IL-27抑制小胶质细胞过度激活的作用研究

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作者 武陵溪 杜怡萱 高向东 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期801-808,共8页

小胶质细胞介导的神经炎症对阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)的发生发展至关重要。通过分析GEO数据库,发现IL-27在AD患者大脑皮质和海马中表达均下降。本研究建立了Aβ_(1-42)损伤BV-2细胞的AD细胞模型、脂多糖(LPS)损伤BV-2... 小胶质细胞介导的神经炎症对阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)的发生发展至关重要。通过分析GEO数据库,发现IL-27在AD患者大脑皮质和海马中表达均下降。本研究建立了Aβ_(1-42)损伤BV-2细胞的AD细胞模型、脂多糖(LPS)损伤BV-2细胞的炎症细胞模型和炎症动物模型,给予IL-27以评估其对调节小胶质细胞表型和神经炎症的作用。在动物模型中,通过免疫组化检测海马中Iba1+小胶质细胞数量,通过qPCR、ELISA和Western blot检测TNF-α、IL-1β和IL-6等促炎因子表达水平;在细胞模型中,通过qPCR检测小胶质细胞M1/M2表型标志物的表达水平。为进一步探究IL-27的作用机制,通过Western blot检测给予IL-27和Aβ_(1-42)后小胶质细胞中NF-κB、p-NF-κB、IκBα和p-IκBα的表达水平。研究结果表明,IL-27缓解了LPS诱导的脑内小胶质细胞异常激活,降低TNF-α、IL-1β和IL-6等促炎因子表达水平;将LPS或Aβ_(1-42)诱导的小胶质细胞从神经毒性的M1型转化为神经保护的M2型,改善了Aβ_(1-42)诱导的细胞内NF-κB和IκBα的异常磷酸化水平。本研究提示IL-27可调控Aβ_(1-42)或LPS诱导下的小胶质细胞M1/M2极化,进而缓解神经炎症。 展开更多

关键词 阿尔茨海默病 小胶质细胞 脂多糖 IL-27 极化

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T5MHCⅡ:基于深度学习的MHC-Ⅱ类蛋白质与多肽的亲和力预测模型

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作者 高正 高向东 +1 位作者 姚文兵 田浤 《中国药科大学学报》 北大核心 2025年第3期368-375,共8页

为解决抗原肽与特定MHC-Ⅱ类分子的结合亲和力预测模型性能较低,无法满足临床需求的现状,提出一种基于深度学习的MHC-Ⅱ类分子与多肽亲和力的预测模型T5MHCⅡ。该模型通过迁移学习的方法,利用蛋白质语言模型ProtT5已学习到的知识对氨基... 为解决抗原肽与特定MHC-Ⅱ类分子的结合亲和力预测模型性能较低,无法满足临床需求的现状,提出一种基于深度学习的MHC-Ⅱ类分子与多肽亲和力的预测模型T5MHCⅡ。该模型通过迁移学习的方法,利用蛋白质语言模型ProtT5已学习到的知识对氨基酸序列进行特征提取,生成高质量的表征,并结合深度学习强大的学习能力,得到具有良好预测性能的新模型。五折交叉验证结果受试者工作特征曲线下的面积(AUC)为0.893±0.003,皮尔逊相关系数(PCC)为0.780±0.006,与NetMHCⅡpan-3.2、PUFFIN、DeepMHCⅡ和RPEMH相比性能更好;分子留一验证也展示了模型具有更好的泛化能力,该研究为使用深度学习方法在数据有限的情况下更准确地预测肽-MHCⅡ的亲和力提供了新的方法。 展开更多

关键词 主要组织相容性复合体 亲和力预测 深度学习 蛋白质语言模型

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硒化肿节风浸膏残渣多糖的制备、工艺优化及抗肿瘤活性研究 被引量：6

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作者 胡成 刘雅萌 +2 位作者 戴士杰 刘玮 高向东 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期109-116,共8页

以亚硒酸钠为硒化剂,在Ba Cl_2的催化下对肿节风浸膏残渣粗多糖进行硒化修饰,以产率和硒含量作为考察指标,采用正交设计方法对硒化肿节风浸膏残渣多糖的制备工艺进行优化。同时对制备的硒化肿节风浸膏残渣多糖进行了纯度、相对分子质量... 以亚硒酸钠为硒化剂,在Ba Cl_2的催化下对肿节风浸膏残渣粗多糖进行硒化修饰,以产率和硒含量作为考察指标,采用正交设计方法对硒化肿节风浸膏残渣多糖的制备工艺进行优化。同时对制备的硒化肿节风浸膏残渣多糖进行了纯度、相对分子质量、红外光谱、热重学性质和体外抗肿瘤活性研究。结果表明,硒化修饰的最佳工艺条件为:反应温度70℃、反应时间7 h、HNO_3质量分数1.0%、Ba Cl_2加入量1.5 g,在此条件下制备所得的硒化肿节风浸膏残渣多糖总糖含量为(94.89±0.83)%,产率为(21.93±0.85)%,硒元素含量为(944.54±13.91)μg/g,相对分子质量为1 339 k D。体外抗肿瘤实验结果表明,硒化肿节风浸膏残渣多糖比原肿节风浸膏残渣粗多糖具有更高的抗肿瘤活性,有进一步开发为新型抗肿瘤药物的潜力,从而提高肿节风浸膏残渣的利用率。 展开更多

关键词 肿节风 浸膏残渣 硒化多糖 制备 抗肿瘤活性

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丝素肽对Aβ_(25-35)致SH-SY5Y细胞损伤的保护作用及机制研究 被引量：3

4

作者 尉海洋 陈松 +2 位作者 徐政 高向东 姚文兵 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期609-613,共5页

探讨丝素肽对Aβ_(25-35)所致SH-SY5Y细胞损伤的保护作用及其相关机制。建立Aβ_(25-35)损伤SH-SY5Y细胞模型,并以丝素肽干预。MTT法检测丝素肽对Aβ_(25-35)致SH-SY5Y细胞损伤的干预作用;Western blot检测丝素肽对Aβ_(25-35)致神经元... 探讨丝素肽对Aβ_(25-35)所致SH-SY5Y细胞损伤的保护作用及其相关机制。建立Aβ_(25-35)损伤SH-SY5Y细胞模型,并以丝素肽干预。MTT法检测丝素肽对Aβ_(25-35)致SH-SY5Y细胞损伤的干预作用;Western blot检测丝素肽对Aβ_(25-35)致神经元Tau蛋白多位点过度磷酸化的影响及其作用机制;DCFH-DA探针法检测丝素肽对Aβ_(25-35)致SH-SY5Y细胞胞内活性氧(ROS)异常升高的影响。结果表明,丝素肽可改善Aβ_(25-35)致SH-SY5Y细胞损伤。丝素肽可通过抑制GSK-3β活性、增强PP2A活性,改善Aβ_(25-35)引起的神经元Tau蛋白异常磷酸化水平,提示丝素肽可通过调节Tau蛋白的磷酸化发挥神经保护作用。同时,丝素肽可降低Aβ_(25-35)引起的SH-SY5Y细胞胞内升高的ROS水平,提示丝素肽还可通过调节氧化应激反应途径保护神经元。 展开更多

关键词 丝素肽 阿尔茨海默病 神经保护活性 TAU蛋白磷酸化 活性氧

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含对硝基苯丙氨酸HER2疫苗的免疫原性研究 被引量：3

5

作者 何羽 田浤 +2 位作者 戴鑫 姚文兵 高向东 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期369-375,共7页

为了打破HER2自身蛋白的免疫耐受,产生高效的免疫应答,利用遗传密码扩充技术,将免疫原性氨基酸对硝基苯丙氨酸定点引入到HER2片段的第5、26、79位,获得了含有对硝基苯丙氨酸的HER2突变体。通过镍亲和色谱柱,获得纯度达95%以上的原型和... 为了打破HER2自身蛋白的免疫耐受,产生高效的免疫应答,利用遗传密码扩充技术,将免疫原性氨基酸对硝基苯丙氨酸定点引入到HER2片段的第5、26、79位,获得了含有对硝基苯丙氨酸的HER2突变体。通过镍亲和色谱柱,获得纯度达95%以上的原型和突变体HER2分子。对HER2疫苗的免疫原性进行分析,结果显示,pNO_2Phe^(79)HER2能够在C57BL/6小鼠体内产生高滴度的交叉性抗体。免疫小鼠的抗血清能够识别具有完整HER2受体胞外区的SKBR-3细胞,并通过ADCC效应裂解HER2高表达的HER2+B16F10细胞。这些研究结果提示,定点引入了对硝基苯丙氨酸的pNO_2Phe^(79)HER2可以作为靶向HER2的肿瘤疫苗候选分子。 展开更多

关键词 HER2 对硝基苯丙氨酸 免疫原性

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FGF21对Aβ25-35导致星形胶质细胞损伤的保护作用及机制研究 被引量：2

6

作者 孙岩 高向东 陈松 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期490-496,共7页

以Aβ25-35诱导星形胶质细胞建立损伤模型,探讨阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease,AD)样病变中成纤维细胞生长因子21(fibroblast growth factor 21,FGF21)对星形胶质细胞的作用及机制。采用Aβ25-35诱导C6星形胶质细胞株及原代星形胶... 以Aβ25-35诱导星形胶质细胞建立损伤模型,探讨阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease,AD)样病变中成纤维细胞生长因子21(fibroblast growth factor 21,FGF21)对星形胶质细胞的作用及机制。采用Aβ25-35诱导C6星形胶质细胞株及原代星形胶质细胞损伤建立细胞模型;以不同浓度的FGF21对Aβ25-35诱导细胞损伤模型干预,MTT法检测细胞活性;采用DCFH-DA探针结合流式细胞仪检测FGF21及Aβ25-35对C6细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平的作用;Western blot检测FGF21及Aβ25-35对C6细胞中丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPKs)活性的影响。结果显示:FGF21能够减少Aβ25-35导致C6细胞及原代星形胶质细胞的损伤,下调C6细胞内异常ROS水平,同时缓解Aβ25-35引起的C6细胞MEK1/2、ERK1/2、p38磷酸化水平的异常,提示FGF21可能通过调控ROS途径及MAPKs信号通路进而缓解Aβ25-35导致的星形胶质细胞损伤。 展开更多

关键词 成纤维细胞生长因子21 阿尔茨海默病 星形胶质细胞 活性氧 丝裂原活化蛋白激酶

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microRNA-23b对Aβ_(25-35)导致神经细胞凋亡的作用及机制研究 被引量：2

7

作者 潘可萌 陈松 +1 位作者 高向东 姚文兵 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期480-486,共7页

为了研究miR-23b对阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease,AD)细胞模型的作用及机制,采用Aβ_(25-35)诱导SH-SY5Y细胞损伤建立细胞模型;采用Annexin V-FITC/PI双染结合流式细胞术检测转染miR-23b对Aβ_(25-35)诱导SH-SY5Y细胞凋亡情况的影... 为了研究miR-23b对阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease,AD)细胞模型的作用及机制,采用Aβ_(25-35)诱导SH-SY5Y细胞损伤建立细胞模型;采用Annexin V-FITC/PI双染结合流式细胞术检测转染miR-23b对Aβ_(25-35)诱导SH-SY5Y细胞凋亡情况的影响;采用JC-1探针检测转染miR-23b对Aβ_(25-35)损伤SH-SY5Y细胞后细胞内线粒体膜电位的影响;采用Western blot检测转染miR-23b对Aβ_(25-35)诱导SH-SY5Y细胞内凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2以及自噬相关蛋白p62、LC3B、Beclin-1表达水平的变化。结果显示:miR-23b能够改善Aβ_(25-35)诱导SH-SY5Y细胞的凋亡水平和异常的线粒体膜电位,并缓解Aβ_(25-35)引起的神经细胞凋亡蛋白和自噬蛋白表达的异常,提示miR-23b能够改善Aβ_(25-35)导致的凋亡通路和自噬通路异常,进而缓解Aβ_(25-35)导致的神经细胞凋亡。 展开更多

关键词 微小RNA-23b 阿尔茨海默病 Β-淀粉样蛋白 凋亡 自噬

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多肽药物关键水解酶体外高通量分析方法的建立

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作者 张凡 田浤 姚文兵 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期352-356,共5页

为了建立测定多肽药物体内代谢关键水解酶的高通量分析方法,本研究基于高效液相色谱技术,确定通用的体外酶解反应条件为:pH7.8或9.0,缓冲体系为0.01mol/LPBS或50mmol/L Tris缓冲液,实现对多肽药物关键水解酶的统一高通量体外检测。利用... 为了建立测定多肽药物体内代谢关键水解酶的高通量分析方法,本研究基于高效液相色谱技术,确定通用的体外酶解反应条件为:pH7.8或9.0,缓冲体系为0.01mol/LPBS或50mmol/L Tris缓冲液,实现对多肽药物关键水解酶的统一高通量体外检测。利用该方法对多肽药物普兰林肽的关键水解酶进行分析,研究结果显示,基肽释放相关酶5和二肽基肽酶4对普兰林肽的水解作用最强,与微量热泳动分析结果一致。因此,本研究所建立的方法可用于分析多肽药物的关键水解酶,为优化多肽药物的酶稳定性提供方法参考与指导。 展开更多

关键词 多肽 酶解代谢 高效液相色谱 蛋白水解酶 高通量分析 普兰林肽

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PD-L1疫苗中引入不同免疫原性氨基酸对T细胞亚群分化的影响

9

作者 陈红梅 康彦良 +2 位作者 刘利 姚文兵 田浤 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期349-356,共8页

为了比较内源性的3-硝基酪氨酸与非天然的4-硝基苯丙氨酸在PD-L1疫苗中的引入对T细胞亚群分化的影响,利用遗传密码扩充技术,将这两种免疫原性氨基酸分别引入到PD-L1疫苗的相同位点,获得具有3-硝基酪氨酸以及4-硝基苯丙氨酸的两种PD-L1... 为了比较内源性的3-硝基酪氨酸与非天然的4-硝基苯丙氨酸在PD-L1疫苗中的引入对T细胞亚群分化的影响,利用遗传密码扩充技术,将这两种免疫原性氨基酸分别引入到PD-L1疫苗的相同位点,获得具有3-硝基酪氨酸以及4-硝基苯丙氨酸的两种PD-L1突变体。用这两种突变体免疫小鼠,分析对小鼠脾脏T细胞亚群分化的影响。流式细胞术检测结果显示,4-硝基苯丙氨酸在PD-L1疫苗中的引入可促进Th1细胞的极化,同时降低Treg细胞的比例,3-硝基酪氨酸的引入对Th1细胞的极化无影响,同时能显著提高Treg和Th17细胞的比例。二者在PD-L1疫苗中的引入均能促进脾脏CD8+T细胞的应答,其中含有4-硝基苯丙氨酸的PD-L1突变体应答效果更强。实验结果表明,与内源性的3-硝基酪氨酸在PD-L1疫苗中的引入相比,非天然的4-硝基苯丙氨酸更适合用于肿瘤疫苗的设计。 展开更多

关键词 PD-L1 疫苗 3-硝基酪氨酸 4-硝基苯丙氨酸 T细胞亚群

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SNP-9对鱼藤酮所致帕金森病细胞模型的作用及机制研究

10

作者 黄志欢 梁潇 +1 位作者 高向东 陈松 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期238-244,共7页

本文研究SNP-9对帕金森病(Parkinson’s disease,PD)细胞模型的作用和机制。使用鱼藤酮损伤SH-SY5Y细胞建立PD细胞模型;通过MTT法检测鱼藤酮和SNP-9对细胞活力的影响;Hoechst/PI双染法检测鱼藤酮和SNP-9对细胞凋亡的影响;DCFH-DA探针检... 本文研究SNP-9对帕金森病(Parkinson’s disease,PD)细胞模型的作用和机制。使用鱼藤酮损伤SH-SY5Y细胞建立PD细胞模型;通过MTT法检测鱼藤酮和SNP-9对细胞活力的影响;Hoechst/PI双染法检测鱼藤酮和SNP-9对细胞凋亡的影响;DCFH-DA探针检测鱼藤酮和SNP-9对细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平的影响;Western blot检测鱼藤酮和SNP-9对酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)、α-突触核蛋白(α-synuclein,α-syn)、Bcl-2、Bax蛋白水平的影响。研究结果显示,SNP-9能够缓解鱼藤酮诱导的SH-SY5Y细胞活力、TH和α-syn水平、细胞凋亡、ROS水平,以及细胞凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2的异常。研究结果提示SNP-9可能通过调控凋亡相关通路,进而缓解鱼藤酮导致的神经细胞损伤。 展开更多

关键词 帕金森病 SNP-9 鱼藤酮 凋亡

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基于肿瘤抗原PBK的融合蛋白疫苗的设计制备及抗肿瘤活性 被引量：1

11

作者 钱茜茜 李国志 +1 位作者 田浤 高向东 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期657-665,共9页

PBK是一种癌症/睾丸抗原,其在人类的多种正常组织中不表达,而在癌变后的组织细胞中异常过表达,促进癌症的发生、转移甚至耐药性,为肿瘤免疫治疗提供了新靶点。本研究将硝基化T细胞表位与PBK蛋白融合表达,构建了以PBK为靶点的蛋白疫苗PBK... PBK是一种癌症/睾丸抗原,其在人类的多种正常组织中不表达,而在癌变后的组织细胞中异常过表达,促进癌症的发生、转移甚至耐药性,为肿瘤免疫治疗提供了新靶点。本研究将硝基化T细胞表位与PBK蛋白融合表达,构建了以PBK为靶点的蛋白疫苗PBK-Nitrath;采用IFN-γ ELISpot法评估免疫小鼠脾脏中PBK抗原特异性T细胞的激活水平,并在体外进行细胞毒性T细胞杀伤效应检测评估其对H22肝癌细胞的杀伤能力;在此基础上采用H22肝癌皮下移植瘤模型对其抗肿瘤活性进行评价,并通过流式细胞术对外周血和脾脏T淋巴细胞的分化情况与肿瘤的免疫浸润情况进行分析。结果显示,PBK-Nitrath能够显著地诱导PBK抗原特异性T细胞的激活,增强细胞毒性T淋巴细胞的杀伤能力,并可显著抑制小鼠肝癌肿瘤生长,提高外周血与脾脏中CD8~+CD107a~+T细胞的比例,同时可促进肿瘤淋巴细胞的浸润。研究结果提示PBK-Nitrath是有潜力的肿瘤疫苗候选分子。 展开更多

关键词 PBK 肿瘤免疫 肿瘤疫苗 肝癌

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口服新型降糖多肽ODA的设计及其口服降糖活性

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作者 安东贤 姚文兵 +1 位作者 高向东 田浤 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期511-518,共8页

肠促胰岛素分泌肽胰高血糖素样肽-1(GLP-1)和葡萄糖依赖性促胰岛素释放多肽(GIP)能通过血糖依赖机制促进胰岛素分泌,其特异性结合受体GLP-1R和GIPR是治疗2型糖尿病的良好靶点。以本实验室前期设计的口服降糖多肽OHP2为基础,设计了可口... 肠促胰岛素分泌肽胰高血糖素样肽-1(GLP-1)和葡萄糖依赖性促胰岛素释放多肽(GIP)能通过血糖依赖机制促进胰岛素分泌,其特异性结合受体GLP-1R和GIPR是治疗2型糖尿病的良好靶点。以本实验室前期设计的口服降糖多肽OHP2为基础,设计了可口服的新型降糖多肽——ODA。ODA较OHP2的亲脂性提高,在Caco-2细胞中的胞吞能力及跨细胞转运能力更强。ODA保留了OHP2对GLP-1R的激活能力,增强了与GIPR的结合能力。口服低剂量ODA(0.53 mg/kg)即可达到与口服OHP2(1.06 mg/kg)相当的降糖水平。研究结果显示,ODA是治疗2型糖尿病极具潜力的口服药物。 展开更多

关键词 肠促胰岛素分泌肽 胰高血糖素样肽-1 葡萄糖依赖性促胰岛素释放多肽 2型糖尿病 口服降糖活性

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VHL抑制剂对鱼藤酮所致帕金森病秀丽隐杆线虫模型的影响 被引量：5

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作者 查倩 高向东 陈松 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期346-351,共6页

为了研究VHL(von Hippel-Lindau)抑制剂对帕金森病(Parkinson′s disease,PD)秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans,C. elegans,简称线虫)模型的影响,采用鱼藤酮诱导PD线虫模型,并使用VHL抑制剂VH298进行干预。以不同浓度的鱼藤酮对转... 为了研究VHL(von Hippel-Lindau)抑制剂对帕金森病(Parkinson′s disease,PD)秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans,C. elegans,简称线虫)模型的影响,采用鱼藤酮诱导PD线虫模型,并使用VHL抑制剂VH298进行干预。以不同浓度的鱼藤酮对转基因线虫zcIs9;otIs181进行诱导损伤,考察线虫死亡、多巴胺能神经元退化和线粒体未折叠蛋白反应(mitochondrial unfolded protein response,mito-UPR)情况;采用不同浓度的VH298干预PD线虫模型,考察线虫死亡和多巴胺能神经元退化情况,同时对线虫运动行为如头部摆动频率、身体弯曲频率以及觅食行为进行分析。结果显示:不同浓度的鱼藤酮对转基因线虫zcIs9;otIs181具有不同程度的致死毒性和神经毒性,并且引起线虫mito-UPR异常;VH298能够减少鱼藤酮所致PD线虫模型的异常死亡和多巴胺能神经元退化情况,同时能够缓解线虫模型头部摆动频率、身体弯曲频率和觅食行为异常情况。实验结果提示,鱼藤酮可通过诱导转基因线虫zcIs9;otIs181线粒体损伤,破坏线粒体稳态,进而导致多巴胺能神经元退化及线虫死亡;VHL抑制剂VH298能改善鱼藤酮所致PD线虫模型死亡现象,并且VHL抑制剂VH298通过减少多巴胺能神经元退化,进而缓解PD线虫模型运动行为异常情况。 展开更多

关键词 VHL抑制剂 VH298 帕金森病 秀丽隐杆线虫 鱼藤酮 多巴胺能神经元

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FGF21对鱼藤酮导致神经细胞损伤的作用及其机制 被引量：3

14

作者 陈映洁 高向东 陈松 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期718-723,共6页

采用鱼藤酮诱导SH-SY5Y细胞损伤建立帕金森病样病变细胞模型,探讨成纤维细胞生长因子21(fibroblast growth factor 21,FGF21)对其作用及机制。以不同浓度的FGF21对鱼藤酮诱导的神经细胞损伤模型进行干预,MTT法检测神经细胞活性;采用Anne... 采用鱼藤酮诱导SH-SY5Y细胞损伤建立帕金森病样病变细胞模型,探讨成纤维细胞生长因子21(fibroblast growth factor 21,FGF21)对其作用及机制。以不同浓度的FGF21对鱼藤酮诱导的神经细胞损伤模型进行干预,MTT法检测神经细胞活性;采用Annexin V-FITC/PI双染法分析神经细胞凋亡情况;Western blot检测FGF21及鱼藤酮对神经细胞酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)和α-突触核蛋白(α-synuclein,α-syn)表达的影响;采用DCFH-DA荧光探针检测FGF21及鱼藤酮对神经细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平的作用。结果显示:FGF21能够减少鱼藤酮致神经细胞的损伤,抑制神经细胞凋亡,缓解鱼藤酮引起的神经细胞TH和α-syn水平的异常,同时降低神经细胞内异常ROS水平,提示FGF21可能通过调控氧化应激进而缓解鱼藤酮导致的神经细胞损伤。 展开更多

关键词 成纤维细胞生长因子21 帕金森病 鱼藤酮 细胞凋亡 活性氧

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TAT-FGF21融合蛋白的构建表达纯化及神经保护活性 被引量：2

15

作者 陈苏婷 陈松 高向东 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期496-501,共6页

为了提高成纤维细胞生长因子21(FGF21)的脑内分布而设计TAT-FGF21融合蛋白并探讨其神经保护活性。通过构建p ET28a-TAT-FGF21重组质粒,并转化至E.coli BL-21(DE3)感受态细菌,经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达后通过镍离子金属鳌合亲... 为了提高成纤维细胞生长因子21(FGF21)的脑内分布而设计TAT-FGF21融合蛋白并探讨其神经保护活性。通过构建p ET28a-TAT-FGF21重组质粒,并转化至E.coli BL-21(DE3)感受态细菌,经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达后通过镍离子金属鳌合亲和层析介质(Ni-NTA)亲和色谱柱分离纯化获得TAT-FGF21融合蛋白。随后利用Aβ_(25-35)诱导SHSY5Y细胞损伤模型,并以TAT-FGF21融合蛋白进行干预。MTT法检测TAT-FGF21对Aβ_(25-35)致SH-SY5Y细胞活性下降的干预作用;DCFH-DA荧光探针法检测TAT-FGF21对Aβ_(25-35)致SH-SY5Y细胞内活性氧生成增加的干预作用;JC-1荧光探针法检测TAT-FGF21对Aβ_(25-35)致SH-SY5Y细胞线粒体膜电位异常下降的干预作用。结果显示,TAT-FGF21能够提高SHSY5Y细胞活性、降低SH-SY5Y细胞内ROS生成水平、提高SH-SY5Y细胞线粒体膜电位,提示TAT-FGF21可以通过缓解氧化损伤发挥神经保护作用。 展开更多

关键词 TAT-FGF21 表达 纯化 神经保护活性 活性氧 线粒体膜电位

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免疫检查点B7-H3表位疫苗的设计及其抗肿瘤活性

16

作者 夏雪霏 张莉 +3 位作者 罗建华 姚文兵 高向东 田浤 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期472-479,共8页

B7-H3是在多种肿瘤表面过表达的免疫检查点分子,是肿瘤免疫治疗的理想靶点。利用本实验室前期设计的硝基化T细胞表位为基础,构建了可靶向免疫检查点B7-H3的表位疫苗。该疫苗能在CT26结肠癌模型中显著抑制肿瘤生长,且与PD-L1蛋白疫苗有... B7-H3是在多种肿瘤表面过表达的免疫检查点分子,是肿瘤免疫治疗的理想靶点。利用本实验室前期设计的硝基化T细胞表位为基础,构建了可靶向免疫检查点B7-H3的表位疫苗。该疫苗能在CT26结肠癌模型中显著抑制肿瘤生长,且与PD-L1蛋白疫苗有明显的协同作用。B7-H3疫苗可以增加脾脏T淋巴细胞中CD4^(+)T细胞的比例和肿瘤浸润T淋巴细胞中CD8^(+)T细胞的比例,同时减少肿瘤浸润CD4^(+)T淋巴细胞中抑制性Treg细胞的比例,有效改善肿瘤免疫抑制微环境。研究结果提示,B7-H3表位疫苗可以作为有效的肿瘤疫苗候选分子。 展开更多

关键词 免疫检查点 B7-H3 表位疫苗 肿瘤免疫

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SNP-9对Aβ_(25-35)导致bEnd.3细胞损伤的作用及其机制

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作者 孟悦 姚思远 +1 位作者 高向东 陈松 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期333-339,共7页

为了研究来源于丝素蛋白水解物的神经保护活性多肽SNP-9对于阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease,AD)中血脑屏障损伤的作用,使用Aβ_(25-35)损伤脑微血管内皮细胞bEnd.3建立AD损伤模型,并给药干预。通过MTT实验检测SNP-9和Aβ_(25-35)对... 为了研究来源于丝素蛋白水解物的神经保护活性多肽SNP-9对于阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease,AD)中血脑屏障损伤的作用,使用Aβ_(25-35)损伤脑微血管内皮细胞bEnd.3建立AD损伤模型,并给药干预。通过MTT实验检测SNP-9和Aβ_(25-35)对细胞活力的影响;RT-qPCR法检测SNP-9和Aβ_(25-35)对细胞紧密连接(tightjunctions,TJs)相关的ZO-1、occludin和claudin-5 mRNA水平的影响;Westernblot检测SNP-9和Aβ_(25-35)对细胞TNF-α、磷酸化NF-κB、NF-κB、IκBα和RAGE蛋白水平的影响。实验结果显示,SNP-9给药减少了Aβ_(25-35)诱导的bEnd.3细胞损伤,改善了模型细胞中ZO-1、occludin和claudin-5 mRNA水平的异常情况,缓解了Aβ_(25-35)导致的TNF-α、磷酸化NF-κB、IκBα和RAGE蛋白水平异常。研究结果表明,SNP-9可能通过影响RAGE/NF-κB通路,调控模型细胞炎症因子TNF-α水平,改善TJs相关指标异常,缓解Aβ_(25-35)诱导的bEnd.3细胞损伤。 展开更多

关键词 SNP-9 阿尔茨海默病 血脑屏障 bEnd.3 Aβ_(25-35) NF-ΚB

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评价肿瘤疫苗免疫原性的新型人免疫系统小鼠模型

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作者 江亮亮 江涛 +2 位作者 罗建华 姚文兵 田浤 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期734-742,共9页

人免疫系统(human immune system,HIS)小鼠大都用于评价肿瘤疫苗诱导细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)效应的能力,却不能准确反映肿瘤疫苗诱导体液免疫应答的能力。本研究利用密度梯度离心法分离人外周血单核细胞,与体外... 人免疫系统(human immune system,HIS)小鼠大都用于评价肿瘤疫苗诱导细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)效应的能力,却不能准确反映肿瘤疫苗诱导体液免疫应答的能力。本研究利用密度梯度离心法分离人外周血单核细胞,与体外诱导分化的同源树突状细胞(dendritic cells,DCs)共移植到NCG小鼠中从而建立DC-HIS小鼠模型。在DC-HIS小鼠中,共移植的抗原递呈细胞(HLA-DR^+CD11c^+)能定植于模型小鼠脾脏;DCs共移植也显著提高了激活的人CD4^+ T/CD8^+ T细胞和人B细胞的比例,提示DCs-HIS小鼠能较好的模拟人体的免疫应答情况。利用所构建的DCs-HIS小鼠评价靶向HER2蛋白疫苗(NitraTh-HER2)的免疫原性,结果显示,NitraTh-HER2疫苗能够诱导HER2特异性人IgG抗体的产生,并具有显著的抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity,ADCC),靶细胞SK-BR-3的裂解率达到47.1%;NitraTh-HER2疫苗能够产生抗原特异性的CTL效应,靶细胞SK-BR-3的裂解率达到14.6%。研究结果提示,DC-HIS小鼠模型为预测人类肿瘤疫苗的免疫原性提供了有效的方法。 展开更多

关键词 人免疫系统小鼠 模型 肿瘤疫苗 同源树突状细胞 免疫原性

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硝基化通用T细胞表位疫苗CD47-NitraTh的设计与抑瘤活性

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作者 罗建华 夏雪霏 +1 位作者 姚文兵 田浤 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期614-621,共8页

利用遗传密码扩充技术,将免疫原性氨基酸对硝基苯丙氨酸定点引入到通用T细胞表位,并将其与免疫检查点分子CD47分子胞外区19-140片段融合表达,构建了靶向免疫检查点CD47的疫苗CD47-NitraTh。CD47-NitraTh能够在BALB/c小鼠体内诱导产生高... 利用遗传密码扩充技术,将免疫原性氨基酸对硝基苯丙氨酸定点引入到通用T细胞表位,并将其与免疫检查点分子CD47分子胞外区19-140片段融合表达,构建了靶向免疫检查点CD47的疫苗CD47-NitraTh。CD47-NitraTh能够在BALB/c小鼠体内诱导产生高滴度抗体,并可显著抑制CT26结肠癌肿瘤生长,提高脾脏CD4^+T细胞和CD8^+T细胞的比例,同时可促进naive T细胞向Th1细胞极化。值得关注的是,CD47-NitraTh不仅提高了肿瘤浸润淋巴细胞的比例,同时还降低了肿瘤组织中Treg细胞比例,意味着CD47-NitraTh疫苗能够重塑肿瘤免疫抑制性微环境。本研究结果提示,CD47-NitraTh可以作为有效的肿瘤疫苗候选分子。 展开更多

关键词 免疫检查点 CD47 通用T细胞表位 肿瘤疫苗

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突变型NDUFS7质粒的构建及其对神经细胞的影响

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作者 沈杰 查倩 +1 位作者 高向东 陈松 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期599-606,共8页

为了研究NDUFS7基因突变对神经元的影响,通过构建pcDNA3.1(+)-NDUFS7 Q208STOP突变质粒,并将其转入分化后SH-SY5Y细胞。采用MTT法检测转染突变质粒对多巴胺能神经细胞活力的影响;AnnexinⅤ-FITC/PI双染结合流式细胞术检测转染突变质粒... 为了研究NDUFS7基因突变对神经元的影响,通过构建pcDNA3.1(+)-NDUFS7 Q208STOP突变质粒,并将其转入分化后SH-SY5Y细胞。采用MTT法检测转染突变质粒对多巴胺能神经细胞活力的影响;AnnexinⅤ-FITC/PI双染结合流式细胞术检测转染突变质粒对细胞凋亡情况的影响;Western blot法检测转染突变质粒后细胞内凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2表达水平的变化;采用JC-1探针检测转染突变质粒对分化后SH-SY5Y细胞内线粒体膜电位的影响及抗氧化剂Trolox的干预作用;最后PI/Hoechst双染检测Trolox对转染突变质粒的分化后SH-SY5Y细胞凋亡情况的干预作用。结果显示,多巴胺能神经细胞内线粒体复合体Ⅰ亚基突变能够导致神经细胞活力下降,凋亡增多,而抗氧化剂能够缓解转染突变质粒导致的线粒体膜电位异常和细胞凋亡,提示转染NDUFS7基因突变质粒能通过引起多巴胺能神经细胞内线粒体功能异常从而导致细胞凋亡。 展开更多

关键词 NDUFS7 多巴胺能神经元 细胞凋亡 线粒体膜电位

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