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抗Ⅰ型糖尿病融合基因HSP65-6×P277在烟草中的表达 被引量:1
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作者 郑卿 郭书巧 +3 位作者 杨洁 吴洁 刘景晶 倪万潮 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2012年第3期477-481,共5页
为了研究抗Ⅰ型糖尿病融合蛋白质基因HSP65-6×P277在植物中的表达,构建了含有融合基因HSP65-6×P277的植物表达载体pCAMBIA2301-HSP65-6×P277,通过农杆菌介导法将重组载体转入烟草,利用卡那霉素作为植物筛选标记,获得含... 为了研究抗Ⅰ型糖尿病融合蛋白质基因HSP65-6×P277在植物中的表达,构建了含有融合基因HSP65-6×P277的植物表达载体pCAMBIA2301-HSP65-6×P277,通过农杆菌介导法将重组载体转入烟草,利用卡那霉素作为植物筛选标记,获得含有抗Ⅰ型糖尿病基因的16株转基因烟草植株。通过PCR、半定量RT-PCR及SDS-PAGE蛋白质电泳等方法检测,初步验证在抗性烟草植株中融合基因HSP65-6×P277在mRNA和蛋白质水平上进行了表达。 展开更多
关键词 Ⅰ型糖尿病 P277肽 烟草 转化 植物疫苗
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重组人源胰岛素原C肽在大肠杆菌中的克隆、表达与纯化(英文) 被引量:2
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作者 王学军 顾凯 +3 位作者 曹荣月 林洁 吴洁 刘景晶 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期174-180,共7页
目的:构建一种新型表达载体(pEDCC),表达并纯化得到人源胰岛素原C肽。方法:将编码截短的门冬酰胺酶突变体(ansB-C),天然C肽,人IgG1铰链区(hinge),额外的酸敏感二肽(DP)以及富含碱性氨基酸的8肽(KRKRKKSR)的核苷酸序列依次分别插入pET28... 目的:构建一种新型表达载体(pEDCC),表达并纯化得到人源胰岛素原C肽。方法:将编码截短的门冬酰胺酶突变体(ansB-C),天然C肽,人IgG1铰链区(hinge),额外的酸敏感二肽(DP)以及富含碱性氨基酸的8肽(KRKRKKSR)的核苷酸序列依次分别插入pET28a载体中,构建表达载体pEDCC。在乳糖的诱导下,融合蛋白ansB-C-hinge-DPKRKRKKSRNGS-GR-C-peptide以包涵体形式高效表达。融合蛋白经洗涤和乙醇分级沉淀纯化后,通过酸水解将PKRKRKKSRNGSGR-C-peptide释放出来。C肽N端14肽用胰蛋白酶切割,通过DE52柱与C-peptide分离。结果:构建的表达载体pEDCC序列正确,融合蛋白经分离纯化得到了高纯度的重组人源胰岛素原C肽。结论:以截短的门冬酰胺酶作为融合伙伴,并以富含碱性氨基酸的8肽调节等电点是一种生产重组人源胰岛素原C肽的有效方法。 展开更多
关键词 重组人源胰岛素原C肽 基因融合 表达与纯化 门冬酰胺酶 胰蛋白酶
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天花粉蛋白抗小鼠H22肿瘤作用的研究 被引量:5
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作者 张帆 胡向兵 +2 位作者 曹荣月 朱学军 刘景晶 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期242-246,共5页
对天花粉蛋白注射液(TCS)抗BALB/c小鼠体内H22肿瘤的作用进行了初步研究。建立移植型H22肝癌小鼠模型,腹腔注射TCS治疗,检测抑瘤率、皮内肿瘤微血管新生等指标,并通过细胞流式分析和体外鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)实验对其抗肿瘤作用机制进行... 对天花粉蛋白注射液(TCS)抗BALB/c小鼠体内H22肿瘤的作用进行了初步研究。建立移植型H22肝癌小鼠模型,腹腔注射TCS治疗,检测抑瘤率、皮内肿瘤微血管新生等指标,并通过细胞流式分析和体外鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)实验对其抗肿瘤作用机制进行探讨。结果显示,TCS治疗组实体瘤重与皮内肿瘤微血管新生数都明显小于模型对照组(P<0.01)。证明TCS通过抑制血管生长表现出一定的抗小鼠体内H22肿瘤生长的作用。 展开更多
关键词 天花粉蛋白 H22肝癌 血管生成 鸡胚绒毛尿囊膜
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重组热休克蛋白65通过鼻黏膜免疫对NOD小鼠胰腺炎和糖尿病发生的影响 被引量:3
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作者 朱爱华 金亮 +3 位作者 刘景晶 刘美艳 吕爱军 郑元林 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期1165-1168,共4页
目的:研究重组热休克蛋白65通过鼻黏膜免疫途径对NOD小鼠胰腺炎和糖尿病发生的影响。方法:通过PCR方法克隆出结核分枝杆菌的热休克蛋白65的基因序列,构建了pET28a-HSP65高效表达载体,在大肠杆菌中高效可溶性表达,利用阴离子交换柱层析... 目的:研究重组热休克蛋白65通过鼻黏膜免疫途径对NOD小鼠胰腺炎和糖尿病发生的影响。方法:通过PCR方法克隆出结核分枝杆菌的热休克蛋白65的基因序列,构建了pET28a-HSP65高效表达载体,在大肠杆菌中高效可溶性表达,利用阴离子交换柱层析分离纯化。在不添加佐剂的情况下以纯化的HSP65通过3次鼻黏膜免疫非肥胖型1型糖尿病模型动物(NOD)小鼠,每月采集小鼠的血清,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)和Western blot检测血清中抗体的产生,利用自动生化分析仪检测血糖浓度。结果:通过鼻黏膜免疫途径可成功诱导小鼠产生特异的抗HSP65抗体,组织病理学分析也显示HSP65通过鼻黏膜免疫能降低NOD小鼠胰腺病变的产生。结论:HSP65通过鼻黏膜免疫能预防NOD小鼠糖尿病的发生,证实了HSP65经鼻黏膜免疫能降低和自身免疫性糖尿病有关的炎症过程的严重性,对1型糖尿病的治疗提供了一个新的途径。 展开更多
关键词 热休克蛋白 1型糖尿病 疫苗 鼻内 抗体 胰腺炎
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GnRH/M2融合蛋白致敏DC疫苗对黑色素瘤B16F10细胞移植瘤的抑制 被引量:1
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作者 曹荣月 马云菲 +4 位作者 袁玉婷 张昕黎 李曼曼 苗梓韬 金亮 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期468-475,共8页
目的:制备促性腺激素释放激素(gonadotropin releasing hormone,GnRH)与M2的融合蛋白(GnRH/M2),研究由该融合蛋白致敏而成的DC疫苗对黑色素瘤B16F10细胞小鼠移植瘤的抑制作用。方法:构建表达载体p ET28a-ans B-CGnRH3-hinge-MVP-M2质粒... 目的:制备促性腺激素释放激素(gonadotropin releasing hormone,GnRH)与M2的融合蛋白(GnRH/M2),研究由该融合蛋白致敏而成的DC疫苗对黑色素瘤B16F10细胞小鼠移植瘤的抑制作用。方法:构建表达载体p ET28a-ans B-CGnRH3-hinge-MVP-M2质粒,该质粒转化的工程菌在乳糖的诱导下,融合蛋白ans B-C-GnRH3-hinge-MVP-M2以包涵体形式表达,经超声破碎、洗涤和乙醇分级沉淀纯化后,通过酸水解将蛋白多肽GnRH3-hinge-MVP-M2释放出来,并通过DEAE-52阴离子交换层析进行分离。将此融合多肽致敏DC获得DC疫苗。构建黑色素瘤B16F10细胞小鼠移植瘤模型,按接种疫苗不同,分为:环磷酰胺组(CTX)、GnRH/M2融合蛋白致敏DC组(GDC)、肿瘤细胞裂解物致敏DC组(BDC)、GnRH/M2融合蛋白致敏DC+环磷酰胺组(GDCTX)、肿瘤细胞裂解物致敏DC+环磷酰胺组(BDCTX)和生理盐水组(NS),观察GnRH/M2疫苗对模型小鼠的移植瘤生长、CTL杀伤能力和T细胞增殖的作用。结果:成功构建p ET28a-ans B-C-GnRH3-hinge-MVP-M2质粒并高效表达融合蛋白。GDC组移植瘤生长明显慢于NS组(P<0.05),且与BDC组相似(P>0.05);GDCTX组抑瘤效果虽进一步提高,但与CTX组相比差异无统计学意义(P>0.05)。各实验组对B16F10细胞的杀伤作用和对T细胞增殖作用均优于阴性对照组(P<0.05或P<0.01),且GDC组与BDC组间差异不显著(P>0.05)。结论:初步证明融合多肽GnRH/M2致敏的DC疫苗能有效抑制黑色素瘤B16F10细胞小鼠移植瘤的生长。 展开更多
关键词 促性腺激素释放激素 树突状细胞 B16F10细胞 黑色素瘤 融合蛋白
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L-天冬酰胺酶表面呈现对P277肽免疫原性及抗NOD小鼠糖尿病作用的影响(英文)
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作者 朱爱华 刘文涛 +3 位作者 龙军 吴洁 刘景晶 李泰明 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期730-737,共8页
将P277多肽融合在L-天冬酰胺酶的C端,中间引入破伤毒素肽(TTP),重组嵌合酶AnsB-TTP-P277能以可溶性蛋白的形式表达于大肠杆菌周质内,且能保持大约80%的天然酶催化活力.用纯化的嵌合酶腹腔注射非肥胖性(NOD)小鼠,可成功诱导小鼠体内产生... 将P277多肽融合在L-天冬酰胺酶的C端,中间引入破伤毒素肽(TTP),重组嵌合酶AnsB-TTP-P277能以可溶性蛋白的形式表达于大肠杆菌周质内,且能保持大约80%的天然酶催化活力.用纯化的嵌合酶腹腔注射非肥胖性(NOD)小鼠,可成功诱导小鼠体内产生高水平抗P277抗体.研究表明,P277肽可呈现于L-天冬酰胺酶表面,有效地克服单独P277的弱免疫原性,激发机体产生较强烈的免疫反应.小鼠胰腺病理学切片也显示:重组嵌合酶AnsB-TTP-P277和单纯P277肽相比,能更有效地抑制NOD小鼠糖尿病的发生. 展开更多
关键词 L-天冬酰胺酶 P277肽 胰岛素依赖型糖尿病 抗体 血糖
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多发性硬化动物模型研究进展 被引量:4
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作者 彭真 张礼标 +1 位作者 吴洁 孙云霄 《动物医学进展》 北大核心 2017年第4期108-112,共5页
多发性硬化(MS)是一种慢性中枢神经系统自身免疫性疾病,为临床神经系统的疑难重病,对其病理过程、发病机制的研究以及治疗药物的筛选和评价都需要合适的动物模型。论文从实验动物选择、几种重要的诱导方法及模型的行为学、影像学及病理... 多发性硬化(MS)是一种慢性中枢神经系统自身免疫性疾病,为临床神经系统的疑难重病,对其病理过程、发病机制的研究以及治疗药物的筛选和评价都需要合适的动物模型。论文从实验动物选择、几种重要的诱导方法及模型的行为学、影像学及病理评价等多方面对MS动物模型研究进展进行介绍。 展开更多
关键词 多发性硬化 中枢神经系统 免疫 动物模型
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