中药有效成分防治骨性关节炎的研究进展 被引量：18

1

作者 韩晗 张媛媛 +4 位作者 潘立 陈正东 薛漓轩 余伯阳 寇俊萍 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期279-285,共7页

骨性关节炎(osteoarthritis,OA)是临床上常见的慢性退行性关节疾病,其发病率随着年龄的增加逐渐上升,严重影响中老年患者的生活质量。现阶段对于OA的药物治疗如非甾体类抗炎药物(nonsteroidal anti-inflammatory drugs,NSAIDs)和镇痛药... 骨性关节炎(osteoarthritis,OA)是临床上常见的慢性退行性关节疾病,其发病率随着年龄的增加逐渐上升,严重影响中老年患者的生活质量。现阶段对于OA的药物治疗如非甾体类抗炎药物(nonsteroidal anti-inflammatory drugs,NSAIDs)和镇痛药,虽能改善OA症状,但不能阻止OA的进展。中药有效成分在治疗OA疾病方面具有独特的优势。本文从中药有效成分抑制炎症相关因子的分泌、改善软骨基质合成及分解代谢失衡、抑制软骨细胞凋亡、促进软骨细胞增殖、调节雌激素水平等方面综述了近五年来国内外期刊报道的中药有效成分防治OA的研究进展,以期为OA的新药研发提供理论依据。 展开更多

关键词 中药 骨性关节炎 作用机制

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基于中药传统功效的现代药效物质基础研究是原创性研究的源泉 被引量：13

2

作者 龚普阳 戚进 余伯阳 《世界科学技术-中医药现代化》 CSCD 2017年第9期1413-1418,共6页

中药的传统功效是在中医理论的指导下,经过长期实践对其临床疗效的高度总结,对中药的临床使用具有重要的指导意义。与现代医药体系相比,中医药体系的诊疗模式与西医不同,且相对于西药,中药作用的疾病靶标可能更加广泛。基于中药的传统功... 中药的传统功效是在中医理论的指导下,经过长期实践对其临床疗效的高度总结,对中药的临床使用具有重要的指导意义。与现代医药体系相比,中医药体系的诊疗模式与西医不同,且相对于西药,中药作用的疾病靶标可能更加广泛。基于中药的传统功效,结合现代科学技术手段,开展对中药的药效物质基础及其作用机制的研究,有助于疾病治疗中新靶点、新机制和新物质的发现及中药新药的二次研发,对于阐释中药传统功效的现代科学内涵具有深远意义。因此,基于中药传统功效的现代药效物质基础研究是中医药原创性研究的源泉。 展开更多

关键词 中药 传统功效 物质基础 新药研发

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两种筛选玄参中清除过氧亚硝基活性成分的在线检测方法比较研究 被引量：3

3

作者 王莹 陈佑华 +1 位作者 戚进 余伯阳 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期560-565,共6页

建立柱后HPLC-DAD-(Luminol-ONOO^-)-CL(方法 1)和柱前ONOO^--HPLC-DAD(方法 2)两种简单、快速在线检测清除ONOO^-的方法,将这两种方法应用于从玄参中筛选具有清除ONOO^-作用的活性物质,并结合HPLC-ESI-Q-TOF MS/MS对主要的活性成分进... 建立柱后HPLC-DAD-(Luminol-ONOO^-)-CL(方法 1)和柱前ONOO^--HPLC-DAD(方法 2)两种简单、快速在线检测清除ONOO^-的方法,将这两种方法应用于从玄参中筛选具有清除ONOO^-作用的活性物质,并结合HPLC-ESI-Q-TOF MS/MS对主要的活性成分进行鉴定。方法 1从玄参中共筛选出了P1(decaffeoylacteoside)、P9(acteoside)、I6(6″-O-feruloylharpagide)、P11(cis-acteoside)、P13(angoroside)等5个具有清除ONOO^-作用的活性成分,方法 2从玄参中筛选出了P9和P13两个具有清除ONOO^-作用的活性成分。两种筛选方法各具特点:方法 1需要的仪器系统较为复杂,操作简单检测灵敏度高;方法 2需要的仪器简单,操作相对方法 1繁琐且灵敏度低。但是筛选结果表明,方法 1和方法 2均可以从复杂体系中快速地筛选出具有清除ONOO^-作用的活性物质,这两种方法可以为中药复杂体系中天然ONOO^-清除剂的快速发现提供技术平台。 展开更多

关键词 过氧亚硝基 化学发光 玄参 在线检测

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卵清蛋白致过敏性腹泻小鼠血清和胃组织中5-羟色胺系统的代谢分析 被引量：1

4

作者 夏振江 徐艳 +6 位作者 韩吉春 何强强 董金金 邹小艳 杜玉枝 尚靖 魏立新 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期320-326,共7页

目的探讨卵清蛋白(OVA)致过敏性腹泻小鼠5-羟色胺(5-HT)信号系统的变化。方法 7~8周龄雌性BALB/c小鼠分为模型组、色甘酸钠处理组和对照组。模型组和色甘酸钠处理组分别在0 d和14 d,腹腔注射OVAⅠ(50μg/只)。28 d后,隔天对小鼠进行口... 目的探讨卵清蛋白(OVA)致过敏性腹泻小鼠5-羟色胺(5-HT)信号系统的变化。方法 7~8周龄雌性BALB/c小鼠分为模型组、色甘酸钠处理组和对照组。模型组和色甘酸钠处理组分别在0 d和14 d,腹腔注射OVAⅠ(50μg/只)。28 d后,隔天对小鼠进行口服灌胃OVAⅡ(50 mg/只)激发(共8次)。色甘酸钠处理组从28 d开始,隔天(口服灌胃激发前)给予色甘酸钠(78.0 mg/kg)(共8次)。OVA口服灌胃后对小鼠进行综合评分、粪便评分及测定体温变化。43 d后,处死动物。摘眼球取血离心取血清并取胃组织。ELISA检测血清OVA特异性Ig E(OVA-SIg E)。液相色谱-质谱联用技术(LC-MS)测定血清中的5-HT及其上下游代谢产物犬尿酸(KYN)、色氨酸(TRP)、5-羟色胺酸(5-HTP)和5-羟基吲哚乙酸(5-HIAA)含量,利用实时定量PCR检测过敏小鼠胃组织5-HT代谢相关基因色氨酸羟化酶1(TPH1)、吲哚胺-2,3-双加氧酶1(IDO1)、单胺氧化酶A(MAO-A)、5-HT选择性再摄取转运体(SERT)及其受体5-羟色胺1A受体(HTR1A)、HTR3A、5-羟色胺4受体(HTR4)的mRNA水平。结果 OVA致敏后,小鼠产生严重的过敏性腹泻,血清中的OVA-SIg E明显升高。血清中的KYN显著上升,5-HT、5-HIAA和5-HTP显著下降。胃组织IDO1及其受体HTR1A、HTR3A的mRNA水平增加,TPH1、MAO-A mRNA水平降低。给予色甘酸钠后综合评分、粪便评分、体温及OVA-SIg E明显降低,并且腹泻率也低于模型组,血清中的5-HIAA及胃组织中MAO-A mRNA水平升高,胃组织IDO1、5-HT1A、5-HT3A mRNA水平降低。结论 OVA致过敏性腹泻小鼠5-HT信号系统激活,给予色甘酸钠后,缓解过敏症状并使5-HT代谢相关产物、代谢基因和受体基因的表达发生改变。 展开更多

关键词 5-羟色胺(5-HT) 卵清蛋白(OVA) 过敏性腹泻 小鼠

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夏天无中生物碱类化学成分的研究 被引量：10

5

作者 黄启龙 张皖晋 +5 位作者 李彦 陈娟 周宝萍 邹筱涵 张春磊 曹征宇 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期563-567,共5页

对夏天无中的生物碱类化学成分进行系统研究。通过硅胶、RP-C_(18)、Sephadex LH-20柱色谱、重结晶、薄层色谱和高效液相色谱等技术,从夏天无块茎95%乙醇提取物中分离得到13个化合物,其结构运用现代波谱技术结合理化性质分别鉴定为:四... 对夏天无中的生物碱类化学成分进行系统研究。通过硅胶、RP-C_(18)、Sephadex LH-20柱色谱、重结晶、薄层色谱和高效液相色谱等技术,从夏天无块茎95%乙醇提取物中分离得到13个化合物,其结构运用现代波谱技术结合理化性质分别鉴定为:四氢巴马亭(1),氧化北美黄连次碱(2),doryanine(3),巴马亭(4),毕枯枯灵(5),四氢小檗碱(6),四氢黄连碱(7),紫堇定(8),epicorynoxidine(9),N-methylcorydaldine(10),(+)-corlumine(11),N-methyl-6,7-dimethoxyisoquinolone(12)和氧化血根碱(13)。其中化合物2、3、6、7、9~13为首次从该植物中分离得到,化合物2、3、9~13为首次从该属植物中分离得到。此外,药理实验表明,四氢巴马亭(1)可能具有镇痛或镇静的作用,毕枯枯灵(5)可能具有诱发癫痫的作用。 展开更多

关键词 夏天无 块茎 化学成分 生物碱 分离鉴定

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木樨草素等抗心肌缺血/再灌注损伤及抑制脂代谢和细胞凋亡作用研究 被引量：22

6

作者 邹小艳 范香成 +1 位作者 田友清 尚靖 《南京中医药大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期380-386,共7页

目的探讨香青兰中木樨草素、山奈酚和木樨草苷对大鼠离体心肌缺血/再灌注损伤(MIRI)模型的保护作用及其抑制脂代谢相关酶11β-羟基类固醇脱氢酶1型(11β-HSD1)、溶血磷脂酸酰基转移酶(LPAATs)和细胞凋亡相关蛋白磷酸酯酶和张力蛋白同系... 目的探讨香青兰中木樨草素、山奈酚和木樨草苷对大鼠离体心肌缺血/再灌注损伤(MIRI)模型的保护作用及其抑制脂代谢相关酶11β-羟基类固醇脱氢酶1型(11β-HSD1)、溶血磷脂酸酰基转移酶(LPAATs)和细胞凋亡相关蛋白磷酸酯酶和张力蛋白同系物(PTEN)、蛋白酪氨酸磷酸酶2(SHIP-2)的作用,探讨中药多成分、多靶点抗MIRI的机制。方法采用Langendorff装置,以洛-林二氏溶液为灌流液,通过停灌和复灌心脏建立MIRI模型,检测心率(HR)、左室舒张末压(LVEDP)、左室发展压(LVDP)、(-dp/dt)/(+dp/dt)、冠脉流量(CF)、乳酸脱氢酶(LDH)、心肌梗死面积。ELISA法测定LPAATβ和11β-HSD1活性。分光光度法测定PTEN和SHIP-2活性。结果木樨草素、山奈酚和木樨草苷保护HR,降低LDH过量释放,升高LVEDP、LVDP和(-dp/dt)/(+dp/dt),恢复CF,降低心肌梗死面积。LPAATβ、11β-HSD1、PTEN、SHP-2等蛋白活性受木樨草素等的抑制。结论木樨草素、山奈酚和木樨草苷具有通过抗脂代谢紊乱和抗细胞凋亡分子机制保护大鼠离体心脏MIRI的作用。 展开更多

关键词 木樨草素 山奈酚 木樨草苷 心肌缺血/再灌注损伤 11β-HSD1 LPAATβ PTEN SHIP-2

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桂枝茯苓胶囊及其成分组合物抗子宫收缩作用及其机制 被引量：3

7

作者 孙兰 周军 +4 位作者 宗绍波 丁岗 王振中 萧伟 寇俊萍 《世界科学技术-中医药现代化》 2016年第2期274-278,共5页

目的:研究桂枝茯苓胶囊及成分组合物(14个成分)对子宫平滑肌收缩抑制作用及其机制。方法:采用前列腺素F_(2α)(Prostaglandin,PGF_(2α))诱导的子宫平滑肌收缩模型,检测PGF_(2α)诱导后的子宫组织p42/44丝裂原激活蛋白激酶(p42/44MAPK)... 目的:研究桂枝茯苓胶囊及成分组合物(14个成分)对子宫平滑肌收缩抑制作用及其机制。方法:采用前列腺素F_(2α)(Prostaglandin,PGF_(2α))诱导的子宫平滑肌收缩模型,检测PGF_(2α)诱导后的子宫组织p42/44丝裂原激活蛋白激酶(p42/44MAPK)磷酸化及间隙连接蛋白43(Cx43)的表达水平,考察其抑制离体子宫平滑肌收缩可能的作用机制。结果:桂枝茯苓胶囊及成分组合物抑制子宫幅值50%浓度(IC_(50))分别为130.40、46.67μg·mL^(-1);桂枝茯苓胶囊及其组合物能抑制PGF_(2α)诱导的子宫组织p42/44MAPK磷酸化和Cx43水平升高。结论:桂枝茯苓胶囊及成分组合物抑制PGF_(2α)诱导的子宫平滑肌收缩作用,其机制可能与降低子宫组织p42/44MAPK磷酸化水平、抑制Cx43蛋白表达增高有关。 展开更多

关键词 桂枝茯苓胶囊 成分 前列腺素F_(2α) 子宫收缩

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动脉血栓相关治疗靶点及新药研究进展 被引量：2

8

作者 李龙 寇俊萍 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期251-258,共8页

动脉血栓(arterial thrombosis,AT)为一种临床常见病及多发病,并可诱发急性心肌梗死、缺血性脑卒中等缺血性心脑血管疾病,具有高致残率和高致死率的特点,严重危害人类健康。AT形成过程中涉及到内皮细胞、白细胞、血小板等多种因素的参... 动脉血栓(arterial thrombosis,AT)为一种临床常见病及多发病,并可诱发急性心肌梗死、缺血性脑卒中等缺血性心脑血管疾病,具有高致残率和高致死率的特点,严重危害人类健康。AT形成过程中涉及到内皮细胞、白细胞、血小板等多种因素的参与。积极寻找AT形成过程中可干预进程的治疗靶点,并根据靶点开发相关治疗药物具有重大的意义。本文就近5年来防治AT形成和抗栓治疗涉及到的相关靶点研究现状,及针对上述靶点研发的抗栓药物进展研究作一综述,以期为研制治疗AT的创新药物提供可能线索和依据。 展开更多

关键词 动脉血栓 动脉粥样硬化 治疗靶点 受体 新药研发

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应激动物模型的研究进展 被引量：4

9

作者 吕文婷 吴华丽 +1 位作者 裴思然 尚靖 《湖北畜牧兽医》 2016年第6期12-14,共3页

应激动物模型已经成为在医学领域中广泛应用手段,尤其在抑郁症等精神疾病当中,应激模型是主要造模手段。目前存在多种抑郁造模方法,且每种造模方法对动物的影响存在差异,有些造模方法不能够完全反映人类抑郁症的发病原因,因此建立一种... 应激动物模型已经成为在医学领域中广泛应用手段,尤其在抑郁症等精神疾病当中,应激模型是主要造模手段。目前存在多种抑郁造模方法,且每种造模方法对动物的影响存在差异,有些造模方法不能够完全反映人类抑郁症的发病原因,因此建立一种合适的应激抑郁模型十分重要。对常用的应激抑郁模型进行了综述。 展开更多

关键词 束缚应激 CUMS 孤养 社交失败

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左旋紫堇达明对神经病理性疼痛大鼠的镇痛作用及机制研究 被引量：7

10

作者 熊枫 颜冰 +2 位作者 戴文玲 余伯阳 刘吉华 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期70-75,共6页

建立坐骨神经慢性压迫损伤诱导的大鼠神经病理性疼痛模型(CCI模型),探讨左旋紫堇达明(levo-corydalmine,l-CDL)对神经病理性疼痛大鼠痛觉敏化和脊髓中枢敏化的影响。Von-frey法检测机械性缩足反射阈值;热痛刺激仪检测热刺激缩足反射潜伏... 建立坐骨神经慢性压迫损伤诱导的大鼠神经病理性疼痛模型(CCI模型),探讨左旋紫堇达明(levo-corydalmine,l-CDL)对神经病理性疼痛大鼠痛觉敏化和脊髓中枢敏化的影响。Von-frey法检测机械性缩足反射阈值;热痛刺激仪检测热刺激缩足反射潜伏期;免疫印迹法检测大鼠脊髓L4-L6段N-甲基-D-天冬氨酸受体NR1亚基磷酸化水平;免疫荧光法检测脊髓背角降钙素基因相关肽(CGRP)蛋白表达以及c-fos阳性神经元数目。结果显示,l-CDL(7.5,15 30 mg/kg,ig)能够剂量依赖性地改善CCI模型大鼠机械超敏和热痛过敏。l-CDL[15 mg/(kg·d),5 d,ig]能显著抑制CCI模型大鼠脊髓CGRP,p-NR1,c-fos的高表达,且不发生镇痛耐受现象。表明l-CDL对CCI模型大鼠神经病理性疼痛具有良好的镇痛作用,其镇痛机制与抑制大鼠脊髓中枢敏化相关。 展开更多

关键词 左旋紫堇达明 神经病理性疼痛 镇痛 中枢敏化

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生脉散对人肠道菌群失衡的调节作用 被引量：26

11

作者 花海莹 李雪晴 刘吉华 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期95-100,共6页

通过建立头孢曲松钠所致人肠道菌群紊乱体外模型,结合菌群的选择性培养、平板计数及短链脂肪酸分析,研究经典名方生脉散对肠道菌群失调的调节作用。研究结果显示,生脉散高中低剂量(16.5,11.2,5.5 mg/m L)组能显著抑制肠杆菌、肠球菌的增... 通过建立头孢曲松钠所致人肠道菌群紊乱体外模型,结合菌群的选择性培养、平板计数及短链脂肪酸分析,研究经典名方生脉散对肠道菌群失调的调节作用。研究结果显示,生脉散高中低剂量(16.5,11.2,5.5 mg/m L)组能显著抑制肠杆菌、肠球菌的增殖,促进肠道益生菌乳酸杆菌、梭菌增殖。与模型组相比,给予中剂量生脉散培养24 h后,肠球菌、肠杆菌增殖分别被抑制了24.9%和19.1%,乳酸杆菌和梭菌的增殖分别提高了22.3%和25.8%。同时生脉散各剂量组均能显著促进肠道菌群产生丙酸和乙酸,抑制潜在致病菌的增殖,促进失衡肠道菌群向正常菌群结构发展。 展开更多

关键词 生脉散 肠道菌群 益生菌 短链脂肪酸

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基于tyrp1a转基因斑马鱼构建色素障碍性疾病药物筛选模型 被引量：5

12

作者 刘力 裴思然 +3 位作者 吴华丽 赵庆顺 彭继先 尚靖 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期740-743,共4页

为了能够有效地筛选治疗色素障碍性疾病药物,建立一种转基因斑马鱼药物筛选模型。采用斑马鱼酪氨酸酶相关蛋白1(tyrosinase-related protein 1a,tyrp1a)基因启动子驱动绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP),构建出tyrp1a转基因... 为了能够有效地筛选治疗色素障碍性疾病药物,建立一种转基因斑马鱼药物筛选模型。采用斑马鱼酪氨酸酶相关蛋白1(tyrosinase-related protein 1a,tyrp1a)基因启动子驱动绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP),构建出tyrp1a转基因斑马鱼,使绿色荧光能够特异性表达在斑马鱼黑素细胞部位。分别给予斑马鱼促进黑素合成的药物N-苯基硫脲(Nphenylthiourea,PTU)和抑制黑素合成的药物黑素细胞刺激素(alpha-melnaocyte stimulating hormone,α-MSH),检测药物对斑马鱼黑素合成和绿色荧光蛋白表达影响。结果显示,PTU可以抑制斑马鱼黑素细胞黑素合成作用,并且降低转基因斑马鱼绿色荧光蛋白表达。α-MSH可以促进斑马鱼黑素细胞黑素合成作用,并促进转基因斑马鱼绿色荧光蛋白表达。本研究成功地建立了一种新的可以用于色素性障碍疾病药物筛选的转基因斑马鱼模型。 展开更多

关键词 斑马鱼 tyrp1a 色素障碍性疾病 药物筛选模型

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大花紫玉盘的化学成分 被引量：8

13

作者 朱倩 黄启龙 +1 位作者 张春磊 曹征宇 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期666-671,共6页

通过正相硅胶、反相硅胶、大孔吸附树脂、Sephadex LH-20和高效液相色谱等多种现代色谱技术对番荔枝科紫玉盘属植物大花紫玉盘(Uvaria grandiflora)干燥根的化学成分进行系统地分离纯化,得到12个化合物,用现代波谱技术确定化合物的结构... 通过正相硅胶、反相硅胶、大孔吸附树脂、Sephadex LH-20和高效液相色谱等多种现代色谱技术对番荔枝科紫玉盘属植物大花紫玉盘(Uvaria grandiflora)干燥根的化学成分进行系统地分离纯化,得到12个化合物,用现代波谱技术确定化合物的结构分别为:epicatechin-(4β→1′,2→O→2′)-phloroglucinol(1),proanthocyanidin A-1(2),proanthocyanidin A-2(3),表儿茶素(epicatechin)(4),phlorizin(5),圣草酚(eriodictyol)(6),erythro-guaiacylglycerol-8-O-4′-(coniferyl alcohol) ether(7),threo-guaiacylglycerol-8-O-4′-(coniferyl alcohol) ether(8),erythro-guaiacylglycerol-8-O-4′-(sinapyl alcohol) ether(9),threo-syringylglycerol-8-O-4′-(sinapyl alcohol) ether(10),burselignan(11),icariol A2(12)。化合物1~12均为首次从该植物中分离得到,其中化合物1为新天然化合物。 展开更多

关键词 大花紫玉盘 化学成分 黄烷醇 木脂素 分离 鉴定

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β-榄香烯对血管内皮细胞功能紊乱和血管平滑肌细胞异常增殖的影响 被引量：2

14

作者 段兰兰 董菁 +4 位作者 范香成 朱俊艺 张逸凡 韩吉春 尚靖 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期333-339,共7页

研究β-榄香烯是否能改善低剪切力(LSS)诱导的血管内皮细胞功能紊乱和氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的血管平滑肌细胞增殖和迁移。分别采用平行板流动腔和ox-LDL建立血管内皮细胞(ECs)功能紊乱模型和血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖和迁移... 研究β-榄香烯是否能改善低剪切力(LSS)诱导的血管内皮细胞功能紊乱和氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的血管平滑肌细胞增殖和迁移。分别采用平行板流动腔和ox-LDL建立血管内皮细胞(ECs)功能紊乱模型和血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖和迁移模型,并检测β-榄香烯对ECs功能紊乱和VSMCs增殖迁移的影响。DHE法检测ECs中ROS的活性,DAF-FM DA法检测ECs中NO的活性。Western blot法检测ECs中Akt和ERK的蛋白磷酸化水平。MTT法检测VSMCs的增殖。细胞划痕实验和Transwell实验检测VSMCs的迁移。RT-qPCR法检测VSMCs中MMP-2和MMP-9的基因表达。在ECs中,β-榄香烯可以显著降低LSS诱导的ROS的升高,显著升高LSS诱导的NO的降低,并且降低ERK的磷酸化,并升高Akt的磷酸化。在VSMCs中,β-榄香烯可以显著降低ox-LDL诱导的VSMCs的增殖和迁移,降低MMP-2和MMP-9的基因表达。β-榄香烯可以改善LSS诱导的ECs功能紊乱和ox-LDL诱导的VSMCs增殖和迁移。 展开更多

关键词 Β-榄香烯 血管内皮细胞功能紊乱 血管平滑肌细胞 增殖 迁移

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小檗碱桥酶高效原核表达及生物合成l-SLR的研究

15

作者 梅欢 李玥 +1 位作者 刘可蒙 刘吉华 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期277-287,共11页

左旋金黄紫堇碱(l-Scoulerine,l-SLR)是苄基异喹啉类生物碱(benzylisoquinoline alkaloids,BIAs)的关键中间体,由小檗碱桥酶(berberine bridge enzyme,BBE)催化左旋网状番荔枝碱(l-Reticuline,l-RL)合成。基于前期首次实现加州罂粟小檗... 左旋金黄紫堇碱(l-Scoulerine,l-SLR)是苄基异喹啉类生物碱(benzylisoquinoline alkaloids,BIAs)的关键中间体,由小檗碱桥酶(berberine bridge enzyme,BBE)催化左旋网状番荔枝碱(l-Reticuline,l-RL)合成。基于前期首次实现加州罂粟小檗碱桥酶(Eschscholzia californcia berberine bridge enzyme,EcBBE,EcBO)的原核表达,通过更换原核表达载体及共表达分子伴侣,构建高效表达EcBO的大肠杆菌工程菌株,实现l-RL向l-SLR的高效转化。结果表明,EcBO与分子伴侣pGro7共表达的工程菌株A的酶活力达到194.14 U/L,较原始酶活力提高了9.22倍。进一步对菌株A生物合成l-SLR的培养条件进行优化,在TB培养基中,当异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)浓度为0.04 mmol/L,L-阿拉伯糖浓度为4 mg/mL,16℃下诱导18 h,0.2 mg/mL l-RL,37℃转化18 h,l-SLR产量为144.19 mg/L,较初始菌株提高4.72倍。综上,通过在原核系统中共表达分子伴侣pGro7与EcBO实现了EcBO高活性表达,显著提高了l-SLR的生物合成效率,为高效生物合成l-SLR及其他BIAs类生物碱提供了新的策略。 展开更多

关键词 小檗碱桥酶 左旋金黄紫堇碱 生物转化 分子伴侣 原核表达

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