造血干细胞移植——一种免疫治疗方法 被引量：1

1

作者 何家武 熊仕秋 《海南医学院学报》 CAS 2002年第3期190-192,共3页

关键词 造血干细胞 细胞移植 免疫疗法 恶性血液病

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单抗免疫导向药物3Al-DM对CFU-GM的效应试验

2

作者 林学颜 鄂学平 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1996年第1期18-19,共2页

应用抗Ｔ淋巴细胞单抗（ＭｃＡｂ）３Ａｌ－柔霉素（ＤＭ）免疫结合物，在体外对骨髓粒－单 核细胞集落形成单位（ＣＦＵ－ＧＭ）进行导向杀伤效应试验。结果与Ｂ细胞单抗－ＤＭ结合物十分近 似。说明单抗３Ａｌ－ＤＭ对ＣＦＵ－ＧＭ没... 应用抗Ｔ淋巴细胞单抗（ＭｃＡｂ）３Ａｌ－柔霉素（ＤＭ）免疫结合物，在体外对骨髓粒－单 核细胞集落形成单位（ＣＦＵ－ＧＭ）进行导向杀伤效应试验。结果与Ｂ细胞单抗－ＤＭ结合物十分近 似。说明单抗３Ａｌ－ＤＭ对ＣＦＵ－ＧＭ没有影响，不损伤正常骨髓造血干细胞，为３Ａｌ－ＤＭ用于体外 骨髓净化提供实验依据。 展开更多

关键词 免疫导向药物 CFU-GM 骨髓移植 单克隆抗体

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抗人B淋巴母细胞单克隆抗体B159－PAP免疫毒素的细胞毒作用 被引量：4

3

作者 杨斌 林学颜 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 1996年第1期22-25,共4页

应用针对人Ｂ淋巴母细胞的Ｂ１５９ＭｃＡｂ和美洲商陆抗病毒蛋白（ＰＡＰ）构建Ｂ１５９－ＰＡＰ免疫毒素。所得免疫毒素在２．５９×１０－１０Ｍ时，可使靶细胞（Ｒａｊｉ）的蛋白质合成抑制率达５０％；当其浓度为４．４４×... 应用针对人Ｂ淋巴母细胞的Ｂ１５９ＭｃＡｂ和美洲商陆抗病毒蛋白（ＰＡＰ）构建Ｂ１５９－ＰＡＰ免疫毒素。所得免疫毒素在２．５９×１０－１０Ｍ时，可使靶细胞（Ｒａｊｉ）的蛋白质合成抑制率达５０％；当其浓度为４．４４×１０－１０Ｍ时，台盼蓝染料排斥法测得靶细胞产生５０％的细胞毒作用；而对非靶细胞（Ｋ５６２、Ｓｐ２／０）产生上述效应所需的浓度均大于１０－７Ｍ。同样，当Ｂ１５９－ＰＡＰ的浓度为１０－７Ｍ时，对Ｒａｊｉ细胞的对数杀伤为３．７８，而对Ｋ５６２和ＳＰ２／０的对数杀伤在０．７左右。说明新型Ｂ１５９－ＰＡＰ免疫毒素对靶细胞有高效特异的杀伤作用，而对非靶细胞的杀伤作用很弱。 展开更多

关键词 单克隆抗体 免疫毒素 美洲商陆 抗病毒蛋白

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沙眼衣原体MOMP基因真核表达载体免疫小鼠的研究 被引量：1

4

作者 彭辉 宁波 +1 位作者 袁广卿 徐霖 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2003年第1期7-8,41,共3页

目的　用pcDNA3-MOMP真核表达质粒直接免疫小鼠 ,观察小鼠对沙眼衣原体MOMP基因疫苗的免疫应答。方法　大量制备重组质粒 pcDNA3-MOMP ,给小鼠肌肉注射 ,每 3周免疫 1次 ,共免疫 3次。用微量免疫荧光及MTT法检测小鼠血清抗体及脾细胞对... 目的　用pcDNA3-MOMP真核表达质粒直接免疫小鼠 ,观察小鼠对沙眼衣原体MOMP基因疫苗的免疫应答。方法　大量制备重组质粒 pcDNA3-MOMP ,给小鼠肌肉注射 ,每 3周免疫 1次 ,共免疫 3次。用微量免疫荧光及MTT法检测小鼠血清抗体及脾细胞对沙眼衣原体的特异性增殖反应。结果　初次免疫接种后小鼠血清中检测出特异性抗体 ,加强免疫后抗体水平明显上升 ,免疫荧光滴度最高达 1∶2 5 6。脾细胞对沙眼衣原体的刺激指数明显高于对照组 (P <0 0 1)。结论　pcDNA3-MOMP在小鼠体内既可诱导体液免疫应答 ,又可诱导特异性细胞免疫应答。 展开更多

关键词 沙眼衣原体 主要外膜蛋白 基因免疫

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人ureb1在大肠杆菌中高效表达及其抗体的制备 被引量：5

5

作者 明文玉 林学颜 +1 位作者 银巍 顾军 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期228-231,共4页

目的 :构建人的ureb1(hureb1)原核高效表达重组质粒 ,以此表达的外源蛋白为抗原制备抗ureb1的抗体。方法 :用XhoI/NotI从pGU 2质粒酶切得到hureb1的ORF与pGEX 4T 2的XhoI/NotI大片段连接 ,构建表达GST hureb1融合蛋白的重组载体。转化... 目的 :构建人的ureb1(hureb1)原核高效表达重组质粒 ,以此表达的外源蛋白为抗原制备抗ureb1的抗体。方法 :用XhoI/NotI从pGU 2质粒酶切得到hureb1的ORF与pGEX 4T 2的XhoI/NotI大片段连接 ,构建表达GST hureb1融合蛋白的重组载体。转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,IPTG诱导表达。以粗制的GST hureb1融合蛋白分别免疫大白兔和小鼠 ,制备抗hureb1的多克隆抗体和单克隆抗体 ,采用WesternBlot进行特异性鉴定。结果 :构建了高效表达GST hureb1融合蛋白的原核表达载体 ,融合蛋白的表达量占菌体蛋白质总量的 33 45 %。以大肠杆菌表达的GST hureb1融合蛋白免疫动物制备了高滴度、高特异性的抗hureb1的抗体。结论 :利用重组GST hureb1融合蛋白免疫动物可获得高滴度的抗hureb1抗体。重组GST 展开更多

关键词 人ureb1 DNA 重组 原核表达载体 抗体 大肠杆菌 重组融合蛋白 质粒

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单克隆抗-D细胞株的建立及抗-D抗体Fab段的基因序列分析 被引量：6

6

作者 付涌水 曹开源 +1 位作者 李树浓 张春艳 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期276-281,共6页

目的 :建立分泌抗 -D抗体的人B淋巴细胞株 ,分析编码一株人单克隆抗 -D抗体Fab段的基因序列。方法 :以EB病毒 (EBV)转化分泌抗 -D抗体的人B淋巴细胞 ,建立分泌抗 -D抗体的淋巴细胞株。设计扩增人lgM重链Fd段及κ轻链的引物 ,以聚合酶链... 目的 :建立分泌抗 -D抗体的人B淋巴细胞株 ,分析编码一株人单克隆抗 -D抗体Fab段的基因序列。方法 :以EB病毒 (EBV)转化分泌抗 -D抗体的人B淋巴细胞 ,建立分泌抗 -D抗体的淋巴细胞株。设计扩增人lgM重链Fd段及κ轻链的引物 ,以聚合酶链反应进行扩增 ,对扩增产物进行分子克隆及测序。结果 :分别用轻链引物和重链引物从一分泌lgM抗 -D的单克隆细胞株扩增出一约 650bp和 70 0bp的特异带。序列分析表明 ,其核苷酸及其所推导的氨基酸 (AA)序列符合人lgFab段的序列特征。结论 :获得了抗 -D抗体Fab段基因 ,为基因工程抗 展开更多

关键词 单克隆抗体 序列分析 聚合酶链反应 抗-D抗体 FAB段 新生儿溶血病

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广州地区性病砂眼衣原体分离株血清型分析 被引量：11

7

作者 宁波 涂裕英 +2 位作者 徐帆 冯慧敏 白桦 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 1994年第3期23-25,共3页

用砂眼衣原体特异性单克隆抗体对１９８８年至１９９３年间从广州地区成人泌尿生殖道标本分离的１２１株砂眼衣原体以微量免疫荧光法进行了血清分型。结果表明分离株中Ｂ组血清型最多（Ｂ、Ｄ、Ｄ－和Ｅ），共６７株占５５％；Ｇ和Ｆ型... 用砂眼衣原体特异性单克隆抗体对１９８８年至１９９３年间从广州地区成人泌尿生殖道标本分离的１２１株砂眼衣原体以微量免疫荧光法进行了血清分型。结果表明分离株中Ｂ组血清型最多（Ｂ、Ｄ、Ｄ－和Ｅ），共６７株占５５％；Ｇ和Ｆ型各１２株，共占２０％；Ｃ组血清型（Ｃ、Ｈ、Ｉ、Ｊ和Ｋ）共２３株，占１９％；混合型和非典型７株，占６％。未发现Ｌ型砂眼衣原体。血清型分布基本同国外报道一致。提示广州地区大多数性病砂眼衣原体感染可能由境外传入。 展开更多

关键词 砂眼衣原体 血清分型 性病

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鼻咽癌患者外周血Th1细胞的变化及其与病程的关系 被引量：4

8

作者 杨世成 李树浓 +2 位作者 刘芳 麦伟源 郭翔 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1998年第3期220-223,共4页

利用细胞因子诱生及ＥＬＩＳＡ等技术，研究了３８例不同分期的鼻咽癌（ＮＰＣ）患者、２３例正常人外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）分泌的细胞因子模式，较系统地研究了ＣＤ４＋Ｔ淋巴细胞亚群Ｔｈ１和Ｔｈ２所分泌的代表性的细胞因子类... 利用细胞因子诱生及ＥＬＩＳＡ等技术，研究了３８例不同分期的鼻咽癌（ＮＰＣ）患者、２３例正常人外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）分泌的细胞因子模式，较系统地研究了ＣＤ４＋Ｔ淋巴细胞亚群Ｔｈ１和Ｔｈ２所分泌的代表性的细胞因子类型ＩＬ－２、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＩＬ－１０等的变化；同时检测了ＮＰＣ患者血清中ＩＬ－２和ＩＬ－４水平。发现ＮＰＣ患者ＰＢＭＣ体外分泌ＩＬ－２的水平下降，ＩＬ－４的水平增高；血清中ＩＬ－２水平降低，而ＩＬ－４的水平显著升高，并且随着病程有进行性发展的趋势。提示Ｔｈ１／Ｔｈ２细胞亚群在不同临床分期的ＮＰＣ患者呈现比例失调。 展开更多

关键词 鼻咽癌 外周血 TH1细胞 单个核细胞

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人CD154-GST融合蛋白基因在大肠杆菌中的表达 被引量：4

9

作者 张春艳 李树浓 +2 位作者 宁波 张志方 曹开源 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第8期673-677,共5页

目的 :为制备重组人CD15 4-谷胱甘肽巯基转移酶 (GST)融合蛋白 (hCD15 4-GST) ,用于人CD15 4单克隆抗体研制。方法 :根据人CD15 4基因序列设计合成特异性引物 ,RT -PCR扩增人CD15 4基因 ,并插入融合蛋白原核表达载体pGEX - 4T - 1中 ,... 目的 :为制备重组人CD15 4-谷胱甘肽巯基转移酶 (GST)融合蛋白 (hCD15 4-GST) ,用于人CD15 4单克隆抗体研制。方法 :根据人CD15 4基因序列设计合成特异性引物 ,RT -PCR扩增人CD15 4基因 ,并插入融合蛋白原核表达载体pGEX - 4T - 1中 ,得到重组表达质粒pGEX - 4T - 1/CD15 4;用此重组质粒转化大肠杆菌BL2 1细胞 ,转化菌落经BamHⅠ、EcoRⅠ酶切鉴定。IPTG诱导大肠杆菌表达人CD15 4蛋白 ,SDS -PAGE电泳鉴定表达产物。结果 :从人外周血淋巴细胞扩增出 82 0bp的hCD15 4cDNA ;将其克隆至pGEX - 4T - 1质粒中 ,经双酶切鉴定及DNA序列分析证实含有目的基因 ;IPTG诱导后的大肠杆菌经SDS -PAGE电泳鉴定出现明显的 5 5kD蛋白带。结论 :成功构建了人CD15 4-GST原核表达质粒 ,并在大肠杆菌中表达出人CD15 4-GST融合蛋白 ,为人CD15 展开更多

关键词 融合蛋白 克隆 移植排斥反应 CD154-GST

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人白细胞介素10（hIL－10）基因的克隆和序列测定 被引量：2

10

作者 张月梅 王斌 +1 位作者 印湖莲 杨斌 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 1996年第4期17-20,共4页

应用逆转录多聚酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术，自行设计并合成一对引物，成功地从活化的正常人外周血单个核细胞中扩增出ｈＩＬ－１０ｃＤＮＡ基因。并定向插入ｐＵＣ１８载体中，经ＤＮＡ序列测定最终确定为ｈｌＬ－１０ｃＤＮＡ基... 应用逆转录多聚酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术，自行设计并合成一对引物，成功地从活化的正常人外周血单个核细胞中扩增出ｈＩＬ－１０ｃＤＮＡ基因。并定向插入ｐＵＣ１８载体中，经ＤＮＡ序列测定最终确定为ｈｌＬ－１０ｃＤＮＡ基困，这将为令后ｈＩＬ－１０基因探针的制备和基因表达，进一步在基因水平上探讨ｈＩＬ－１０的生物学功能提供了物质基础。 展开更多

关键词 人 白细胞介素10 CDNA 分子 克隆 序列 测定

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冠心病病人肺炎衣原体、巨细胞病毒感染的检测 被引量：2

11

作者 董吁钢 孙晓欣 +3 位作者 宁波 彭辉 吴杏 马虹 《中山医科大学学报》 CSCD 北大核心 2001年第4期317-318,共2页

关键词 冠心病 肺炎衣原体 巨细胞病 感染 检测

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用多聚赖氨酸作载体制备抗甲胺磷抗体的研究 被引量：1

12

作者 赵肃清 孙远明 +2 位作者 张春艳 黄晓钰 雷红涛 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期380-380,共1页

关键词 多聚赖氨酸 载体 制备 抗甲胺磷抗体

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MHC基因反义RNA导入造血干/祖细胞的研究 被引量：1

13

作者 邓宇斌 李树浓 +1 位作者 梁天文 王斌 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第1期23-26,共4页

目的：将ＨＬＡＤＲＢ１基因ｃＤＮＡ片段反向插入逆转录病毒质粒ＺＩＰｎｅｏＳＶ（×）ＢａｍＨＩ位点中，构建了ＨＬＡＤＲＢ１基因的逆转录病毒反义ＲＮＡ重组表达载体，用脂质体法导入ＰＡ３１７细胞。方法：用免疫磁珠... 目的：将ＨＬＡＤＲＢ１基因ｃＤＮＡ片段反向插入逆转录病毒质粒ＺＩＰｎｅｏＳＶ（×）ＢａｍＨＩ位点中，构建了ＨＬＡＤＲＢ１基因的逆转录病毒反义ＲＮＡ重组表达载体，用脂质体法导入ＰＡ３１７细胞。方法：用免疫磁珠法分离，富集ＣＤ３４＋脐血造血干／祖细胞。含编码人ＨＬＡＤＲＢ１基因的ｐｃＤＶ１质粒，用ＢａｍＨＩ酶解，回收ＨＬＡＤＲＢ１ｃＤＮＡ片段，将ｃＤＮＡ片段反向插入ｐＺＩＰｎｅｏＳＶ（×）逆转录病毒载体，经扩增、抽提、酶切鉴定，用脂质体将反义ＲＮＡ重组体导入到ＰＡ３１７细胞，用含Ｇ４１８３００μｇ／ｍｌ培养液筛选，获抗性克隆，流式细胞仪检测ＨＬＡＤＲ抗原阳性细胞数。结果：重组质粒转染ＰＡ３１７细胞后，其病毒滴度达１×１０５ＣＦＵ／ｍｌ，脐血造血干／祖细胞经免疫磁珠富集后，ＣＤ３４＋细胞高达８５．０％～９０．０％，导入反义ＲＮＡ的脐血干细胞，其ＨＬＡＤＲ抗原表达从导入前的４５．０％降至２８．０％，抑制率达３８２％，而导入空载体后从５６．０％降至４５．０％，差异不显著。结论：ＨＬＡＤＲ的反义ＲＮＡ能导入脐血干细胞。 展开更多

关键词 造血干 祖细胞 MHC-Ⅱ类基因 移植免疫应答

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反义人IL-10和反义病毒性IL-10抗鼻咽癌细胞成瘤效应的研究 被引量：1

14

作者 陶剑平 杨琨 +1 位作者 朱振宇 林学颜 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第8期543-545,549,共4页

目的:探讨反义人IL-10和反义病毒性IL-10抑制鼻咽癌细胞成瘤的效果。方法:扩增及克隆hIL-10 cDNA和 vIL-10基因,构建反义hIL-10和反义vIL-10双价真核表达载体pcDNA3/AS hIL-10+AS vIL-10,转染鼻咽癌细胞株SUNE。将转染阳性的SUNE细胞克... 目的:探讨反义人IL-10和反义病毒性IL-10抑制鼻咽癌细胞成瘤的效果。方法:扩增及克隆hIL-10 cDNA和 vIL-10基因,构建反义hIL-10和反义vIL-10双价真核表达载体pcDNA3/AS hIL-10+AS vIL-10,转染鼻咽癌细胞株SUNE。将转染阳性的SUNE细胞克隆和未转染的SUNE细胞接种SCID小鼠和经健康人外周血白细胞免疫重建的SCID小鼠（hu-PBL-SCID鼠）,观察成瘤效应。结果:ELISA法测得未转染SUNE细胞培养上清液中IL-10和vIL-10的总含量为242±23pg/ml,而转染阳性的SUNE细胞培养上清液中hIL-10和vIL-10的总含量仅为22±6pg/ml。在SCID鼠体内,vIL-10和hIL-10的表达与否,并不影响鼻咽癌细胞的成瘤活性,但在hu-PBL-SCID鼠体内,抑制vIL-10和hIL-10的表达则可明显抑制鼻咽癌细胞的成瘤作用。结论:反义人IL-10和反义病毒性IL-10可显著抑制鼻咽癌细胞在血hu-PBL-SCID鼠体内的成瘤作用,鼻咽癌组织表达vIL-10和hIL-10的确与鼻咽癌免疫耐受有关。 展开更多

关键词 反义人IL-10 反义病毒性IL-10 鼻咽癌 成瘤效应

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抗人B159单抗-表阿霉素与^(125)I-标志物对人B淋巴瘤的体内外效应研究 被引量：1

15

作者 张玲 朱兆玲 林学颜 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第10期703-703,707,共2页

关键词 体内效应 体外效应 抗人B159单抗-表阿霉素 ^125I-标志物 B淋巴瘤

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用PCR技术建立CD23全基因的无性繁殖系 被引量：1

16

作者 王斌 曹丽萍 涂裕英 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1994年第6期344-346,共3页

参照国外已发表的ＣＤ２３ｃＤＮＡ全基因序列，自行设计并合成一对ＤＮＡ引物（２５ｍｅｒ和１８ｍｅｒ），以ＣＤ２３阳性细胞株ＨＦＢｄ２／３ＤＮＡ为模板，应用ＰＣＲ技术，成功地扩增了ＣＤ２３ｃＤＮＡ全基因（９８７ｂｐ，含人... 参照国外已发表的ＣＤ２３ｃＤＮＡ全基因序列，自行设计并合成一对ＤＮＡ引物（２５ｍｅｒ和１８ｍｅｒ），以ＣＤ２３阳性细胞株ＨＦＢｄ２／３ＤＮＡ为模板，应用ＰＣＲ技术，成功地扩增了ＣＤ２３ｃＤＮＡ全基因（９８７ｂｐ，含人工设计的酶切点），并定向克隆入原核表达载体ｐＢＶ２２０，构建了ｐＢｖ２２０－ＣＤ２３全基因重组体，经６种限制性内切酶酶切鉴定，结果与已发表序列的酶切图谱完全一致，初步证实为ＣＤ２３全基因。这将为今后ＣＤ２３基因的序列测定和表达，进一步在基因水平上探讨ＣＤ２３的生物学功能提供了物质基础。 展开更多

关键词 CD23 CDNA 聚合酶链反应 克隆

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PCR扩增CD23全基因 被引量：1

17

作者 王斌 黄树其 《中山医科大学学报》 CSCD 1994年第4期246-248,共3页

参照国外发表的ＣＤ２３全基因序列，自行设计并合成一对ＤＮＡ引物（２５个碱基和１８个碱基），ＵＣＤ２３阳性细胞株ＨＦＢｄ２／ＳＤＮＡ为模板，应用ＰＣＲ技术，在国内首次成功地扩增了ＣＤ２３全基因（９８６ｂｐ），为今后克隆... 参照国外发表的ＣＤ２３全基因序列，自行设计并合成一对ＤＮＡ引物（２５个碱基和１８个碱基），ＵＣＤ２３阳性细胞株ＨＦＢｄ２／ＳＤＮＡ为模板，应用ＰＣＲ技术，在国内首次成功地扩增了ＣＤ２３全基因（９８６ｂｐ），为今后克隆和表达ＣＤ２３基因以及进一步在基因水平上探讨ＣＤ２３的生物学功能研究中提供了物质基础。 展开更多

关键词 基因合成 CD23 聚合酶链反应 免疫球蛋白E FC受体

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单克隆抗体B159－表阿霉素结合物的研制及活性鉴定 被引量：1

18

作者 白丽 林学颜 《单克隆抗体通讯》 CSCD 1995年第3期68-70,共3页

本文报道蒽环类抗癌新药表阿霉素通过支联剂葡聚糖Ｔ１０与Ｂ淋巴细胞白血病单克隆抗体Ｂ１５９交联组成的Ｂ１５９－Ｄｅｘ－ＥＰＩ结合物，每克分子抗体可携带１４克分子的药物。在制备过程中结合物中抗体活性无损失。结合物对靶细胞... 本文报道蒽环类抗癌新药表阿霉素通过支联剂葡聚糖Ｔ１０与Ｂ淋巴细胞白血病单克隆抗体Ｂ１５９交联组成的Ｂ１５９－Ｄｅｘ－ＥＰＩ结合物，每克分子抗体可携带１４克分子的药物。在制备过程中结合物中抗体活性无损失。结合物对靶细胞具有较强的选择性细胞毒作用（ＩＣ５０为０．８８μｇ／ｍｌ），明显优于游离表阿霉素（ＩＣ５０为２．７μｇ／ｍｌ）及无关抗体结合物（ＩＣ５０＞３０μｇ／ｍｌ），对非靶细胞毒性较弱（ＩＣ５０＞３０μｇ／ｍｌ）。 展开更多

关键词 表阿霉素 免疫导向 单克隆抗体 白血病

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鼻咽癌细胞中表达的人白细胞介素18(hIL-18)对鼻咽癌患者外周血CD8^+T细胞细胞毒活性增强作用的研究

19

作者 陶剑平 夏云飞 +2 位作者 张昌卿 李满枝 林学颜 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期36-39,共4页

目的:探讨人白细胞介素18在鼻咽癌细胞中的表达能否提高鼻咽癌病人外周血CD8+T细胞的杀伤活性以及作用途径。方法:构建人白细胞介素18的真核表达载体pcDNA3．1(-)/HIL-18,转染人鼻咽癌细胞株SUNE;以转染的SUNE细胞和未转染的 SUNE细胞... 目的:探讨人白细胞介素18在鼻咽癌细胞中的表达能否提高鼻咽癌病人外周血CD8+T细胞的杀伤活性以及作用途径。方法:构建人白细胞介素18的真核表达载体pcDNA3．1(-)/HIL-18,转染人鼻咽癌细胞株SUNE;以转染的SUNE细胞和未转染的 SUNE细胞为靶细胞,以鼻咽癌患者外周血的 CD8+T细胞为效应细胞,混合培养 12h,用 LDH释放法测定 CD8+T细胞的细胞毒活性;用免疫组化法测定混合培养物中 CD8+T细胞上 Perforin、Fas－L、Granzyme B的表达。结果:所构建的真核表达载体在鼻咽癌细胞中能高效表达hIL-18;ELISA法测得转染阳性细胞培养上清液中hIL-18的含量为(85±10)pg/ml,而未转染的SUNE细胞的培养上清液中hIL-18的含量低于5pg/ml。将表达hIL－18的SUNE细胞与鼻咽癌患者外周血CD8+T细胞混合培养12h后,CD8+T细胞的细胞毒活性显著增强(P＜0．111),尤其是当效应细胞/靶细胞为10:1时,CD8+细胞对转染的SUNE细胞的裂解率高达46．7%,而CD8+T细胞对未转染的SUME细胞的裂解率仅为4．6%。免疫组化法表明,这种杀伤活性的增强与CD8+T细胞表达Perforin有关,而与Fas-L和Granzyme B途径无关。结论:hIL-18能显著增强鼻咽癌患者外周血口CD8+T细胞的体外杀伤活性,这种杀伤活性与 CDS8+细胞表达Perforin有关。 展开更多

关键词 人白细胞介素18 基因转染 基因表达 CD8^+T细胞 细胞毒 穿孔蛋白 鼻咽癌

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人CD23基因的亚克隆与部分序列测定

20

作者 王斌 曹丽萍 +1 位作者 涂裕英 吕凌 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1995年第6期340-342,共3页

已构建的ＣＤ２３ｃＤＮＡ全基因克隆ｐＢＣＤ９７６，以ＥｃｏＲＩ和ＢａｍＨＩ双酶切，回收ＣＤ２３全基因，定向插入ｐＵＣ１８载体，构建ｐＵＣ１８－ＣＤ２３全基因重组体（ｐＵＣＤ９７６）。进一步利用该基因中第３９９位的Ｈｉ... 已构建的ＣＤ２３ｃＤＮＡ全基因克隆ｐＢＣＤ９７６，以ＥｃｏＲＩ和ＢａｍＨＩ双酶切，回收ＣＤ２３全基因，定向插入ｐＵＣ１８载体，构建ｐＵＣ１８－ＣＤ２３全基因重组体（ｐＵＣＤ９７６）。进一步利用该基因中第３９９位的ＨｉｎｄⅡ酶切点，在ｐＵＣ１８中构建了ＣＤ２３Ｎ端４０３ｂｐ和Ｃ端６０７ｂｐ的二个亚克隆，分别称为ｐＵＣＤ４０３Ｎ和ｐＵＣＤ６０７Ｃ。并对ｐＵＣＤ６０７Ｃ进行测序，最终确认其为ＣＤ２３基因。这将为ＣＤ２３的进一步深入研究提供可靠的物质基础。 展开更多

关键词 CD23 序列测定 基因克隆

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