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蜡样芽孢杆菌cytK和nhe毒素基因双重核酸试纸条快速检测方法的建立及其评价: 1; 作者杨继飞潘蓓珍 +6 位作者刘岩周钰娇杨建宇张先宇丁文博李昊宇孙丽媛《吉林大学学报(医学版)》北大核心 2025年第2期516-525,共10页; 目的:采用聚合酶链式反应(PCR)和胶体金技术建立1种蜡样芽孢杆菌cytK和nhe2种毒素基因双重核酸试纸条快速检测方法,并对其特异性、灵敏度、重复性和稳定性进行评价。方法:采用煮沸法提取蜡样芽孢杆菌DNA,以蜡样芽孢杆菌细胞毒素cytK和... 展开更多; 关键词蜡样芽孢杆菌 cytK NHE 双重核酸试纸条; 在线阅读下载PDF 职称材料

呼吸道真菌感染核酸胶体金试纸条快速检测方法的建立和评价被引量：5: 2; 作者姜菲菲宋伶俐 +3 位作者潘蓓珍王岳峰李昊宇孙丽媛《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期222-230,共9页; 目的:采用聚合酶链式反应(PCR)技术和胶体金技术建立一种呼吸道真菌感染核酸胶体金试纸条检测方法,并对其检测效果进行评价。方法:根据GenBank数据库选择真菌内转录间隔区(ITS)基因片段作为靶基因,应用DNAMAN软件对真菌ITS基因片段进行... 展开更多; 关键词呼吸道感染真菌胶体金核酸试纸条; 在线阅读下载PDF 职称材料

基于多重PCR技术检测蜡样芽胞杆菌3种毒素基因方法的建立及评价被引量：5: 3; 作者姜菲菲李昊宇 +5 位作者贾慧建王丹赵潇颖王岳峰周童孙丽媛《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期1223-1228,共6页; 目的:基于多重PCR技术,建立一种快速检测蜡样芽胞杆菌nhe、cytK和entFM 3种毒素基因的方法,并评价其效能。方法:煮沸法提取蜡样芽胞杆菌DNA,以蜡样芽胞杆菌nhe、cytK和entFM特异性毒素基因作为靶基因,采用NCBI primer-BLAST 5.0软件设... 展开更多; 关键词蜡样芽胞杆菌毒素基因多重聚合酶链式反应灵敏度煮沸法; 在线阅读下载PDF 职称材料

核酸试纸条快速检测蜡样芽胞杆菌entFM毒素基因方法的建立被引量：3: 4; 作者贾慧建李昊宇 +4 位作者王丹姜菲菲赵潇颖董婧瑶孙丽媛《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期1333-1340,共8页; 目的:基于核酸试纸条技术,建立一种快速检测蜡样芽胞杆菌entFM毒素基因的方法。方方法法:煮沸法提取蜡样芽胞杆菌DNA,以蜡样芽胞杆菌entFM毒素基因作为靶基因,采用NCBI primer-BLAST 5.0软件设计特异性引物并通过克隆转化鉴定PCR产物,... 展开更多; 关键词蜡样芽胞杆菌 entFM毒素核酸试纸条煮沸法聚合酶链式反应; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名蜡样芽孢杆菌cytK和nhe毒素基因双重核酸试纸条快速检测方法的建立及其评价: 1; 作者杨继飞潘蓓珍刘岩周钰娇杨建宇张先宇丁文博李昊宇孙丽媛; 机构北华大学医学技术学院临床病原学检验教研室中国铁路沈阳局集团有限公司吉林疾病预防控制所; 出处《吉林大学学报(医学版)》北大核心 2025年第2期516-525,共10页; 基金吉林省科技厅科技发展计划项目(20230204085YY,20230202059NC) 北华大学研究生创新计划项目([2023] 070)。; 文摘目的:采用聚合酶链式反应(PCR)和胶体金技术建立1种蜡样芽孢杆菌cytK和nhe2种毒素基因双重核酸试纸条快速检测方法,并对其特异性、灵敏度、重复性和稳定性进行评价。方法:采用煮沸法提取蜡样芽孢杆菌DNA,以蜡样芽孢杆菌细胞毒素cytK和非溶血性肠毒素nhe为靶基因设计特异性引物,通过克隆转化鉴定PCR产物,确定胶体金标记链霉亲和素、质量控制线(C线)、cytK检测线(T_(1))和nhe检测线(T_(2))最佳标记量,组装核酸试纸条并对其特异性、灵敏度、重复性和稳定性进行评价。结果:蜡样芽孢杆菌DNA浓度为248 mg·L^(-1),纯度为1.8~2.0;经克隆转化和测序比对,PCR产物与GenBank数据库中已登记的蜡样芽孢杆菌cytK和nhe相似性均为100%。在pH为7.0的条件下,每200μL胶体金溶液中链霉亲和素最佳标记量为6.0μL;质量控制线(C线)最佳标记量为2.00 g·L^(-1),cytK基因检测线(T1)最佳标记量为0.550 g·L^(-1),nhe基因检测线(T_(2))最佳标记量为0.2 g·L^(-1)。特异性检测,仅蜡样芽孢杆菌组显示阳性结果,试纸条与金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌和枯草芽孢杆菌无交叉反应,与电泳结果一致;灵敏度检测,当双重核酸试纸条中蜡样芽孢杆菌DNA浓度降至10^(-2)mg·L^(-1)时,可观察到C线、T1线和T_(2)线3个条带,检测限为琼脂糖凝胶电泳(10^(-1)mg·L^(-1))的1/10;重复性检测,由不同实验室不同人员对试纸条进行验证,结果一致;稳定性检测,在第6、9和12个月进行试纸条稳定性验证,稳定性良好。结论:本研究建立的双重核酸试纸条法可以同时检测蜡样芽孢杆菌cytK和nhe毒素基因,灵敏度高,特异性强,可实现快速可视化检测。; 关键词蜡样芽孢杆菌 cytK NHE 双重核酸试纸条; Keywords Bacillus cereus cytK nhe Dual nucleic acid test strips; 分类号 R446.5 [医药卫生—诊断学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名呼吸道真菌感染核酸胶体金试纸条快速检测方法的建立和评价被引量：5: 2; 作者姜菲菲宋伶俐潘蓓珍王岳峰李昊宇孙丽媛; 机构北华大学医学技术学院分子生物教研室北华大学附属医院检验科中国铁路沈阳局集团有限公司吉林疾病预防控制所; 出处《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期222-230,共9页; 基金吉林省科技厅科技发展计划项目(20190304115YY) 吉林省教育厅“十三五”科学技术项目(JJKH20190657KJ) 北华大学校级科研项目(BH001)。; 文摘目的:采用聚合酶链式反应(PCR)技术和胶体金技术建立一种呼吸道真菌感染核酸胶体金试纸条检测方法,并对其检测效果进行评价。方法:根据GenBank数据库选择真菌内转录间隔区(ITS)基因片段作为靶基因,应用DNAMAN软件对真菌ITS基因片段进行分析,并分别在真菌通用引物5'端用生物素(Biotin)和异硫氰酸荧光素(FITC)进行修饰标记;建立PCR体系,进行体系的最佳条件优化;确定胶体金免疫层析试纸条标记链霉亲和素的最佳标记量和质控线及检测线最佳包被物浓度,组装核酸胶体金试纸条,对试纸条的特异度、灵敏度、重复性和稳定性进行验证。结果:水煮法提取白假丝酵母菌、新生隐球菌和毛霉菌DNA,浓度为180μg·L^(-1)以上,纯度为1.60~2.10;在pH 7.0条件下,每100μL胶体金溶液中制备胶体金标记链霉亲和素最佳标记量为3.3μg,质控线包被Biotin化牛血清白蛋白(BSA-Biotin)浓度为2.00 g·L^(-1),检测线包被抗FITC抗体浓度为1.00 g·L^(-1)。核酸试纸条的特异度与电泳结果一致,仅白假丝酵母菌、新生隐球菌和毛霉菌出现阳性结果,与金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、乙型溶血性链球菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌和大肠埃希菌等常见呼吸道感染细菌无交叉反应。灵敏度检测,白假丝酵母菌、新生隐球菌和毛霉菌的DNA浓度分别为10-4、10-2和10-3 mg·L^(-1)时核酸试纸条仍可准确检出,而普通PCR电泳结果显示白假丝酵母菌、新生隐球菌和毛霉菌最低检测浓度分别为0.01、1.00和0.10 mg·L^(-1);重复性检测,在不同实验室不同操作人员对核酸试纸条进行验证,结果一致,重复性良好;稳定性检测,核酸试纸条在第6、9和12个月进行检测,结果符合预期,稳定性良好。结论:本研究建立的呼吸道真菌感染核酸胶体金试纸条可以检测白假丝酵母菌、新生隐球菌和毛霉菌等真菌,特异度和灵敏度均较高,操作简便且快速。; 关键词呼吸道感染真菌胶体金核酸试纸条; Keywords Respiratory tract infection Fungi Colloidal gold Nucleic acid test strip; 分类号 R446 [医药卫生—诊断学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名基于多重PCR技术检测蜡样芽胞杆菌3种毒素基因方法的建立及评价被引量：5: 3; 作者姜菲菲李昊宇贾慧建王丹赵潇颖王岳峰周童孙丽媛; 机构北华大学医学技术学院分子生物教研室中国铁路沈阳局集团有限公司吉林疾病预防控制所; 出处《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期1223-1228,共6页; 基金吉林省科技厅科技发展计划项目(20190304115YY) 吉林省教育厅“十三五”科学技术项目(JJKH20190657KJ)。; 文摘目的:基于多重PCR技术,建立一种快速检测蜡样芽胞杆菌nhe、cytK和entFM 3种毒素基因的方法,并评价其效能。方法:煮沸法提取蜡样芽胞杆菌DNA,以蜡样芽胞杆菌nhe、cytK和entFM特异性毒素基因作为靶基因,采用NCBI primer-BLAST 5.0软件设计特异性引物,优化反应体系。建立三重PCR检测体系,并检测其特异性、灵敏度和稳定性。结果:煮沸法提取蜡样芽胞杆菌DNA,浓度为227 mg·L^(-1),纯度为1.50~1.60。采用多重PCR体系同时检测蜡样芽胞杆菌3种毒素致病基因,于退火温度56℃时,蜡样芽胞杆菌基因引物nhe499的扩增片段为499 bp,基因引物cytK191的扩增片段为191 bp,基因引物entFM363的扩增片段为363 bp。PCR体系扩增蜡样芽胞杆菌3种毒素基因后条带清晰明亮,且无非特异性条带,与金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和铜绿假单胞菌均无扩增,表明蜡样芽胞杆菌基因引物nhe499、cytK191和entFM363特异性强;3种引物在同一反应体系中互不干扰。灵敏度检测,多重PCR体系最低检测限可同时达到10^(-1)mg·L^(-1);稳定性检测,多重PCR体系自制备起每6个月检测稳定性一致。结论:建立的多重PCR检测体系对于蜡样芽胞杆菌nhe499、cytK191和entFM363 3种毒素基因灵敏度高、特异性强,检测结果准确稳定,检测体系具有良好稳定性,适用于快速检出蜡样芽胞杆菌的3种不同致病毒素基因。; 关键词蜡样芽胞杆菌毒素基因多重聚合酶链式反应灵敏度煮沸法; Keywords Bacillus cereus Toxin gene Multiplex polymerase chain reaction Sensitivity Boiling method; 分类号 R378 [医药卫生—病原生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名核酸试纸条快速检测蜡样芽胞杆菌entFM毒素基因方法的建立被引量：3: 4; 作者贾慧建李昊宇王丹姜菲菲赵潇颖董婧瑶孙丽媛; 机构北华大学医学技术学院分子生物教研室山东省聊城市人民医院检验科中国铁路沈阳局集团有限公司吉林疾病预防控制所; 出处《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期1333-1340,共8页; 基金吉林省科技厅科技发展计划项目(20190304115YY) 北华大学医学技术学院晨裕科研项目(BH2021008)。; 文摘目的:基于核酸试纸条技术,建立一种快速检测蜡样芽胞杆菌entFM毒素基因的方法。方方法法:煮沸法提取蜡样芽胞杆菌DNA,以蜡样芽胞杆菌entFM毒素基因作为靶基因,采用NCBI primer-BLAST 5.0软件设计特异性引物并通过克隆转化鉴定PCR产物,建立并组装核酸试纸条,评价核酸试纸条的特异性、灵敏度和稳定性。结果:蜡样芽胞杆菌DNA浓度为300 mg·L^(-1),纯度约为1.60。PCR产物阳性条带经切胶回收、克隆转化和测序比对,与GenBank数据库中已登记的entFM相似性为100%。在pH值7.0条件下,每100μL胶体金溶液加入3.3μg链霉亲和素浓度标记,质控线浓度为1.8 g·L^(-1),检测线浓度为1 g·L^(-1)时,硝酸纤维素膜上质控线与检测线均可与PCR产物反应出现清晰的红色条带。按照最适条件组装成核酸试纸条,PCR产物6μL,样品展开液100μL,检测10 min后可观察结果。核酸试纸条特异性与电泳结果一致,仅蜡样芽胞杆菌为阳性结果,与金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞杆菌、大肠埃希菌和沙门氏菌皆无交叉反应,为阴性结果;灵敏度检测,核酸试纸条DNA质量浓度同时降至10^(-3)mg·L^(-1)仍可准确检测,普通PCR电泳结果显示DNA质量浓度同时降至10-1mg·L^(-1)出现目的条带,核酸试纸条比普通PCR灵敏度提高100倍;稳定性检测,核酸试纸条在第6、9和12个月进行检测稳定性一致。结论:建立的核酸试纸条检测蜡样芽胞杆菌entFM毒素基因灵敏度高、特异性强且具有良好稳定性,适用于快速鉴别蜡样芽胞杆菌entFM毒素基因。; 关键词蜡样芽胞杆菌 entFM毒素核酸试纸条煮沸法聚合酶链式反应; Keywords Bacillus cereus entFM toxin Nucleic acid test strips Boiling method Polymerase chain reaction; 分类号 R117 [医药卫生—公共卫生与预防医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	蜡样芽孢杆菌cytK和nhe毒素基因双重核酸试纸条快速检测方法的建立及其评价	杨继飞潘蓓珍刘岩周钰娇杨建宇张先宇丁文博李昊宇孙丽媛	《吉林大学学报(医学版)》北大核心	2025	0	在线阅读下载PDF 职称材料
2	呼吸道真菌感染核酸胶体金试纸条快速检测方法的建立和评价	姜菲菲宋伶俐潘蓓珍王岳峰李昊宇孙丽媛	《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心	2023	5	在线阅读下载PDF 职称材料
3	基于多重PCR技术检测蜡样芽胞杆菌3种毒素基因方法的建立及评价	姜菲菲李昊宇贾慧建王丹赵潇颖王岳峰周童孙丽媛	《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心	2022	5	在线阅读下载PDF 职称材料
4	核酸试纸条快速检测蜡样芽胞杆菌entFM毒素基因方法的建立	贾慧建李昊宇王丹姜菲菲赵潇颖董婧瑶孙丽媛	《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心	2022	3	在线阅读下载PDF 职称材料