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结核病新疫苗的免疫毒理学评价方法研究 被引量:2
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作者 都伟欣 董娜 +5 位作者 陈保文 徐苗 杨蕾 卢锦标 沈小兵 王国治 《中国防痨杂志》 CAS 2012年第3期138-144,共7页
目的建立疫苗评价用豚鼠免疫毒理学评价方法,并应用建立的评价指标对结核病新疫苗(耻垢疫苗)的免疫毒性进行初步评价。方法制备豚鼠过敏模型30只,阴性对照15只。建立豚鼠血清总IgG1抗体检测和外周血嗜碱粒细胞体外刺激培养上清、支气管... 目的建立疫苗评价用豚鼠免疫毒理学评价方法,并应用建立的评价指标对结核病新疫苗(耻垢疫苗)的免疫毒性进行初步评价。方法制备豚鼠过敏模型30只,阴性对照15只。建立豚鼠血清总IgG1抗体检测和外周血嗜碱粒细胞体外刺激培养上清、支气管肺泡灌洗液上清,以及腹腔灌洗液中肥大细胞体外刺激培养上清中的过敏性介质(组胺和白三烯)含量的检测方法。将豚鼠分成3组,分别为过敏模型组、耻垢疫苗组和阴性对照组,每组6只,应用已建立的以上几种评价指标初步进行了结核病新疫苗(耻垢疫苗)的免疫毒性评价。结果以6μg/ml羊抗豚鼠IgG1抗体包被,待测血清稀释1∶105,以及辣根过氧化物酶(HRP)标记的羊抗豚鼠IgG1抗体稀释1∶20 000的实验条件为豚鼠血清总IgG1抗体的最佳检测方法。外周血嗜碱粒细胞体外刺激培养上清中,豚鼠过敏模型组和对照组中组胺含量分别为(99.37±15.34)nmol/L和(29.94±5.86)nmol/L;白三烯含量分别为(13.09±3.87)pg/ml和(2.22±0.53)pg/ml。支气管肺泡灌洗液上清组胺含量分别为(73.42±18.60)nmol/L和(31.00±12.09)nmol/L,白三烯含量分别为(123.20±16.57)pg/ml和(39.05±16.94)pg/ml。腹腔灌洗液中肥大细胞体外刺激培养上清中组胺含量分别为(39.59±12.94)nmol/L和(14.35±5.85)nmol/L,白三烯含量分别为(6.79±2.58)pg/ml和(3.09±1.18)pg/ml。以上3种不同组织来源的样本中,过敏模型组的组胺和白三烯含量与对照组相比差异均有统计学意义(组胺:t=12.60,t=5.41,t=5.20,P<0.05;白三烯:t=8.46,t=9.15,t=3.85,P<0.05)。应用以上方法评价结核病新疫苗未见免疫学毒理学异常反应。结论实验初步建立了免疫毒理学评价方法,以该方法评价耻垢疫苗未见免疫毒理学异常反应。 展开更多
关键词 结核菌苗 毒理学 超敏反应 速发型 分枝杆菌 耻垢 评价研究
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结核分枝杆菌核酸检测试剂生产质量控制与临床研究概述
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作者 陈保文 沈小兵 +3 位作者 都伟欣 杨蕾 苏城 王国治 《中国防痨杂志》 CAS 2012年第2期115-116,共2页
Mtb核酸扩增检测技术泛指以扩增DNA或RNA为手段,从而检测特定Mtb核酸序列或筛查特定Mtb基因的检测技术,常用检测技术有:PCR、连接酶链反应(1igasechainreaction,LCR)、转录依赖的扩增反应(transcriptionmediatedamplification,... Mtb核酸扩增检测技术泛指以扩增DNA或RNA为手段,从而检测特定Mtb核酸序列或筛查特定Mtb基因的检测技术,常用检测技术有:PCR、连接酶链反应(1igasechainreaction,LCR)、转录依赖的扩增反应(transcriptionmediatedamplification,TMA)等。笔者主要针对Mtb核酸扩增法检测试剂的主要原材料、生产工艺及反应体系、产品质量控制及临床研究的技术要求进行概述,为Mtb核酸扩增法检测试剂的研制提供参考。 展开更多
关键词 核酸扩增检测技术 产品质量控制 检测试剂 临床研究 结核分枝杆菌 连接酶链反应 核酸扩增法 MTB
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我国卡介苗保护力评价参考体系建立的探讨 被引量:16
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作者 陈保文 沈小兵 +4 位作者 都伟欣 苏城 杨蕾 卢锦标 王国治 《中国防痨杂志》 CAS 2012年第3期150-153,共4页
目的探讨我国结核病新疫苗评价用卡介苗参考体系对豚鼠的保护力。方法采用我国卡介苗(D2PB 302)菌株制备的疫苗,以1/10人用剂量(0.005mg/0.2ml)经皮下注射免疫豚鼠,对照组等体积注射生理盐水。共进行4个实验,免疫与感染间隔分别为:实验... 目的探讨我国结核病新疫苗评价用卡介苗参考体系对豚鼠的保护力。方法采用我国卡介苗(D2PB 302)菌株制备的疫苗,以1/10人用剂量(0.005mg/0.2ml)经皮下注射免疫豚鼠,对照组等体积注射生理盐水。共进行4个实验,免疫与感染间隔分别为:实验Ⅰ与Ⅱ免疫后进行Mtb感染的时间间隔为5周(其中实验Ⅱ为实验Ⅰ的重复实验,实验Ⅰ中BCG组和对照组均入组8只豚鼠;实验Ⅱ中BCG组入组6只豚鼠,对照组入组8只豚鼠),实验Ⅲ为28周(BCG组入组5只豚鼠,对照组入组6只豚鼠),实验Ⅳ为60周(BCG组和对照组均入组8只豚鼠),感染剂量为每只豚鼠2×(102~103)CFU Mtb/ml,注射0.5ml,感染途径为皮下注射,感染后6周,进行豚鼠解剖,观察豚鼠肝脾肺的病变程度并进行脾脏Mtb的分离,计算脾脏Mtb分离数和对数值。结果 (1)BCG免疫5周组,豚鼠的肝脾肺综合病变指数为10.0±3.8,较对照组(46.9±4.8)差异有显著统计学意义(t=-0.63,P<0.01);脾脏Mtb分离数的对数值(lg)为0.49±0.49,较对照组(5.41±0.18)差异有显著统计学意义(t=-9.43,P<0.01)。(2)BCG免疫5周重复实验组,豚鼠的肝脾肺综合病变指数为6.7±2.1,较对照组(36.3±6.0)差异有显著统计学意义(t=-4.63,P<0.01);脾脏Mtb分离数的对数值(lg)为0.38±0.38,较对照组(5.11±0.19)差异有显著统计学意义(t=-11.22,P<0.01)。(3)BCG免疫28周组,豚鼠的肝脾肺综合病变指数为10.0±4.5,较对照组(57.5±6.2)差异有显著统计学意义(t=-6.24,P<0.01);脾脏Mtb分离数的对数值(lg)为2.16±0.93,较对照组(5.44±0.27)差异有统计学意义(t=-3.39,P<0.05)。(4)BCG免疫60周组,豚鼠的肝脾肺综合病变指数为14.4±4.8,较对照组(56.9±5.0)差异有显著统计学意义(t=-6.16,P<0.01);脾脏Mtb分离数的对数值(lg)为1.46±0.69,较对照组(5.43±0.20)差异有显著统计学意义(t=-5.55,P<0.01)。结论卡介苗保护力评价参考体系可靠稳定,我国临床应用卡介苗在该体系呈现优良保护效果。 展开更多
关键词 卡介苗 治疗结果 疾病模型 动物 评价研究
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卡介菌CpG DNA复合佐剂-02系统(BC-C02)有效性与安全性评价 被引量:12
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作者 赵爱华 李凤祥 +11 位作者 寇丽杰 李长贵 乔来艳 王鹏 陈保文 徐苗 都伟欣 沈小兵 苏城 卢锦标 杨蕾 王国治 《中国防痨杂志》 CAS 2012年第3期161-167,共7页
目的对卡介菌(BCG)CpG DNA复合佐剂-02系统(BC-C02)的有效性及安全性进行评价,为其应用提供研究基础。方法以流式细胞法检测经CpG DNA与细胞体外共培养后B细胞内TLR-9,巨噬细胞内IL-12、TLR-9表达,以酶联免疫斑点法检测人外周血单个核细... 目的对卡介菌(BCG)CpG DNA复合佐剂-02系统(BC-C02)的有效性及安全性进行评价,为其应用提供研究基础。方法以流式细胞法检测经CpG DNA与细胞体外共培养后B细胞内TLR-9,巨噬细胞内IL-12、TLR-9表达,以酶联免疫斑点法检测人外周血单个核细胞(PBMC)经CpG DNA刺激后IL-12的分泌。单纯H1N1抗原低、中、高三个剂量组及三个剂量抗原添加CpG DNA后免疫小鼠,每组20只动物,免疫后测定其抗体效价及H1N1病毒感染后死亡率。经Mtb感染后豚鼠,以Ag85B+BC-C02疫苗低、中、高组与BC-C02及生理盐水(NS)进行免疫治疗,每组10只豚鼠,观察动物脏器结核病变指数。同时分别检测CpG DNA注射小鼠后IgE产生和复合佐剂BC-C02注射豚鼠后全身过敏毒性。结果BC-C02中的生物佐剂可刺激B细胞增殖[佐剂组CD19+%为41%,培养基对照组(NCS)组为27%;t=-4.40,P<0.05];促进B细胞内TLR-9表达(佐剂组CD19+TLR-9+%为2.8%,NCS组为1.1%;t=-5.92,P<0.05);上调巨噬细胞表面MHC-Ⅱ类分子表达(佐剂组F4/80+I-A/I-E+%为82%,NCS组为31%;t=-4.32,P<0.05);可促进巨噬细胞内TLR-9和IL-12的分泌(佐剂组F4/80+I-A/I-E+TLR-9+IL-12+%为2.1%,NCS组为0.1%;t=4.80 P<0.05)。BC-C02中的生物佐剂作为H1N1疫苗佐剂,在检测时间内(5、7、14、28d),PBS组4个时间点血凝抑制(HI)抗体滴度均<10;H1N1低剂量组滴度<中剂量组滴度<高剂量组滴度,抗原复合CpG组均高于单纯抗原组,且佐剂可促进抗原特异性IgG2a的提高。H1N1保护力实验中,PBS组、H1N1低剂量组、H1N1低剂量+CpG DNA组、H1N1高剂量组、H1N1高剂量+CpG DNA组存活率分别为30%、50%、90%、100%、100%,显示佐剂可提高40%动物存活率。Mtb潜伏感染动物经疫苗治疗后,对照组动物100%病变,疫苗组完全转阴的动物达到30%,而且病变指数<30的动物达到60%~70%。佐剂注射小鼠后IgE抗体与NS无区别,豚鼠过敏毒性试验显示佐剂不会引起动物全身过敏反应。结论BC-C02既能诱导细胞免疫反应,也能诱导体液免疫反应,并能提高疫苗保护效力,可作为一种新型疫苗用佐剂的候选佐剂。 展开更多
关键词 分枝杆菌 DNA 细菌 佐剂 免疫 可重复性 结果
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