机会致病寄生原虫的系列研究

1

作者 陈观今 郭小华 +3 位作者 韦相才 刘达宏 连德润 郑焕钦 《中山医科大学学报》 CSCD 1998年第4期241-245,共5页

本课题包括：①对机会致病寄生虫，包括弓形虫、卡氏肺孢子虫及隐孢子虫动物模型的建立，虫体的分离及提纯；②弓形虫感染的循环抗原（ＣＡ）和抗体（ＩｇＧ、ＩｇＭ），用竞争抑制酶联免疫吸附试验（ＩＥＬＩＳＡ）、金葡菌Ａ蛋白酶... 本课题包括：①对机会致病寄生虫，包括弓形虫、卡氏肺孢子虫及隐孢子虫动物模型的建立，虫体的分离及提纯；②弓形虫感染的循环抗原（ＣＡ）和抗体（ＩｇＧ、ＩｇＭ），用竞争抑制酶联免疫吸附试验（ＩＥＬＩＳＡ）、金葡菌Ａ蛋白酶联免疫吸附试验（ＳＰＡＥＬＩＳＡ）、直接捕获法酶联免疫吸附试验（ＤＥＬＩＳＡ）进行检测；③用地高辛标记探针及聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测核酸，自由引物ＰＣＲ鉴别弓形虫株以及生物特性；④用流式细胞仪对卡氏肺孢子虫及弓形虫的ＤＮＡ、ＲＮＡ及蛋白质含量的动力学进行了分析；⑤用激光微束系统对含８个子孢子成熟包囊施行手术，切除４个或２个子孢子后，包囊仍具有感染力。 展开更多

关键词 机会致病原虫 免疫学 疾病模型 孢子虫纲 弓形体

在线阅读 下载PDF 职称材料

弓形虫ROP1基因真核表达重组质粒DNA免疫小鼠的研究Ⅰ.pcDNA3-ROP1真核表达重组质粒的构建 被引量：14

2

作者 郭虹 陈观今 +2 位作者 周永安 郑焕钦 刘彦文 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 1999年第1期3-5,共3页

目的构建弓形虫ＺＳ２株ｐｃＤＮＡ３－ＲＯＰ１真核表达重组质粒，为进一步表达及ＤＮＡ免疫做准备。方法用ＰＣＲ技术从弓形虫ＺＳ２分离株的基因组ＤＮＡ中扩增编码棒状体蛋白１（ＲＯＰ１）的基因片段，重组入ｐＵＣ１８克隆载体。... 目的构建弓形虫ＺＳ２株ｐｃＤＮＡ３－ＲＯＰ１真核表达重组质粒，为进一步表达及ＤＮＡ免疫做准备。方法用ＰＣＲ技术从弓形虫ＺＳ２分离株的基因组ＤＮＡ中扩增编码棒状体蛋白１（ＲＯＰ１）的基因片段，重组入ｐＵＣ１８克隆载体。将ｐＵＣ１８－ＲＯＰ１中的ＲＯＰ１外源基因片段经酶切、连接等反应，亚克隆入ｐｃＤＮＡ３真核表达载体，再经含氨苄ＬＢ培养基筛选，酶切、ＰＣＲ鉴定。结果从ＺＳ２株基因组ＤＮＡ中扩增出特异的ＲＯＰ１基因片段，克隆成功ｐＵＣ１８－ＲＯＰ１；经亚克隆，筛选鉴定获得了ｐｃＤＮＡ－ＲＯＰ１重组质粒。结论构建成功弓形虫ｐＵＣ１８－ＲＯＰ１重组质粒，亚克隆成功ｐｃＤＮＡ－ＲＯＰ１重组质粒。 展开更多

关键词 克隆 重组质粒 弓形体病 ROP1基因 DNA免疫

在线阅读 下载PDF 职称材料

弓形虫复合抗原基因SAG1/ROP1在大肠杆菌中表达的初步研究 被引量：11

3

作者 陈海峰 陈观今 +2 位作者 郭虹 郑焕钦 王又红 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2001年第2期8-10,共3页

目的　构建含弓形虫主要表面抗原基因SAG1和棒状体蛋白ROP1复合基因重组质粒 ,并在大肠杆菌中表达 ,检测复合基因表达产物的免疫活性。方法　用亚克隆技术分别把SAG1与ROP1基因克隆至 pET2 8aRT7启动子下游 ,转化大肠杆菌DH5α感受态细... 目的　构建含弓形虫主要表面抗原基因SAG1和棒状体蛋白ROP1复合基因重组质粒 ,并在大肠杆菌中表达 ,检测复合基因表达产物的免疫活性。方法　用亚克隆技术分别把SAG1与ROP1基因克隆至 pET2 8aRT7启动子下游 ,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞 ,经IPTG诱导表达 ,SDS -PAGE及Western -Blot分析。结果　获得pET2 8-SAG1/ROP1重组表达载体 ;SDS -PAGE及Western -Blot印迹显示SAG1/ROP1复合基因表达蛋白产物分子量约为 6 6kD ,具有一定的免疫活性。结论　弓形虫复合抗原基因SAG1/ROP1可在大肠杆菌中表达 ,表达产物具有免疫活性。 展开更多

关键词 弓形虫 SAG1 ROP1 基因表达 抗原基因 大肠杆菌

在线阅读 下载PDF 职称材料

弓形虫非同源性不同地理株的GRA1基因体外扩增片段的鉴定及比较研究 被引量：11

4

作者 贾雪梅 郭虹 +1 位作者 陈观今 郑焕钦 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 1999年第3期7-10,共4页

目的对弓形虫人源性RH株、人源性ZS_2株、猪源性CN株3个不同地理株的GRA1基因片段鉴定并比较异同。方法采用PCR技术和限制性内切酶技术，分别对弓形虫3株的GRA1基因片段进行体外扩增。扩增的目的基因片段分别用3种内切酶HindⅢ、HPaⅡ、... 目的对弓形虫人源性RH株、人源性ZS_2株、猪源性CN株3个不同地理株的GRA1基因片段鉴定并比较异同。方法采用PCR技术和限制性内切酶技术，分别对弓形虫3株的GRA1基因片段进行体外扩增。扩增的目的基因片段分别用3种内切酶HindⅢ、HPaⅡ、TaqⅠ进行单酶切鉴定、比较。结果从弓形虫3个分离株RH株、ZS_2株、CN标基因组DNA中扩增出785bp的GRA1基因片段。3个株的GRA1基因分别用3种内切酶酶切后，酶切片段与理论值相符。结论实验所用不同来源弓形虫分离株的GRA1基因扩增片段基本相同，且3种限制性内切酶酶切图诺基本一致，表明这3个分离株的GRA1基因高度保守。 展开更多

关键词 弓形虫 聚合酶链反应 GRA1基因 克隆 重组

在线阅读 下载PDF 职称材料

含弓形虫ROP1基因真核表达重组质粒DNA免疫小鼠的研究Ⅲ.免疫鼠肌组织表达产物免疫酶法定位及血清IgG抗体测定 被引量：8

5

作者 郭虹 陈观今 +1 位作者 郑焕钦 周永安 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 1999年第6期11-13,共3页

目的　用所构建的弓形虫ｐｃＤＮＡ３－ＲＯＰ１ 真核表达重组质粒，经肌肉注射免疫小鼠，观察它在肌组织中的表达及不同免疫途径所诱导的体液免疫应答。方法　碱裂解法大量制备ｐｃＤＮＡ３－ＲＯＰ１ 质粒，免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，每... 目的　用所构建的弓形虫ｐｃＤＮＡ３－ＲＯＰ１ 真核表达重组质粒，经肌肉注射免疫小鼠，观察它在肌组织中的表达及不同免疫途径所诱导的体液免疫应答。方法　碱裂解法大量制备ｐｃＤＮＡ３－ＲＯＰ１ 质粒，免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，每只鼠注射１００ｕｇ，两周后同量加强免疫一次，以ｐｃＤＮＡ３ 空质粒及生理盐水组为对照。于免疫后第５０ 天用间接免疫酶法检测注射局部肌组织重组蛋白的表达；ＥＬＩＳＡ法测定ＩｇＧ抗体滴度。结果　免疫鼠肌组织石蜡切片呈特异性阳性反应；血清ＩｇＧ抗体９０天后测定为阳性；皮下及肌肉不同免疫途径血清均显示阳性结果，无显著性差异。结论　ｐｃＤＮＡ３－ＲＯＰ１质粒ＤＮＡ 免疫小鼠后，肌组织内有重组蛋白表达。 展开更多

关键词 弓形生 棒状体蛋白 重组质粒 DNA免疫 小鼠

在线阅读 下载PDF 职称材料

弓形虫P30基因DNA免疫小鼠诱导小鼠体液免疫应答及保护性研究 被引量：7

6

作者 周永安 陈观今 +1 位作者 郭虹 郑焕钦 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 1999年第5期41-43,共3页

目的　用重组质粒ｐｃ Ｄ Ｎ Ａ３ － Ｐ３０ 免疫 Ｂ Ａ Ｌ Ｂｃ 小鼠， 观察其 Ｄ Ｎ Ａ 免疫所诱导的小鼠体液免疫反应和保护性作用。方法　大量制备质粒 Ｄ Ｎ Ａ， 肌肉注射免疫小鼠。 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 测定 Ｉｇ Ｇ 抗体滴度；... 目的　用重组质粒ｐｃ Ｄ Ｎ Ａ３ － Ｐ３０ 免疫 Ｂ Ａ Ｌ Ｂｃ 小鼠， 观察其 Ｄ Ｎ Ａ 免疫所诱导的小鼠体液免疫反应和保护性作用。方法　大量制备质粒 Ｄ Ｎ Ａ， 肌肉注射免疫小鼠。 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 测定 Ｉｇ Ｇ 抗体滴度； 免疫鼠血液组织 Ｐ３０ 基因 Ｐ Ｃ Ｒ 扩增； 弓形虫攻击感染。结果　用 Ｅ Ｌ Ｉ Ａ Ｓ 法检测的抗体 Ｉｇ Ｇ 滴度１∶２５６０ ， 免疫后３ 周及６ 个月从免疫鼠血液组织中检测到 Ｐ３０ 基因；攻击感染实验组的存活时间较对照时间延长（ Ｐ＜ ００５） ， 结论　重组质粒ｐｃ Ｄ Ｎ Ａ３ － Ｐ３０ 免 Ｂ Ａ Ｌ Ｂｃ 小鼠可诱导一定的体液免疫应答， 对抗攻击感染具有一定的保护性。 展开更多

关键词 DNA 弓形体病 P30基因 免疫应答 小鼠

在线阅读 下载PDF 职称材料

含弓形虫ROP1基因真核表达重组质粒DNA免疫小鼠的研究 IV.免疫鼠血清细胞因子IFN-γ、IL-2及NO的测定 被引量：11

7

作者 郭虹 陈观今 郑焕钦 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2000年第4期18-20,共3页

目的　用 pc- ROP1重组质粒免疫小鼠 ,观察其对细胞因子 IFN-γ、IL - 2及 NO的影响。方法　碱裂解法大量制备 pc- ROP1质粒 DNA,经肌肉注射免疫 BAL B/ c小鼠 ,每只鼠注射 10 0μg,两周后同量加强免疫一次 ,以 pc DNA 3空质粒及生理盐... 目的　用 pc- ROP1重组质粒免疫小鼠 ,观察其对细胞因子 IFN-γ、IL - 2及 NO的影响。方法　碱裂解法大量制备 pc- ROP1质粒 DNA,经肌肉注射免疫 BAL B/ c小鼠 ,每只鼠注射 10 0μg,两周后同量加强免疫一次 ,以 pc DNA 3空质粒及生理盐水组为对照。分别于免疫后第 30天、5 0天、70天共三次用双夹心 EL ISA测定血清细胞因子 IFN-γ、IL - 2含量 ;酶法测定NO活性。结果　三次检测免疫组 IFN-γ、IL - 2及 NO含量均显著高于对照组 ,随着免疫时间的延长有增高趋势。结论　 pc-ROP1重组质粒 DNA免疫小鼠 ,可刺激细胞因子 IFN-γ、IL - 2产生 。 展开更多

关键词 弓形虫病 棒状体蛋白 DNA免疫 RO01基因 质粒

在线阅读 下载PDF 职称材料

隐孢子虫卵囊分离纯化方法的比较研究 被引量：18

8

作者 郭步平 连德润 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 1997年第1期34-35,共2页

本文对分离纯化隐孢子虫卵囊的四种方法进行了比较研究，结果显示硫酸锌漂浮—耐酸滤过漏斗法具有操作简便、经济、纯化效果好等优点。适合国内普通实验室使用。

关键词 隐孢子虫 卵囊 分离纯化

在线阅读 下载PDF 职称材料

含弓形虫ROP1基因真核表达重组质粒DNA免疫小鼠的研究Ⅴ.IFN-γ基因真核表达重组质粒的构建及其在DNA免疫中基因佐剂的作用 被引量：5

9

作者 郭虹 陈观今 郑焕钦 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 1999年第6期14-17,共4页

目的　构建ＩＦＮ－γ基因真核表达重组质粒作为基因佐剂，观察其与ｐｃＤＮＡ３－ＲＯＰ１（ｐｃ－ＲＯＰ１） ＤＮＡ共同免疫小鼠所诱导的免疫应答。方法　将ＩＦＮ－γ基因片段定向插入真核表达载体ｐｃＤＮＡ３，双酶切鉴定，获得... 目的　构建ＩＦＮ－γ基因真核表达重组质粒作为基因佐剂，观察其与ｐｃＤＮＡ３－ＲＯＰ１（ｐｃ－ＲＯＰ１） ＤＮＡ共同免疫小鼠所诱导的免疫应答。方法　将ＩＦＮ－γ基因片段定向插入真核表达载体ｐｃＤＮＡ３，双酶切鉴定，获得ｐｃＩＦＮ 重组子；碱裂解法大量制备，经肌肉注射免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，每只鼠注射ｐｃＩＦＮ、ｐｃ－ＲＯＰ１ 各１００μｇ，两周后同量加强免疫一次，以ｐｃＤＮＡ３空质粒及生理盐水组为对照。分别于免疫后第３０ 天、５０ 天、７０天共三次用ＭＴＴ法测定小鼠脾脏Ｔ淋巴细胞增殖活性及ＮＫ细胞活性；双夹心ＥＬＩＳＡ 测定血清细胞因子ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２及酶法测定ＮＯ含量；ＥＬＩＳＡ法测定ＩｇＧ抗体滴度。结果　构建成功的作用下，该两项指标均明显提高，且ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２ 及ＮＯ水平均较不加佐剂组显著提高（Ｐ＜ ０．０１）；而对ＩｇＧ抗体滴度无显著影响（Ｐ＞ ０．０５。结论　ＩＦＮ－γ基因佐剂具有协同ｐｃ－ＲＯＰ１ＤＮＡ免疫的作用，可增强免疫鼠细胞免疫应答，ＩＦＮ－γ。 展开更多

关键词 弓形虫 棒状体蛋白1 DNA免疫 IFN-γ基因佐剂

在线阅读 下载PDF 职称材料

聚合酶链反应技术在隐孢子虫检测中的应用研究 被引量：15

10

作者 郭步平 连德润 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 1998年第2期33-35,共3页

根据Laxer等克隆的微小隐孢子虫（C．parvum）核酸序列片断（pHCl）设计并合成一对长度为20hp的寡核苷酸引物。应用聚合酶链反应，对隐孢子虫核酸进行扩增，结果扩增出452hP的特异性条带，阴性对照无扩增。结果表明所合成引物有高度特... 根据Laxer等克隆的微小隐孢子虫（C．parvum）核酸序列片断（pHCl）设计并合成一对长度为20hp的寡核苷酸引物。应用聚合酶链反应，对隐孢子虫核酸进行扩增，结果扩增出452hP的特异性条带，阴性对照无扩增。结果表明所合成引物有高度特异性。用PCR检测隐抱子虫感染动物模型，36份镜检卵囊阳性小鼠粪便均为阳性，18份镜检阴性小鼠粪便17份阴性，一份阳性。 展开更多

关键词 隐孢子虫 聚合酶链反应 检测

在线阅读 下载PDF 职称材料

恶性疟原虫疫苗研究Ⅳ──恶性疟原虫保护性抗原复合基因(PfCMR)的克隆与高效表达 被引量：2

11

作者 徐劲 余新炳 +3 位作者 罗树红 吴小舟 方建民 谢毅 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 1997年第1期17-20,共4页

将恶性疟原虫保护性抗原复合基因（PfCMR）与表达质粒pWR450—1分别经BamHI、EcoRI双酶切后回收、纯化和重组并转化大肠杆菌JM109，再经含氨苄青霉素LB培基初筛后，挑白色菌落扩增，用PCR复筛和双酶切鉴定，阳性克隆子pWR450—1—B14用I... 将恶性疟原虫保护性抗原复合基因（PfCMR）与表达质粒pWR450—1分别经BamHI、EcoRI双酶切后回收、纯化和重组并转化大肠杆菌JM109，再经含氨苄青霉素LB培基初筛后，挑白色菌落扩增，用PCR复筛和双酶切鉴定，阳性克隆子pWR450—1—B14用IPTG诱导，在JM109中表达。表达产物经SDS—PAGE分析，在65kDa处出现较宽的蛋白条带。用SOS显色法证实此表达蛋白具有β-半乳糖苷酶活性。表达的融合蛋白与抗恶性疟原虫多克隆免疫血清特异结合．其滴度高达1：3200；Westernblot分析显示，表达蛋白能与特异性抗体产生较强的免疫反应。上述结果提示表达的融合蛋白具有生物学和免疫学活性。 展开更多

关键词 疟原虫 保护性抗原 复合基因 疟疾疫苗

在线阅读 下载PDF 职称材料

恙螨体内恙虫病立克次体经精胞传递的实验研究 被引量：5

12

作者 黎家灿 郑小英 +1 位作者 陈成福 奚志勇 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 1997年第3期3-5,共3页

本文报道地里纤恙螨雄虫人工接种恙虫病立克次体后与雌虫配对培养和传代，应用幼虫叮咬小鼠分离立克次体和PCR结合核酸杂交（核酸杂交检测PCR产物）检测子代体内立克次体的结果。幼虫叮咬小鼠分离立克农作检查第3子代幼虫体内立克次体... 本文报道地里纤恙螨雄虫人工接种恙虫病立克次体后与雌虫配对培养和传代，应用幼虫叮咬小鼠分离立克次体和PCR结合核酸杂交（核酸杂交检测PCR产物）检测子代体内立克次体的结果。幼虫叮咬小鼠分离立克农作检查第3子代幼虫体内立克次体阳性。PCR结合核酸杂交检测佛山市的病人恙虫病立克次休（未定株）接种雄虫和健康雌虫配对的第1、2、3子代成虫体内立克次体DNA阳性。Karp株接种雄虫的第1子代幼虫体内立克次体的幼虫叮咬小鼠法和PCR结合核酸杂交均呈阳性。 展开更多

关键词 地里纤恙螨 恙虫病立克次体 精胞传递

在线阅读 下载PDF 职称材料

恶性疟原虫FCC1/HN株CSP基因表达产物免疫鼠体内抗原定位研究

13

作者 方政 刘彦文 +2 位作者 鄂群 史玉坤 余新炳 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2001年第3期40-42,F002,共4页

目的　用恶性疟原虫FCC1/HN株CSP基因表达产物免疫小鼠 ,观察其在宿主体内各组织的抗原分布情况。方法　提取目的基因PfCSP在HeLa细胞中的表达产物 ,免疫注射BALB/c小鼠。取免疫后 4周及 7周小鼠心脏、肝脏、脑、脾及肌肉 ,通过免疫酶... 目的　用恶性疟原虫FCC1/HN株CSP基因表达产物免疫小鼠 ,观察其在宿主体内各组织的抗原分布情况。方法　提取目的基因PfCSP在HeLa细胞中的表达产物 ,免疫注射BALB/c小鼠。取免疫后 4周及 7周小鼠心脏、肝脏、脑、脾及肌肉 ,通过免疫酶组织化学法及间接免疫荧光法检测组织内的抗原。结果　免疫 7周后的BALB/c小鼠肝脏组织枯否氏细胞内及肝细胞膜上可见棕黄色特异性抗原 -抗体反应 ,而免疫鼠心、脑、肌肉未出现明显的阳性反应。结论　恶性疟原虫FCC1/HN株CSP基因表达蛋白能被肝实质细胞特异性识别 。 展开更多

关键词 恶性疟原虫 环子孢子蛋白 CSP基因 基因表达产物 抗原定位

在线阅读 下载PDF 职称材料

卡氏肺孢子虫感染裸小鼠的实验研究 被引量：4

14

作者 陈发凯 徐秉锟 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 1992年第5期20-21,共2页

用醋酸可的松诱导Wistar大鼠获得卡氏肺孢子虫感染,取大鼠肺组织含虫匀装直接接种于NCS系裸小鼠两侧肺0.05ml,以及接种保存于-70℃低温中5月以上的含虫肺匀奖和分离纯化后的虫体,均使裸小鼠获得感染,发生卡氏肺孢子虫肺炎。在国内首先... 用醋酸可的松诱导Wistar大鼠获得卡氏肺孢子虫感染,取大鼠肺组织含虫匀装直接接种于NCS系裸小鼠两侧肺0.05ml,以及接种保存于-70℃低温中5月以上的含虫肺匀奖和分离纯化后的虫体,均使裸小鼠获得感染,发生卡氏肺孢子虫肺炎。在国内首先建立起裸小鼠卡氏肺孢子虫肺炎实验模型。 展开更多

关键词 裸小鼠 孢子虫 感染

在线阅读 下载PDF 职称材料

卡氏肺孢子虫个体发育与种群动力学的研究 被引量：1

15

作者 陈发凯 徐秉锟 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 1993年第3期21-23,共3页

首先建立Wistar大鼠及NCS系裸小鼠(nu/nu)卡氏肺孢子虫(Pneumocy stis carinii,P.c)实验动物感染模型,经梯度离心得到纯净的活体P.c包囊,证明了包囊能发育为滋养体阶段。用激光微束系统对含8个子孢子的包囊施行激光显微外科手术,切除包... 首先建立Wistar大鼠及NCS系裸小鼠(nu/nu)卡氏肺孢子虫(Pneumocy stis carinii,P.c)实验动物感染模型,经梯度离心得到纯净的活体P.c包囊,证明了包囊能发育为滋养体阶段。用激光微束系统对含8个子孢子的包囊施行激光显微外科手术,切除包囊内4个或2个子孢子,再把术后包囊接种裸小鼠,表明术后包囊仍具有感染力,仍能发育为滋养体及含8个子孢子的包囊,认为8个子孢子的包囊为成熟包囊。用激光流式细胞仪对虫体种群的DNA、RNA、蛋白质含量动力学进行了分析。 展开更多

关键词 卡氏肺孢子虫 个体发育 种群动力学

在线阅读 下载PDF 职称材料

猪蛔虫雌雄个体蛋白质与酶变异初步研究

16

作者 潘敬之 柯小麟 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 1992年第6期9-10,共2页

本文以聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳分析了猪蛔虫酶与蛋白质的群体内变异。初步结果表明:在雌雄虫各10个个体的样本中,依据某些区带的增减或迁移率改变,可以将梯度胶蛋白质电泳图谱分为4型;将非特异性脂酶同工酶谱分为4型;但苹果酸脱氢酶谱... 本文以聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳分析了猪蛔虫酶与蛋白质的群体内变异。初步结果表明:在雌雄虫各10个个体的样本中,依据某些区带的增减或迁移率改变,可以将梯度胶蛋白质电泳图谱分为4型;将非特异性脂酶同工酶谱分为4型;但苹果酸脱氢酶谱则无任何个体变异。而且,没有检测到任何与雌雄性别有关的蛋白质或酶的差异。 展开更多

关键词 猪蛔虫 电泳 分析 变异 蛔虫病

在线阅读 下载PDF 职称材料

弓形虫P30基因DNA免疫小鼠诱导的细胞免疫应答 被引量：16

17

作者 周永安 陈观今 +2 位作者 郭虹 郑焕钦 吕芳丽 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 1999年第3期11-13,共3页

目的用pcDNA_3－P30真核表达质粒直接免疫小鼠，观察所诱导的小鼠细胞免疫应答。方法大量制备量级质粒pcDNA_3－P30，经肌肉注射BALB／c小鼠，每隔3周接种1次，一共免疫3次。用MTT方法对脾脏的NK杀伤细胞率和淋巴细胞的转化率进行测定... 目的用pcDNA_3－P30真核表达质粒直接免疫小鼠，观察所诱导的小鼠细胞免疫应答。方法大量制备量级质粒pcDNA_3－P30，经肌肉注射BALB／c小鼠，每隔3周接种1次，一共免疫3次。用MTT方法对脾脏的NK杀伤细胞率和淋巴细胞的转化率进行测定，采用免疫荧光法对CD4+、CD8+细胞进行测定。结果实验组NK细胞杀伤率为：70．0％±3．64，对照组及空白对照组分别为48．5％±6．06和470％±5．93，实验组NK细胞活性比对照组明显增高（P＜0．05）；ConA刺激小鼠淋巴细胞转化实验，实验组与对照组及空白对用级差异无显著性（P＞0．05）;对T淋巴细胞亚群CD4＋、CD8＋进行动态分析，可见随着感染时间的延长，CD8＋的数量逐渐上升，CD4＋／CD8＋的比率逐渐下降，实验组与对照组及空白对照有明显差异（P＜0．05）。结论重组质粒pcDNA3-p30免疫BALB／c小鼠可诱导一定的细胞免疫。 展开更多

关键词 弓形虫 DNA疫苗 P30基因 细胞免疫应答

在线阅读 下载PDF 职称材料

日本血吸虫卵黄铁蛋白DNA免疫在小鼠诱生的保护性免疫力 被引量：13

18

作者 周俊梅 余新炳 +2 位作者 吴忠道 郑亦男 卞国武 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2001年第2期11-13,共3页

目的　研究日本血吸虫卵黄铁蛋白基因DNA免疫小鼠诱生的保护性免疫力。方法　分两大组进行 ,实验Ⅰ小鼠有预感染 ,实验Ⅱ小鼠没有。将构建的日本血吸虫卵黄铁蛋白基因真核表达重组质粒 pL SjFerl经左后腿肌肉注射BALB/c小鼠 ,共免疫 2... 目的　研究日本血吸虫卵黄铁蛋白基因DNA免疫小鼠诱生的保护性免疫力。方法　分两大组进行 ,实验Ⅰ小鼠有预感染 ,实验Ⅱ小鼠没有。将构建的日本血吸虫卵黄铁蛋白基因真核表达重组质粒 pL SjFerl经左后腿肌肉注射BALB/c小鼠 ,共免疫 2次 ,间隔 2周。末次免疫后 5w以血吸虫尾蚴攻击感染 ,6w后计数成虫负荷及肝组织虫卵数和死亡卵百分比。设空质粒免疫组为对照组。结果　PL SjFerl免疫小鼠 ,在实验Ⅰ主要诱生IgG1和IgG3,在实验Ⅱ主要诱生IgG2a和IgG2b ;实验组尚产生较高水平的IgA和IFN γ应答。pL SjFerl免疫小鼠诱生一定程度的减虫率 (2 6 .47% ,34 .0 8% ) ,减卵率(4 0 .0 2 % ,36 .83% )和死亡卵百分比 (2 7.5 0 % ,30 .13% )。结论　PL SjFerl免疫小鼠能产生较明显的保护性免疫力 ,值得进一步深入研究。 展开更多

关键词 日本血吸虫 卵黄铁蛋白 DNA免疫 保护性免力 小鼠

在线阅读 下载PDF 职称材料

弓形虫ZS2株抗原基因的扩增及克隆 被引量：11

19

作者 周永安 陈观今 +2 位作者 刘彦文 罗树红 郑焕钦 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 1998年第5期14-16,共3页

扩增弓形虫ZS2株P30抗原基因，构建PcDNA3—P30真核表达重组质粒。方法本文采用PCR技术，自行设计一对寡核苷酸引物（P1，P2），从弓形虫ZS2基因组DNA中特异扩增出编码P30抗原的基因片段。扩增的目的片段经纯化后用EcoRI和Hind双酶切后... 扩增弓形虫ZS2株P30抗原基因，构建PcDNA3—P30真核表达重组质粒。方法本文采用PCR技术，自行设计一对寡核苷酸引物（P1，P2），从弓形虫ZS2基因组DNA中特异扩增出编码P30抗原的基因片段。扩增的目的片段经纯化后用EcoRI和Hind双酶切后，克隆到真核表达质粒pcDNA3中，转化入大肠杆菌TG1，用氨共青霉素和PCR初筛，将PCR扩增阳性的重组子用EcoRI和Kind双酶切鉴定。结果从弓形虫ZS2株DNA中扩增出1025bP的P30基因，构建重组质粒PcDNA3—P30，酶切产物的大小分别与预期相符。结论成功地对弓形虫ZS2株P30基因进行体外扩增及构建真核表达重组质粒PcDNA3—P30，为重组P30抗原及核酸疫苗研究做好准备。 展开更多

关键词 表面抗原P30 聚合酶链反应 弓形体 基因克隆

在线阅读 下载PDF 职称材料

编码弓形虫ROP1蛋白基因的体外扩增、克隆及在E.coli中的表达 被引量：7

20

作者 郭虹 陈观今 +2 位作者 刘彦文 郑焕钦 罗树红 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 1999年第2期15-18,共4页

目的构建弓形虫棒状体蛋白（ＲＯＰ１）基因重组质粒并在Ｅ．ｃｏｌｉ中表达。方法用ＲＨ株接种小鼠，收集腹水，纯化速殖子，抽提基因组ＤＮＡ；据ＲＯＰ１基因序列设计合成一对引物，将上、下游引物分别引入ＥｃｏＲＩ，ＢａｍＨＩ酶... 目的构建弓形虫棒状体蛋白（ＲＯＰ１）基因重组质粒并在Ｅ．ｃｏｌｉ中表达。方法用ＲＨ株接种小鼠，收集腹水，纯化速殖子，抽提基因组ＤＮＡ；据ＲＯＰ１基因序列设计合成一对引物，将上、下游引物分别引入ＥｃｏＲＩ，ＢａｍＨＩ酶切位点，用ＰＣＲ技术从ＲＨ株基因组ＤＮＡ中扩增编码ＲＯＰ１的基因片段，插入ｐＢＶ２２０质粒，转化大肠杆菌ＤＨ５α感受态细胞，于氨苄阳性ＬＢ培养平板上筛选阳性克隆，酶切鉴定；经温度诱导在Ｅ．ｃｏｌｉ中表达，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及免疫印迹分析。结果ＲＯＰ１基因体外扩增产物大小与预期值相符，约７５６ｂｐ；构建成功ｐＢＶ２２０－ＲＯＰ１重组质粒；ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、免疫印迹显示特异蛋白条带的分子量约４３ｋＤ，表达产量约占菌体蛋白１３．２３％。结论从弓形虫基因组ＤＮＡ中获取ＲＯＰ１基因，并成功构建ｐＢＶ２２０－ＲＯＰ１重组质粒，诱导表达ＲＯＰ１非融合蛋白，为进一步分离纯化、用于对弓形虫侵入机制及免疫特性的研究做好准备。 展开更多

关键词 弓形体 棒状体蛋白1 基因克隆 基因重组

在线阅读 下载PDF 职称材料