基因 pCEAcd tk/前体药物体系旁观者效应的细胞死亡机制。【方法】提取质粒pCEAcd tk ,转染到肺癌细胞株SPC A 1中 ,与未转染的细胞按 2∶8的比例混合后加到 96孔培养板中 (每孔 3× 10 3 ) ,加前体药物 5 FC(5 μ... 【目的】探讨自杀基因 pCEAcd tk/前体药物体系旁观者效应的细胞死亡机制。【方法】提取质粒pCEAcd tk ,转染到肺癌细胞株SPC A 1中 ,与未转染的细胞按 2∶8的比例混合后加到 96孔培养板中 (每孔 3× 10 3 ) ,加前体药物 5 FC(5 μmol/L)和GCV(10 μmol/L)孵育 5d后 ,MTT法测定细胞存活率而估计旁观者效应。取处理后的细胞 ,提取DNA ,琼脂糖凝胶电泳 ;Hoechst染色后荧光显微镜观察及碘化丙啶 (PI)染色 ,流式细胞仪分析细胞周期。【结果】①SPC A 1细胞株在转染了pCEAcd tk体系后加前体药物存在明显的旁观者效应 ;②处理细胞的基因组DNA琼脂糖凝胶电泳呈涂布状 ;③处理细胞用荧光显微镜观察到形状变大 ,无凋亡小体形成 ;④流式细胞仪分析到细胞周期发生改变。【结论】SPC A 1细胞在转染了pCEAcd tk后存在旁观者效应 ,这种旁观者效应引起的细胞死亡是一种坏死。 展开更多

关键词 自杀基因 旁观者效应 pcEAcd-tk SPC-A-1 肿瘤

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EB病毒特异性DNA酶与鼻咽癌的早期诊断 被引量：2

17

作者 朱振宇 黄迪 马涧泉 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 1997年第12期47-49,共3页

首创巴豆油和正丁酸联合诱导Ｒａｊｉ细胞获得ＥＢＶ－ＤＮａｓｅ，确定了其产生的时态曲线。建立了检测ＮＰＣ病人ＤＮａｓｅ抗体的方法，首次采用“抗酶率”表示抗体水平，并根据其滴度分布曲线确定了抗酶率大于３０％为阳性截止值，... 首创巴豆油和正丁酸联合诱导Ｒａｊｉ细胞获得ＥＢＶ－ＤＮａｓｅ，确定了其产生的时态曲线。建立了检测ＮＰＣ病人ＤＮａｓｅ抗体的方法，首次采用“抗酶率”表示抗体水平，并根据其滴度分布曲线确定了抗酶率大于３０％为阳性截止值，经双盲法检测、普查及５万余例ＮＰＣ门诊病人标本的检测，证明抗酶率检测结果稳定可靠，对发现早期ＮＰＣ有重要作用。首次用ＰＣＲ扩增出ＤＮａｓｅ全基因，并高效表达成功；重组的ＤＮａｓｅ有较高的活性和良好抗原性，可用于临床检测。首创用ＰＣＲ扩增组织中ＤＮａｓｅ和核抗原１基因来发现早期ＮＰＣ或用于其相关疾病鉴别诊断；并用ＰＣＲ扩增石蜡包埋组织中该两种基因片段来进行回顾性病因研究。 展开更多

关键词 鼻咽肿瘤 诊断 EB病毒 DNA酶

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API_（0134）对钙调素及其依赖性环核苷酸磷酸二酯酶的作用 被引量：2

18

作者 聂磊 傅良武 +4 位作者 张婷 赵华月 周世豪 马宝瑕 熊一力 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 1994年第5期341-344,共4页

应用钙调素（ＣａＭ）靶酶环核苷酸磷酸二酯酶（ＰＤＥ－Ｉ）活性测定方法观察穿心莲有效成分（ＡＰＩ０１３４）拮抗ＣａＭ的作用。当ＡＰＩ０１３４浓度大于７．８ｍｇ·Ｌ－１时能明显抑制ＣａＭ激活ＰＤＥ－Ｉ的活性，其半抑制... 应用钙调素（ＣａＭ）靶酶环核苷酸磷酸二酯酶（ＰＤＥ－Ｉ）活性测定方法观察穿心莲有效成分（ＡＰＩ０１３４）拮抗ＣａＭ的作用。当ＡＰＩ０１３４浓度大于７．８ｍｇ·Ｌ－１时能明显抑制ＣａＭ激活ＰＤＥ－Ｉ的活性，其半抑制浓度（ＩＣ５０）为２６·９ｍｇ·Ｌ－１，在浓度为７．８～１２５ｍｇ·Ｌ－１范围内，ＡＰＩ０１３４对ＰＤＥ－Ｉ的基础活性没有影响。 展开更多

关键词 穿心莲有效成分 API₀₁₃₄ 钙调素钙调素拮抗剂 环核苷酸磷酸二酯酶

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阳离子脂质体介导的肺癌细胞基因转染效率的比较研究 被引量：3

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作者 李芳 伍新尧 +2 位作者 郭语彬 区敬华 童大跃 《中山医科大学学报》 CSCD 2000年第6期425-428,共4页

【目的】提高阳离子脂质体介导的肺癌细胞基因转染效率。【方法】采用表达E .coliβ 半乳糖苷酶的 pCMVβ报告基因质粒及组化染色评价阳离子脂质体的转染效率。优化脂质体介导肺癌细胞基因转染效率的条件包括 :脂质体∶DNA电荷比率 ,DN... 【目的】提高阳离子脂质体介导的肺癌细胞基因转染效率。【方法】采用表达E .coliβ 半乳糖苷酶的 pCMVβ报告基因质粒及组化染色评价阳离子脂质体的转染效率。优化脂质体介导肺癌细胞基因转染效率的条件包括 :脂质体∶DNA电荷比率 ,DNA转染剂量 ,阳离子脂质体的类型。【结果】当阳离子脂质体∶DNA电荷比率 (+ / - )为 3∶1时 ,pCMVβ 的剂量为4μg/孔 (2 4孔板 )时 ,阳离子脂质体DOSPER介导肺癌细胞株SPC A 1转染效率最高 ,达 (11 9± 0 9) %。【结论】优化转染条件 ,脂质体可有效地将外源基因体外导入肺癌细胞。本实验为阳离子脂质体介导肺癌细胞功能性基因的转移及进一步的肺癌基因治疗打下了基础。 展开更多

关键词 肺肿瘤/治疗 基因疗法 基因转移 阳离子脂质体

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序列特异性引物-聚合酶链反应法用于广东汉族人群HLA DQA1等位基因分析 被引量：3

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作者 吴耀生 罗超权 +1 位作者 杨英浩 伍新尧 《中山医科大学学报》 CSCD 1998年第2期112-114,共3页

目的：研究广东汉族人群中人类白细胞抗原（ＨＬＡ）ＤＱＡ１等位基因频率分布，为ＨＬＡＤＱＡ１相关疾病的研究及人类学的研究提供基础资料。方法：用序列特异性引物聚合酶链反应（ＳＳＰＰＣＲ）法对广东汉族人群作ＨＬＡＤＱＡ... 目的：研究广东汉族人群中人类白细胞抗原（ＨＬＡ）ＤＱＡ１等位基因频率分布，为ＨＬＡＤＱＡ１相关疾病的研究及人类学的研究提供基础资料。方法：用序列特异性引物聚合酶链反应（ＳＳＰＰＣＲ）法对广东汉族人群作ＨＬＡＤＱＡ１等位基因分型，根据出现扩增产物所用的序列特异性引物，直接分析判断受检查者的基因型别。结果：１４６例广东汉族健康无血缘关系个体中共检出１０个等位基因，以ＤＱＡ１０３０１的频率（０．２９１）最高，基因型的观察值与期望值相比，符合ＨａｒｄｙＷｅｉｎｂｅｒｇ平衡，纯合基因型的观察值与期望值相比，Ｐ＞０．９５，家系调查及重复性试验显示结果可靠。结论：广东汉族ＨＬＡＤＱＡ１基因与其他１０组华人群体的资料比较，总体检验有显著差异，但均以ＤＱＡ１０３０１的频率最高，显示华人的遗传系统既有共性亦有各自的特点，南方汉族人群体间或与南方一些少数民族比较均有显著差异，显示南方华人群体遗传背景的复杂性。 展开更多

关键词 HLA 等位基因 聚合酶链反应 DQA1

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