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支原体全DNA光敏生物素探针杂交方法的建立
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作者 赖小敏 方国源 +1 位作者 王传恩 李彩霞 《中山医科大学学报》 CSCD 1995年第4期36-39,共4页
支原体基因组全DNA分子量较小,本研究直接制备肺炎支原体(MF),人型支原体(MH)和解脲脲原体(UU)中3个型SU1,SU4,SU8全DNA光敏生物素探针,用斑点杂交鉴定表明探针可用于检测同种支原体,但3个型UU探... 支原体基因组全DNA分子量较小,本研究直接制备肺炎支原体(MF),人型支原体(MH)和解脲脲原体(UU)中3个型SU1,SU4,SU8全DNA光敏生物素探针,用斑点杂交鉴定表明探针可用于检测同种支原体,但3个型UU探针不能用于型别鉴定。探针检测灵敏度较一般片段DNA探针灵敏度低,可能是由于前者分子量放大,降低了杂交速率和效率。直接提取全DNA作光敏生物素标记,简化了探针制备过程,且无放射性损害及衰减,探针易于保存。 展开更多
关键词 支原体属 遗传学 DNA探针 核酸杂交
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钩端螺旋体L型脊髓炎(附15例报告) 被引量:5
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作者 马登宏 马骥 +6 位作者 汤郡 吴国林 张郁文 刘晓林 唐素兰 宋秀宇 林特夫 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 1999年第3期43-44,39,共3页
目的探讨钩体L型脊髓炎发病机理和防治。方法对15例钩体L型脊髓炎临床表现、实验室检查,并复习文献。结果急性及亚急性或慢性脊髓损害各7、8例,双下肢瘫7例,四肢瘫8例。均有明显的传导束型或节段到感觉障碍及排尿障碍。血培养钩体L... 目的探讨钩体L型脊髓炎发病机理和防治。方法对15例钩体L型脊髓炎临床表现、实验室检查,并复习文献。结果急性及亚急性或慢性脊髓损害各7、8例,双下肢瘫7例,四肢瘫8例。均有明显的传导束型或节段到感觉障碍及排尿障碍。血培养钩体L型阳性8例,原型构体6例,尿培养:构体L型5例;CSF培养钩体L型5例;血清钩体MAT阳性7例。结论钩体L4脊髓炎的发生可能为构体L型直接损伤脊髓或供血血管,钩体L型致间质炎症病理损伤所致。甲硝哒唑易透过血脑屏障能损坏钩体DNA结构,可减少钩体病后发病。 展开更多
关键词 钩端螺旋体 钩端螺旋体L型 脊髓炎 甲硝哒唑
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用于神经系统基因治疗的病毒载体 被引量:2
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作者 王传恩 姚志彬 郭辉玉 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第2期168-172,共5页
关键词 神经系统疾病 基因治疗 病毒载体 RV HSV ADV
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PCR和分离培养检测细胞培养支原体污染的比较 被引量:5
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作者 赖小敏 方国源 +1 位作者 李彩霞 王传恩 《中山医科大学学报》 CSCD 1999年第2期151-154,共4页
目的:检测细胞培养中支原体的污染,建立支原体通用的PCR方法。方法:根据已出版的序列设计并合成一对支原体(柔膜体纲)16SrRNA基因组特异引物。对实验室所存的12种支原体、大肠杆菌、变形杆菌及无支原体污染的组织培养... 目的:检测细胞培养中支原体的污染,建立支原体通用的PCR方法。方法:根据已出版的序列设计并合成一对支原体(柔膜体纲)16SrRNA基因组特异引物。对实验室所存的12种支原体、大肠杆菌、变形杆菌及无支原体污染的组织培养细胞进行了PCR扩增。以PCR与分离培养比较检测了33份细胞培养标本。结果:12种支原体均出现了约620bp左右的特异性扩增带,敏感性为100~1000个支原体细胞,且常见的6种细胞培养污染支原体的扩增片段均能被HindⅢ切成280与340bp左右的2条带。理论上推测这对引物可扩增所有支原体16SrDNA。但对大肠杆菌、变形杆菌及无支原体污染的组织培养细胞等未见有扩增带出现。在对33份细胞培养标本的检测中,除PCR和分离培养同时检出2份阳性外,前方法还另检出阳性3份。5份PCR扩增物均被HindⅢ切出2条带。结论:PCR较分离培养敏感性高,可提高细胞培养污染支原体的检出率,防止出现假阴性结果;如做好质量控制,对于一般实验室检测细胞培养支原体污染。 展开更多
关键词 细胞培养 支原体污染 聚合酶链反应
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白细胞介素6在登革热病毒感染人脐静脉内皮细胞中的作用 被引量:4
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作者 江振友 江丽芳 郭辉玉 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 1997年第1期3-6,共4页
以人脐静脉内皮细胞(EC)为靶细胞研究白细胞介素6(IL—6)对登革Ⅱ型病毒(D2V)增殖的影响,以及感染细胞产生IL—6水平的动态变化。结果显示:(1)IL—6对人脐静脉EC中的D2V增殖有增强作用;(2)D2V感染能诱导人脐静脉EC产生IL—... 以人脐静脉内皮细胞(EC)为靶细胞研究白细胞介素6(IL—6)对登革Ⅱ型病毒(D2V)增殖的影响,以及感染细胞产生IL—6水平的动态变化。结果显示:(1)IL—6对人脐静脉EC中的D2V增殖有增强作用;(2)D2V感染能诱导人脐静脉EC产生IL—6、IL—6的分泌水平与D2V感染量呈正相关。 展开更多
关键词 登革Ⅱ型病毒 白细胞介素6 病理学
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登革病毒大片段NS3基因扩增的方法探讨 被引量:3
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作者 晏辉钧 江丽芳 +4 位作者 潘文彤 李向群 方丹云 陈元 郭辉玉 《中山医科大学学报》 CSCD 1999年第3期185-187,共3页
目的:探索一种快速、实用的扩增登革病毒大片段基因的方法。方法:用登革2 型新几内亚 C 株( D V2 , N G C 株)的核酸( R N A) 为模板,研究了在不同条件下( 病毒和其变性液的量以及c D N A 的浓度等) 通过逆... 目的:探索一种快速、实用的扩增登革病毒大片段基因的方法。方法:用登革2 型新几内亚 C 株( D V2 , N G C 株)的核酸( R N A) 为模板,研究了在不同条件下( 病毒和其变性液的量以及c D N A 的浓度等) 通过逆转录聚合酶链式反应技术扩增大片段 N S3 基因,并对扩增的目的基因用巢式 P C R 进行了鉴定。结果:用大量的或小量的登革病毒培养上清中提取 R N A 的方法在一定条件下均可扩增出大片段 N S3 基因。结论:小量登革病毒提取 R N A 扩增大片段 N S3 基因法较大量登革病毒提取 R N A 扩增大片段 N S3 基因快速、实用。 展开更多
关键词 登革病毒 遗传学 聚合酶链反应 基因扩增
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登革病毒感染患者血清IFN-γ和TNF-α的检测及意义 被引量:1
7
作者 江振友 江丽芳 +1 位作者 方丹云 郭辉玉 《中国人兽共患病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期19-21,共3页
目的 探讨登革病毒感染患者血清IFN γ和TNF α在登革病毒感染致病中的作用。方法 应用酶联免疫吸附法 (ELISA)测定广州地区 30例DV 1感染患者血清IFN γ和TNF α的水平。实验数据采用两样本均数t检验法处理。结果  30例登革病毒感... 目的 探讨登革病毒感染患者血清IFN γ和TNF α在登革病毒感染致病中的作用。方法 应用酶联免疫吸附法 (ELISA)测定广州地区 30例DV 1感染患者血清IFN γ和TNF α的水平。实验数据采用两样本均数t检验法处理。结果  30例登革病毒感染者血清IFN γ和TNF α水平比正常健康对照组明显增高 (P <0 .0 5、P <0 .0 1)。感染病程第一天 ,患者血清IFN γ水平开始升高 ,第二天达高峰 ,然后逐渐下降。患者血清TNF -α水平第 2天明显升高 ,第 3天达高峰 ,然后逐渐下降。结论 TNF γ和TNF α在登革病毒的致病与免疫过程中可能起重要作用。 展开更多
关键词 登革病毒 免疫学 细胞因子 IFN-Γ TNF-Α
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肿瘤坏死因子α与分泌性中耳炎 被引量:4
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作者 梁象逢 江丽芳 +3 位作者 许耀东 郑亿庆 吴永安 丁健慧 《中山医科大学学报》 CSCD 1996年第4期274-276,共3页
用ELISA法测定31例分泌性中耳炎患者中耳积液和血清的肿瘤坏死因子α(TNFα)含量,并与30例正常人血清中TNFα作对照。结果:病人组血清TNFα浓度(88.8±44.1)ng/L与正常人血清TNFα(80.... 用ELISA法测定31例分泌性中耳炎患者中耳积液和血清的肿瘤坏死因子α(TNFα)含量,并与30例正常人血清中TNFα作对照。结果:病人组血清TNFα浓度(88.8±44.1)ng/L与正常人血清TNFα(80.8±48.7)ng/L比较差异无显著性(P>0.05);病人组中耳积液的TNFα含量(394.1±210.0)ng/L明显高于同组血清TNFα的含量(P<0.001),亦明显高于正常人血清TNFα含量(P<0.001)。中耳积液中的TNFα含量与复发率成正相关(r=0.9612)。实验数据提示中耳积液中TNFα主要由局部中耳粘膜产生,TNFα参与分泌性中耳炎的致病过程。中耳积液中高浓度的TNFα存在可能是分泌性中耳炎迁延不愈的原因之一。 展开更多
关键词 肿瘤坏死因子/分泌 中耳炎 伴渗出液
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GDNF基因逆转录病毒表达载体的构建与鉴定 被引量:1
9
作者 王传恩 阮奕文 +2 位作者 姚志彬 谢瑶 郭辉玉 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第3期209-212,共4页
应用基因重组技术将大鼠 GDNF c DNA克隆到逆转录病毒载体 p L XSN中 ,用限制性内切酶酶切分析重组质粒p L XSN-GDNF中 GDNF基因的插入方向 ,用 PCR、斑点杂交和 Southern杂交对重组质粒作进一步鉴定。结果表明 :GDNF c D-NA已正确地克... 应用基因重组技术将大鼠 GDNF c DNA克隆到逆转录病毒载体 p L XSN中 ,用限制性内切酶酶切分析重组质粒p L XSN-GDNF中 GDNF基因的插入方向 ,用 PCR、斑点杂交和 Southern杂交对重组质粒作进一步鉴定。结果表明 :GDNF c D-NA已正确地克隆到逆转录病毒载体 p L XSN中而构建成重组逆转录病毒载体 ,成功构建的真核细胞表达载体可作为基因治疗的高效基因转移载体。本研究为进一步开展 GDNF基因治疗 Parkinson' s disease和 Alzheimer' s disease等中枢神经系统疾病提供了资料。 展开更多
关键词 GDNF逆转录病毒载体 基因治疗 中枢神经系统疾病
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反义人IL-10和反义病毒性IL-10抗鼻咽癌细胞成瘤效应的研究 被引量:1
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作者 陶剑平 杨琨 +1 位作者 朱振宇 林学颜 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第8期543-545,549,共4页
目的:探讨反义人IL-10和反义病毒性IL-10抑制鼻咽癌细胞成瘤的效果。方法:扩增及克隆hIL-10 cDNA和 vIL-10基因,构建反义hIL-10和反义vIL-10双价真核表达载体pcDNA3/AS hIL-10+AS vIL-10,转染鼻咽癌细胞株SUNE。将转染阳性的SUNE细胞克... 目的:探讨反义人IL-10和反义病毒性IL-10抑制鼻咽癌细胞成瘤的效果。方法:扩增及克隆hIL-10 cDNA和 vIL-10基因,构建反义hIL-10和反义vIL-10双价真核表达载体pcDNA3/AS hIL-10+AS vIL-10,转染鼻咽癌细胞株SUNE。将转染阳性的SUNE细胞克隆和未转染的SUNE细胞接种SCID小鼠和经健康人外周血白细胞免疫重建的SCID小鼠(hu-PBL-SCID鼠),观察成瘤效应。结果:ELISA法测得未转染SUNE细胞培养上清液中IL-10和vIL-10的总含量为242±23pg/ml,而转染阳性的SUNE细胞培养上清液中hIL-10和vIL-10的总含量仅为22±6pg/ml。在SCID鼠体内,vIL-10和hIL-10的表达与否,并不影响鼻咽癌细胞的成瘤活性,但在hu-PBL-SCID鼠体内,抑制vIL-10和hIL-10的表达则可明显抑制鼻咽癌细胞的成瘤作用。结论:反义人IL-10和反义病毒性IL-10可显著抑制鼻咽癌细胞在血hu-PBL-SCID鼠体内的成瘤作用,鼻咽癌组织表达vIL-10和hIL-10的确与鼻咽癌免疫耐受有关。 展开更多
关键词 反义人IL-10 反义病毒性IL-10 鼻咽癌 成瘤效应
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人神经生长因子基因真核细胞表达载体的构建与鉴定 被引量:2
11
作者 王传恩 阮奕文 +2 位作者 姚志彬 谢瑶 郭辉玉 《中山医科大学学报》 CSCD 1999年第3期167-170,共4页
目的:构建携带人神经生长因子(h N G F) 基因的真核细胞表达载体,为应用 N G F 进行老年性痴呆( A D) 等疾病基因治疗打基础。方法:应用基因重组技术将h N G Fc D N A 克隆到逆转录病毒载体p L X S N 中... 目的:构建携带人神经生长因子(h N G F) 基因的真核细胞表达载体,为应用 N G F 进行老年性痴呆( A D) 等疾病基因治疗打基础。方法:应用基因重组技术将h N G Fc D N A 克隆到逆转录病毒载体p L X S N 中,用限制性内切酶酶切分析重组质粒p L N G F S N 中h N G F基因的插入方向,用 P C R、斑点杂交和 Southern 杂交对重组质粒p L N G F S N 作进一步鉴定。结果:h N G Fc D N A已正确地克隆到逆转录病毒载体p L X S N 中,而构建成重组逆转录病毒载体p L N G F S N。结论:真核细胞表达载体p L N G F S N 的成功构建,为进一步开展 N G F基因治疗 A D 等中枢神经系统疾病奠定了基础。 展开更多
关键词 神经生长因子 真核细胞 老年性痴呆 基因治疗
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抗登革病毒单克隆抗体诊断盒的应用 被引量:1
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作者 郭辉玉 刘乐和 +2 位作者 罗瑞仙 熊惠萍 杨国平 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 1995年第S1期9-11,共3页
应用4株I、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型登革病毒特异性单克隆抗体组成的诊断试剂盒,用荧光抗体技术特异而敏感地鉴定了Ⅰ~Ⅳ型登革病毒原型株和20个地方株的型别.并于1990-1993年间广州市及佛山市登革热流行时,对从病人血清分离的登... 应用4株I、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型登革病毒特异性单克隆抗体组成的诊断试剂盒,用荧光抗体技术特异而敏感地鉴定了Ⅰ~Ⅳ型登革病毒原型株和20个地方株的型别.并于1990-1993年间广州市及佛山市登革热流行时,对从病人血清分离的登革病毒准确而快速地进行型别鉴定。 展开更多
关键词 抗体 单克隆/诊断应用 抗体 病毒/诊断应用 荧光抗体技术 登革热病毒
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人胎盘无细胞悬液对骨髓造血干/祖细胞的体外扩增作用 被引量:1
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作者 李娟 罗绍凯 黄俊琪 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2000年第4期299-301,共3页
为了探讨人胎盘无细胞悬液对骨髓造血干 /祖细胞的体外扩增作用及与已知的几种细胞因子进行比较 ,用人胎盘无细胞悬液及IL 3,GM CSF ,IL 3+IL 6+GM CSF +EPO作为刺激因子 ,并应用甲基纤维素半固体培养体系对骨髓GM CFU ,GM GEMM和BFU E... 为了探讨人胎盘无细胞悬液对骨髓造血干 /祖细胞的体外扩增作用及与已知的几种细胞因子进行比较 ,用人胎盘无细胞悬液及IL 3,GM CSF ,IL 3+IL 6+GM CSF +EPO作为刺激因子 ,并应用甲基纤维素半固体培养体系对骨髓GM CFU ,GM GEMM和BFU E进行了培养和比较。研究结果表明 ,人胎盘无细胞悬液对骨髓CFU GM ,CFU GEMM和BFU E体外扩增最适蛋白浓度是 2 0 0 - 30 0μg/L ,人胎盘无细胞悬液作刺激因子对骨髓造血干 /祖细胞的体外扩增效果优于单独IL 3,单独GM CSF和IL 3+IL 6+GM CSF +EPO组。结论提示 ,人胎盘无细胞悬液可能含有多种细胞因子 ,用人胎盘无细胞悬液作扩增剂体外扩增骨髓造血干 展开更多
关键词 胎盘无细胞悬液 造血干/祖细胞 骨髓 体外扩增
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登革病毒1型和2型国内分离株NSI基因的扩增和克隆 被引量:1
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作者 方美玉 陈火胜 +1 位作者 陈翠华 郭辉玉 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 1996年第3期9-11,共3页
登革病毒(Dengueviruses─DV)为单链正股RNA病毒,其非结构蛋白NS1在病毒免疫反应中起重要作用。我们在NS1基因序列设计了一对通用引物,扩增序列长度为413bP。应用逆转录──聚合酶链反应(RT─PC... 登革病毒(Dengueviruses─DV)为单链正股RNA病毒,其非结构蛋白NS1在病毒免疫反应中起重要作用。我们在NS1基因序列设计了一对通用引物,扩增序列长度为413bP。应用逆转录──聚合酶链反应(RT─PCR)成功地扩增了DV1─4型部分基因片段,采用该引物扩增国内分离株DV1(GZ)和DV2(HN91)同样出现一条特异扩增带,回收该DNA片段,并将DV1(GZ)和DV2(HN91)NS1基因部分片段分别克隆到PUC19质粒载体中。经Pst1和EcoR1双酶切分析和通用引物PCR鉴定证明重组质粒内含有NS1基因部分片段。准备进行核甘酸序列分析。同时,以上无性繁殖系的构建,为DV的核酸杂交研究提供了特异性基因探针。 展开更多
关键词 登革病毒 NS1基因 聚合酶链反应 克隆
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抗登革病毒Ⅰ~Ⅳ型特异性单克隆抗体的研制 被引量:1
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作者 郭辉玉 刘乐和 +5 位作者 罗瑞仙 熊惠萍 陈佩嘉 杨国平 江丽芳 任铁玲 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 1995年第S1期6-8,共3页
用登革病毒免疫Balb/c小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞,经PEG融合处理,共获得90株分泌登革病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株。按照单抗质量标准,对杂交瘤细胞进行了严格的鉴定,筛选出19株具有型特异的细胞株,再从中选出4... 用登革病毒免疫Balb/c小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞,经PEG融合处理,共获得90株分泌登革病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株。按照单抗质量标准,对杂交瘤细胞进行了严格的鉴定,筛选出19株具有型特异的细胞株,再从中选出4个血清型的型特异的单抗组成诊断盒,可用于登革病毒的准确的鉴定和分型。 展开更多
关键词 抗体 单克隆/生物合成 登革热病毒 抗体 病毒/生物合成
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应用聚合酶链式反应和原位杂交方法检测胎儿组织中人微小病毒B19核酸序列 被引量:1
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作者 曹虹 郭辉玉 +1 位作者 卓礼梅 张文炳 《第一军医大学学报》 CSCD 1996年第1期17-19,共3页
用聚合酶链式反应(PCR)法检测了7例胎儿的12份组织标本,在4份脑组织和1份脾组织中扩增出700bp片段,经酶切鉴定证明其为特异性片段。用地高辛标记的人微小病毒B19(PVB19)DNA探针对PCR检测阳性标本进行... 用聚合酶链式反应(PCR)法检测了7例胎儿的12份组织标本,在4份脑组织和1份脾组织中扩增出700bp片段,经酶切鉴定证明其为特异性片段。用地高辛标记的人微小病毒B19(PVB19)DNA探针对PCR检测阳性标本进行原位杂交,在2份脑组织和1份脾组织中检出了PVB19DNA阳性颗粒,PCR和原位杂交方法结合应用可为胎儿PVB19感染的病原学诊断和致病机理的研究提供一套持异、敏感和准确的实验方法。 展开更多
关键词 人微小病毒B19 原位杂交 胎儿 聚合酶链反应
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两种不同来源的EBVLMP1基因在Balb/c3T3细胞中的表达 被引量:1
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作者 陈元 郭辉玉 +1 位作者 方丹云 晏辉钧 《中山医科大学学报》 CSCD 2000年第3期205-208,共4页
【目的】研究来源于鼻咽癌细胞株SUNE1及EBV标准株B95 - 8细胞中两种EBVLMP1基因在真核细胞Balb/c3T3中的表达 ,为进一步研究EBVLMP1基因的核酸疫苗打基础。【方法】将两种不同来源EBVLMP1基因的真核表达质粒 ,经脂质体法转染Balb/c 3T... 【目的】研究来源于鼻咽癌细胞株SUNE1及EBV标准株B95 - 8细胞中两种EBVLMP1基因在真核细胞Balb/c3T3中的表达 ,为进一步研究EBVLMP1基因的核酸疫苗打基础。【方法】将两种不同来源EBVLMP1基因的真核表达质粒 ,经脂质体法转染Balb/c 3T3细胞后 ,用Westernblot、免疫组化及PCR的方法检测不同转染细胞中EBVLMP1蛋白的表达及核酸片段。【结果】PCR结果表明在两种不同来源LMP1转染细胞中均有EBVLMP1基因序列 ,并均能表达 6 3ku的蛋白质 ,经Westernblot和免疫组化结果证实均为EBVLMP1蛋白。【结论】来源于B95 8细胞及鼻咽癌细胞SUNE1的两种EBVLMP1基因均能在真核细胞Balb/c 3T3中表达。 展开更多
关键词 潜代膜蛋白1基因 鼻咽肿瘤 E-B病毒
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鼻咽癌细胞中表达的人白细胞介素18(hIL-18)对鼻咽癌患者外周血CD8^+T细胞细胞毒活性增强作用的研究
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作者 陶剑平 夏云飞 +2 位作者 张昌卿 李满枝 林学颜 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期36-39,共4页
目的:探讨人白细胞介素18在鼻咽癌细胞中的表达能否提高鼻咽癌病人外周血CD8+T细胞的杀伤活性以及作用途径。方法:构建人白细胞介素18的真核表达载体pcDNA3.1(-)/HIL-18,转染人鼻咽癌细胞株SUNE;以转染的SUNE细胞和未转染的 SUNE细胞... 目的:探讨人白细胞介素18在鼻咽癌细胞中的表达能否提高鼻咽癌病人外周血CD8+T细胞的杀伤活性以及作用途径。方法:构建人白细胞介素18的真核表达载体pcDNA3.1(-)/HIL-18,转染人鼻咽癌细胞株SUNE;以转染的SUNE细胞和未转染的 SUNE细胞为靶细胞,以鼻咽癌患者外周血的 CD8+T细胞为效应细胞,混合培养 12h,用 LDH释放法测定 CD8+T细胞的细胞毒活性;用免疫组化法测定混合培养物中 CD8+T细胞上 Perforin、Fas-L、Granzyme B的表达。结果:所构建的真核表达载体在鼻咽癌细胞中能高效表达hIL-18;ELISA法测得转染阳性细胞培养上清液中hIL-18的含量为(85±10)pg/ml,而未转染的SUNE细胞的培养上清液中hIL-18的含量低于5pg/ml。将表达hIL-18的SUNE细胞与鼻咽癌患者外周血CD8+T细胞混合培养12h后,CD8+T细胞的细胞毒活性显著增强(P<0.111),尤其是当效应细胞/靶细胞为10:1时,CD8+细胞对转染的SUNE细胞的裂解率高达46.7%,而CD8+T细胞对未转染的SUME细胞的裂解率仅为4.6%。免疫组化法表明,这种杀伤活性的增强与CD8+T细胞表达Perforin有关,而与Fas-L和Granzyme B途径无关。结论:hIL-18能显著增强鼻咽癌患者外周血口CD8+T细胞的体外杀伤活性,这种杀伤活性与 CDS8+细胞表达Perforin有关。 展开更多
关键词 人白细胞介素18 基因转染 基因表达 CD8^+T细胞 细胞毒 穿孔蛋白 鼻咽癌
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登革病毒E蛋白抗原基因肌肉注射诱导小鼠免疫应答的初步研究
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作者 洪帮兴 江丽芳 +1 位作者 张欣 郭辉玉 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第12期641-643,共3页
目的 :研究登革病毒E基因免疫的可行性。方法 :用脂质体转染法将构建的E基因重组真核表达质粒pcDNA3 E导入小鼠成纤维细胞NIH3T3细胞 ,SDS PAGE和蛋白质印迹试验检测E基因的体外表达。然后将该重组真核表达质粒经肌肉注射免疫BALB/c小... 目的 :研究登革病毒E基因免疫的可行性。方法 :用脂质体转染法将构建的E基因重组真核表达质粒pcDNA3 E导入小鼠成纤维细胞NIH3T3细胞 ,SDS PAGE和蛋白质印迹试验检测E基因的体外表达。然后将该重组真核表达质粒经肌肉注射免疫BALB/c小鼠 ,检测其诱发特异性免疫应答水平。结果 :重组真核表达质粒pcDNA3 E在小鼠体内诱发一定水平的体液和细胞免疫应答 ,且持续时间较长。结论 :登革病毒E基因免疫可诱发特异性免疫应答 。 展开更多
关键词 登革病毒感染 基因免疫 免疫应答 E蛋白
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登革2型病毒NGC株E基因扩增和部分序列分析
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作者 洪帮兴 江丽芳 郭辉玉 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期415-416,共2页
目的体外扩增、克隆登革2型病毒NGC株包膜糖蛋白E基因约1.5kb的基因片段,并对目的基因片段进行部分碱基序列测定和分析。方法采用逆转录聚合酶链反应扩增出E目的基因片段,经限制性内切酶Kpn1/Xbal酶切后用低熔点琼脂糖挖块回收法回收纯... 目的体外扩增、克隆登革2型病毒NGC株包膜糖蛋白E基因约1.5kb的基因片段,并对目的基因片段进行部分碱基序列测定和分析。方法采用逆转录聚合酶链反应扩增出E目的基因片段,经限制性内切酶Kpn1/Xbal酶切后用低熔点琼脂糖挖块回收法回收纯化,插入真核表达载体pcDNA3的多克隆位点,构建重组体pcDNA3E,转化大肠杆菌DH5a,通过对目的基因片段的部分碱基序列测定鉴定克隆的正确性,并分析其氨基酸变异。结果从登革2型病毒NGC株中扩增出约1.5kb的DNA片段,目的基因片段的部分测序与参考序列的同源性为96.53%,7个氨基酸发生变异,4个变异氨基酸与登革2型病毒Jamaica株相应位置的氨基酸相同。结论体外成功扩增并克隆DV2NGC株全长E基因片段,其序列变异及与其他毒株的同源性研究为登革病毒致病机理和疫苗的研究提供材料。 展开更多
关键词 登革病毒 遗传学 基因 克隆 聚合酶链反应 序列
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