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气相色谱-负化学源质谱法测定蜂蜜和王浆中4种杀虫剂的残留 被引量:11
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作者 夏广辉 沈伟健 +6 位作者 余可垚 吴斌 张睿 沈崇钰 赵增运 卞筱泓 许激扬 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期741-745,共5页
建立了气相色谱-负化学源质谱(GC-NCI/MS)测定蜂蜜和王浆中4种杀虫剂残留量的方法。蜂蜜样品由乙酸乙酯提取、乙二胺-N-丙基硅烷(PSA)净化,而王浆样品经乙腈-水(1∶1,v/v)提取、C18固相萃取柱净化,采用GC-NCI/MS测定,外标法定量... 建立了气相色谱-负化学源质谱(GC-NCI/MS)测定蜂蜜和王浆中4种杀虫剂残留量的方法。蜂蜜样品由乙酸乙酯提取、乙二胺-N-丙基硅烷(PSA)净化,而王浆样品经乙腈-水(1∶1,v/v)提取、C18固相萃取柱净化,采用GC-NCI/MS测定,外标法定量。结果表明:在50-500μg/L范围内4种农药的线性良好;所有农药的LOD在0.12-5.0μg/kg之间,LOQ在0.40-16.5μg/kg之间;在10、15、20μg/kg 3个添加水平下,4种农药的平均回收率在78.2%-110.0%之间,且RSD均小于14%。所有农药的测定均没有出现干扰峰。该方法简单、快速,准确度、精密度和选择性高,抗干扰能力强,可用于蜂蜜和王浆中这4种农药的快速检测。 展开更多
关键词 气相色谱-负化学源质谱 杀虫剂 蜂蜜 王浆
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菊欧氏杆菌质粒和染色体在Echcin类抗生素生物合成中的作用 被引量:3
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作者 刘景晶 王金生 方中达 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第6期366-371,共6页
含有22kb质粒的菊欧氏杆菌野生株B3能产生Echcins,脱质粒菌株B1丧失了产生Echcin的能力,转座子Tn5插入质粒也可以使菊欧氏杆菌产生Echcin的能力丧失,表明质粒上的基因与Echcin类抗生素生物合成... 含有22kb质粒的菊欧氏杆菌野生株B3能产生Echcins,脱质粒菌株B1丧失了产生Echcin的能力,转座子Tn5插入质粒也可以使菊欧氏杆菌产生Echcin的能力丧失,表明质粒上的基因与Echcin类抗生素生物合成有关。将菊欧氏杆菌质粒接合转移到大肠杆菌中,并不能使大肠杆菌成为Echcin生产菌,说明除了质粒上的基因外,菊欧氏杆菌染色体的基因也参与了Echcin的生物合成。四种Echcin的抑菌谱,理化特性和结构特点的系统比较结果提示它们是由同一代谢途径合成的。 展开更多
关键词 菊欧氏杆菌 抗生素 质粒 染色体 合成
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宁夏枸杞新品种“宁杞1号”中生化物质的含量测定及部分生物活性试验 被引量:2
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作者 姚文兵 高向东 +3 位作者 王旻 吴梧桐 姚文海 张小波 《中国药科大学学报》 CSCD 北大核心 1995年第4期235-238,共4页
对"宁杞1号"和大麻叶枸杞果实中某些生化物质的含量进行了分析比较和部分生物活性试验对比。并对"宁杞1号"枸杞鲜果经不同加工方法后某些生化物质含量的变化进行了研究。
关键词 枸杞子 品种 中药化学成分 多糖 生物活性
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气相色谱-负化学源质谱联用法测定水产品及食用油中氟乐灵的残留量 被引量:9
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作者 王莉 夏广辉 +5 位作者 沈伟健 吴斌 张睿 陆慧媛 沈崇钰 赵增运 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期314-317,共4页
建立了一种可用于水产品及食用油中氟乐灵残留量分析的分散型固相萃取-气相色谱-负化学离子源质谱方法。水产品及食用油经乙腈提取,4℃冷藏后,采用分散型固相萃取法净化,由气相色谱-负化学离子源质谱选择离子监测技术进行测定与确证... 建立了一种可用于水产品及食用油中氟乐灵残留量分析的分散型固相萃取-气相色谱-负化学离子源质谱方法。水产品及食用油经乙腈提取,4℃冷藏后,采用分散型固相萃取法净化,由气相色谱-负化学离子源质谱选择离子监测技术进行测定与确证,同位素内标法定量。在1~40μg / L 范围内氟乐灵农药的线性关系良好;方法定量限(LOQ)为0.02μg / kg;对鳗鱼、烤鳗、梭子蟹、小龙虾、猪油和橄榄油等6种复杂基质进行1.0、2.0和3.0μg / kg 等3个水平的添加回收试验,平均回收率均处于80%~100%之间,RSD≤10.3%;无干扰现象出现。该方法可作为水产品及食用油中氟乐灵残留检测的确证方法。 展开更多
关键词 分散型固相萃取 气相色谱-负化学离子源质谱联用 选择离子监测 氟乐灵 水产品 食用油 disperse solid phase extraction( DSPE) gas chromatography-negative chemical ionization mass SPECTROMETRY ( GC-MS NCI ) selected ion monitoring ( SIM )
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纸层析法分离测定生物合成反应中的谷胱甘肽(英文) 被引量:3
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作者 祖爱 许激扬 吴梧桐 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第3期173-179,共7页
报道一种分离与定量测定生物合成反应液中谷胱甘肽的方法。该反应以半胱氨酸、甘氨酸和谷氨酸为底物,在葡萄糖、氯化镁和磷酸缓冲液条件下进行,反应液用纸层析分离,实验发现胱氨酸替代半胱氨酸参与反应,并报道了五种成分的R_f值:L-半胱... 报道一种分离与定量测定生物合成反应液中谷胱甘肽的方法。该反应以半胱氨酸、甘氨酸和谷氨酸为底物,在葡萄糖、氯化镁和磷酸缓冲液条件下进行,反应液用纸层析分离,实验发现胱氨酸替代半胱氨酸参与反应,并报道了五种成分的R_f值:L-半胱氨酸、甘氨酸、L-谷氨酸、谷胱甘肽和L-胱氨酸。结果表明,在混合溶剂系统中,以酚-水(5:1)分离效果最佳。 展开更多
关键词 谷胱甘肽 生物合成 纸层析
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化学酶法合成D-对羟基苯甘氨酸 被引量:10
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作者 许激扬 吴梧桐 +1 位作者 公剑 倪孟祥 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第5期394-396,共3页
采用乙二醛、苯酚和尿素为原料化学合成底物DL-对羟基苯乙内酰脲。以沟槽假单孢菌CPU1628或放线形土壤杆菌CPU1211为酶源,将DL-对羟基苯乙内酰脲生物转化为D-对羟基苯甘氨酸,产率分别为86%和80%。
关键词 对羟基苯甘氨酸 化学酶法 Β内酰胺 抗生素
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酿酒酵母S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达 被引量:16
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作者 杨静 王旻 +2 位作者 孙进 韦平和 汤卫国 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期253-255,共3页
目的 构建S 腺苷甲硫氨酸合成酶基因工程菌 ,为酶促转化法生产S 腺苷甲硫氨酸奠定基础。方法 应用PCR技术从S 腺苷甲硫氨酸高产酿酒酵母染色体DNA中扩增得到S 腺苷甲硫氨酸合成酶基因sam2 ,将其克隆至表达载体pT7 7,转化大肠杆菌 ,1%... 目的 构建S 腺苷甲硫氨酸合成酶基因工程菌 ,为酶促转化法生产S 腺苷甲硫氨酸奠定基础。方法 应用PCR技术从S 腺苷甲硫氨酸高产酿酒酵母染色体DNA中扩增得到S 腺苷甲硫氨酸合成酶基因sam2 ,将其克隆至表达载体pT7 7,转化大肠杆菌 ,1%琼脂糖电泳比较大小 ,筛选重组子。结果 SDS PAGE显示重组菌S 腺苷甲硫氨酸合成酶亚基分子量约为 4 2KDa ,平均表达量约占菌体总可溶性蛋白的 4 2 % ,酶活达到 14 .1U/g湿菌体 ,比宿主菌酶活提高 15 .7倍。结论 酿酒酵母SAM合成酶基因在大肠杆菌中高效表达 。 展开更多
关键词 S-腺苷甲硫氨酸合酶 克隆 表达
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用木瓜蛋白酶在两相系统中合成二肽甜味剂Aspartame 被引量:5
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作者 姚文兵 吴梧桐 +4 位作者 黄岩山 范光斌 金生浩 许激扬 严悦日 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1994年第6期364-368,共5页
研究了多种因素对木瓜蛋白酶在水-有机溶剂两相反应体系中合成二肽甜味剂Aspartame能力的影响,结果表明,在本实验条件下,水与乙酸乙酯的比例为6:100~7:100之间为宜;反应最适pH为5.2;最适温度37℃;反... 研究了多种因素对木瓜蛋白酶在水-有机溶剂两相反应体系中合成二肽甜味剂Aspartame能力的影响,结果表明,在本实验条件下,水与乙酸乙酯的比例为6:100~7:100之间为宜;反应最适pH为5.2;最适温度37℃;反应时间为9h;酶用量为100~120mg/mmol底物;L-PheOMe与CBZ-L-Asp的摩尔比为1:1。 展开更多
关键词 二肽甜味剂 木瓜蛋白酶 酶促合成法 甜味剂
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化学-酶法合成甜味天苯二肽 被引量:5
9
作者 许激扬 吴梧桐 +1 位作者 金生浩 姚文兵 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1994年第1期53-55,共3页
为探索天-苯甜二肽生产新技术,以马来酐与L-苯丙氨酸甲酯为原料经化学法缩合成马来酰-L-丙氨酸甲酯,并将后者异构化成富马酰-L-苯丙氨酸甲酯(FPM),收率95%;再以FPM及氨或氨供体为底物,经E.coliCPU8... 为探索天-苯甜二肽生产新技术,以马来酐与L-苯丙氨酸甲酯为原料经化学法缩合成马来酰-L-丙氨酸甲酯,并将后者异构化成富马酰-L-苯丙氨酸甲酯(FPM),收率95%;再以FPM及氨或氨供体为底物,经E.coliCPU8901转化为天-苯甜二肽,产物浓度为5.6mg/ml。 展开更多
关键词 甜味剂 天苯二肽 合成
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聚乙二醇对大肠杆菌L-天冬酰胺酶的化学修饰 被引量:13
10
作者 周笑艳 刘景晶 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第3期230-233,共4页
用琥珀酸酐及琥珀酰亚胺两步活化的单甲氧基聚乙二醇对大肠杆菌 L-天冬酰胺酶进行化学修饰。修饰反应的酶活回收率保持在 40 %以上 ,修饰酶的抗热 ,抗胰蛋白酶水解能力有所提高 ,抗原性显著下降。
关键词 天冬酰胺酶 化学修饰 单甲氧基聚乙二醇 抗肿瘤
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化学酶法制备D-苯甘氨酸 被引量:3
11
作者 李隽 余江河 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第4期294-296,共3页
对化学酶法制备 D-苯甘氨酸工艺进行了研究。利用荧光假单胞菌 980 6作为酶源 ,将 DL-苯海因生物转化为 N-氨基甲酰 -D-苯甘氨酸 ,后者与亚硝酸钠反应生成 D-苯甘氨酸 ,收率为 4 7.5%
关键词 苯甘氨酸 化学酶法 荧光假单胞菌 苯海因
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肝素修饰人血SOD在家兔血液中的稳定性及在小鼠体内的抗凝血作用 被引量:2
12
作者 金生浩 吴梧桐 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1994年第5期300-302,共3页
报道了肝素修饰的人血SOD在家兔血液中的稳定性及在小鼠体内的抗凝血作用。与天然SOD相比,修饰酶在血液中的稳定性明显提高,半衰期由天然SOD的10min延长至62min,同时修饰酶仍保持肝素的抗凝血作用。
关键词 超氧化物歧化酶 修饰酶 半衰期 抗凝血 肝素
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薄层色谱法测定转化液中L─间羟基乙酰基甲醇含量 被引量:1
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作者 蒋巡天 李继珩 吴梧桐 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1996年第3期163-164,共2页
利用薄层色谱技术测定转化液中L-间羟基苯基乙酰基甲醇的含量。采用硅胶GF254薄层板,以二氯甲烷-乙酸乙酯-乙醇(18∶2∶1)为展开剂,在紫外灯下刮下Rf值为0.47的暗斑,经95%乙醇洗脱,在279.4nm处测定... 利用薄层色谱技术测定转化液中L-间羟基苯基乙酰基甲醇的含量。采用硅胶GF254薄层板,以二氯甲烷-乙酸乙酯-乙醇(18∶2∶1)为展开剂,在紫外灯下刮下Rf值为0.47的暗斑,经95%乙醇洗脱,在279.4nm处测定吸收值,从标准曲线读出样品含量。标准曲线线性范围20~100ng,最低检出量1ng,平均回收率100.05±1.08%,板内和板间RSD分别小于6%和9%。 展开更多
关键词 乙酰基甲醇 转化液 薄层色谱法
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花粉多糖的分离纯化及其组成单糖分析 被引量:16
14
作者 任金山 吴梧桐 +2 位作者 李颖 安雪飞 李莉 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1990年第3期173-175,共3页
油菜花粉经破壁、热水提取,用三氯醋酸除杂蛋白、透析、乙醇沉淀获得粗品多糖。用CTAB络合法分离了花粉酸性多糖与中性多糖成分。中性多糖用Sephadex G-100凝胶柱层析进一步纯化得P-A、P-B、P-C 3个组分。酸性多糖用DEAE-Sephadex A-25... 油菜花粉经破壁、热水提取,用三氯醋酸除杂蛋白、透析、乙醇沉淀获得粗品多糖。用CTAB络合法分离了花粉酸性多糖与中性多糖成分。中性多糖用Sephadex G-100凝胶柱层析进一步纯化得P-A、P-B、P-C 3个组分。酸性多糖用DEAE-Sephadex A-25纯化得P-D、P-E 2个组分,聚丙烯酰胺凝胶电泳均为单一区带。P-A、P-B、P-C、P-D、P-E的酸水解产物经气相色谱分析表明,均含L-岩藻糖、L-阿拉伯糖、D-木糖、D-甘露糖、D-半乳糖、D-葡萄糖及L-鼠李糖。而酸性多糖除含以上单糖组分外,还含有已糖醛酸,但不含硫酸基。 展开更多
关键词 花粉 多糖 分离 分析 纯化
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双酶法合成D-(-)-对羟基苯甘氨酸 被引量:17
15
作者 马飞 许激扬 +1 位作者 何林松 李隽 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期155-158,共4页
目的 研究用土壤杆菌CPU12 95完整细胞双酶转化法生产D ( ) 对羟基苯甘氨酸。方法 通过测定D 海因酶及D 氨甲酰酶的比活力来选择发酵和转化反应条件。结果 经优化 ,两酶化活力分别达到 1.3u/ml发酵液和 0 .46u/ml发酵液 ,终产物经... 目的 研究用土壤杆菌CPU12 95完整细胞双酶转化法生产D ( ) 对羟基苯甘氨酸。方法 通过测定D 海因酶及D 氨甲酰酶的比活力来选择发酵和转化反应条件。结果 经优化 ,两酶化活力分别达到 1.3u/ml发酵液和 0 .46u/ml发酵液 ,终产物经鉴定为D ( ) 对羟基苯甘氨酸。结论 本法是一种有发展前途的生产工艺。 展开更多
关键词 D-对羟基苯甘氨酸 对羟基苯乙内酰脲 D-海因酶 D-氨甲酰酶 双酶法 合成
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大肠杆菌L-天门冬酰胺酶Ⅱ基因的高效表达 被引量:19
16
作者 刘景晶 李晶 +1 位作者 吴梧桐 胡梅清 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1996年第11期696-700,共5页
用一对与大肠杆菌天门冬酰胺酶Ⅱ基因(AnsB)两侧序列互补的寡核苷酸E1,E2作引物,以大肠杆菌野生株CPU210009的染色体DNA为模板,通过PCR扩增得到约1.2kb的DNA片段,将此片段插入pKK233-2的... 用一对与大肠杆菌天门冬酰胺酶Ⅱ基因(AnsB)两侧序列互补的寡核苷酸E1,E2作引物,以大肠杆菌野生株CPU210009的染色体DNA为模板,通过PCR扩增得到约1.2kb的DNA片段,将此片段插入pKK233-2的tac启动子下游,转化不同的大肠杆菌宿主菌株,结果表明以CPU210009为宿主菌时,转化子的酶表达量最高,重组L-天门冬酰胺酶占菌体总蛋白48.3%,发酵液酶活力达400IU/ml;比活为48IU/mg蛋白,SDS-PAGE显示纯化后的重组L-天门冬酰胺酶分子量与天然酶相同,均为140KD。 展开更多
关键词 药物 大肠杆菌 天门冬酰胺酶 基因表达
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蛙皮活性提取物的抗炎作用和体外抗菌活性研究 被引量:10
17
作者 姚文兵 刘煜 +2 位作者 余江河 王旻 吴梧桐 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1995年第5期314-317,共4页
从美国沼泽绿蛙的皮中分离、提取得到蛙皮活性提取物,体外抗菌试验表明,该活性提取物对金黄色葡萄球菌等有抑制作用。另外,小鼠分别po0.22g/kg和0.45g/kg活性提取物,能明显降低致炎剂导致的小鼠耳肿胀率,分别比... 从美国沼泽绿蛙的皮中分离、提取得到蛙皮活性提取物,体外抗菌试验表明,该活性提取物对金黄色葡萄球菌等有抑制作用。另外,小鼠分别po0.22g/kg和0.45g/kg活性提取物,能明显降低致炎剂导致的小鼠耳肿胀率,分别比空白组降低18.3%和31.6%;能明显抑制小鼠血管通透性,A590nm吸收值分别比空白组降低23.4%和24.3%。 展开更多
关键词 沼泽绿蛙 蛙皮 活性提取物 抗菌 抗炎
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大肠杆菌S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因的克隆与表达 被引量:19
18
作者 韦平和 公剑 王旻 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第6期470-473,共4页
应用PCR技术从E.coli JM 109中扩增出长约1.1kb的S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因,将其插入高表达载体pET11c的NdeI和BamHI位点中,转化E.coli BL 21 (DE3)。SDS-PAGE和薄层扫描结果表明,重组菌S-腺苷甲硫氨酸合成酶的表达量占菌体总可溶性... 应用PCR技术从E.coli JM 109中扩增出长约1.1kb的S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因,将其插入高表达载体pET11c的NdeI和BamHI位点中,转化E.coli BL 21 (DE3)。SDS-PAGE和薄层扫描结果表明,重组菌S-腺苷甲硫氨酸合成酶的表达量占菌体总可溶性蛋白含量的58.3%。酶活测定结果表明,重组菌S-腺苷甲硫氨酸合成酶的活力比宿主菌高7倍。 展开更多
关键词 S-腺苷甲硫氨酸合成酶 克隆 表达
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大肠杆菌色氨酸酶基因的克隆与表达 被引量:5
19
作者 韦平和 吴梧桐 张玉彬 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第2期139-142,共4页
应用PCR技术从E.coliJM105中扩增出长约1.4Kb的色氨酸酶基因,将其插入高表达载体pET3a的NdeI/BamHI位点,转化E.coliBL21(DE3),构建高产色氨酸酶基因工程菌。SDS-PAGE电泳... 应用PCR技术从E.coliJM105中扩增出长约1.4Kb的色氨酸酶基因,将其插入高表达载体pET3a的NdeI/BamHI位点,转化E.coliBL21(DE3),构建高产色氨酸酶基因工程菌。SDS-PAGE电泳和薄层扫描表明,工程菌色氨酸酶的表达量占细胞总可溶性蛋白的69.8%。酶活测定结果表明,7株工程菌色氨酸酶的活力比宿主菌均有不同程度的提高,其中WW-11号比宿主菌高16倍。 展开更多
关键词 L-色氨酸 色氨酸酶 PCR 克隆 表达 基因工程菌
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家蚕细胞基因工程人α-干扰素注射液抗Ⅱ型单纯疱疹病毒作用 被引量:5
20
作者 王秋娟 李运曼 +2 位作者 王旻 吴梧桐 朱宝立 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1996年第9期557-557,共1页
报道家蚕细胞基因工程人α-干扰素注射液具有明显抗HSV-2的作用。在Vero细胞上,其有一定的细胞毒性,但随浓度降低而毒性减少;明显地抑制HSV-2所致细胞病变;对HSV-2的抑制指数为3.0 ̄4.0;能有效地抑制H... 报道家蚕细胞基因工程人α-干扰素注射液具有明显抗HSV-2的作用。在Vero细胞上,其有一定的细胞毒性,但随浓度降低而毒性减少;明显地抑制HSV-2所致细胞病变;对HSV-2的抑制指数为3.0 ̄4.0;能有效地抑制HSV-2在细胞内复制。在体实验表明该药对HSV-2所致小鼠阴道炎有明显治疗作用。该药小鼠im和iv的最大耐受剂量均大于5×10^7Iu/kg。 展开更多
关键词 干扰素 单纯疱疹病毒 家蚕细胞 基因工程
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