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尿酸酶产生菌的筛选、基因克隆及表达 被引量:10
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作者 刘广桢 陈建华 王旻 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期464-467,共4页
目的:构建表达尿酸酶的重组基因工程菌,提高尿酸酶的表达量。方法:从12株酵母菌中筛选得到1株产尿酸酶的产朊假丝酵母Cu2357菌株,应用DNA重组技术,将野生菌尿酸酶基因克隆到表达载体pKA中,获得重组尿酸酶基因工程菌E.colipKU/JM109。结... 目的:构建表达尿酸酶的重组基因工程菌,提高尿酸酶的表达量。方法:从12株酵母菌中筛选得到1株产尿酸酶的产朊假丝酵母Cu2357菌株,应用DNA重组技术,将野生菌尿酸酶基因克隆到表达载体pKA中,获得重组尿酸酶基因工程菌E.colipKU/JM109。结果:构建的表达载体中的目的基因序列正确。经SDS-PAGE检测表明,表达的蛋白质相对分子质量约为34 kDa,含量占细胞可溶性蛋白的49%。优化培养条件后,发酵液尿酸酶活力可达16 U/mL,是野生菌产尿酸酶量的240多倍。结论:尿酸酶基因在E.colipKU/JM109中实现了高效表达。 展开更多
关键词 尿酸酶 E.COLI pKU/JM109 克隆 表达
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E·coli L-天冬酰胺酶B细胞抗原表位氨基酸残基Lys^(196)对其抗原性的影响 被引量:1
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作者 陈建华 徐欣 +4 位作者 吴梧桐 姚萍 刘广桢 张艳丽 王进 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期277-280,共4页
目的:研究重组E.coli L-天冬酰胺酶B细胞抗原表位中关键氨基酸残基对其抗原性的影响。方法:以Ala为替代残基,对抗原表位192TPARKHTS199中Lys196进行PCR定点突变,双向免疫扩散法和间接ELISA法分析新型重组E.coli L-天冬酰胺酶的抗原性。... 目的:研究重组E.coli L-天冬酰胺酶B细胞抗原表位中关键氨基酸残基对其抗原性的影响。方法:以Ala为替代残基,对抗原表位192TPARKHTS199中Lys196进行PCR定点突变,双向免疫扩散法和间接ELISA法分析新型重组E.coli L-天冬酰胺酶的抗原性。结果:采用双向免疫扩散法和间接ELISA法检测,与重组E.coli L-天冬酰胺酶相比,新型重组E.coliL-天冬酰胺酶与重组E.coli L-天冬酰胺酶抗体结合率下降64%。结论:通过对重组E.coli L-天冬酰胺酶B细胞抗原表位关键残基的定点突变有效地降低了其抗原性。 展开更多
关键词 重组E.coli L-天冬酰胺酶 定点突变 抗原表位 间接ELISA法
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静息细胞转化制备6-脱氧-6-氨基(N-羟乙基)-α-L-呋喃山梨糖的研究 被引量:5
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作者 顾亚云 陈建华 《化学与生物工程》 CAS 2013年第7期47-50,共4页
以N-羟乙基葡萄糖胺为底物,采用氧化葡萄糖酸杆菌静息细胞转化制备6-脱氧-6-氨基(N-羟乙基)-α-L-呋喃山梨糖,考察了生物转化条件(温度、pH值、摇床转速、细胞浓度、底物浓度、金属离子、转化时间等)对转化反应的影响,并通过单因素实验... 以N-羟乙基葡萄糖胺为底物,采用氧化葡萄糖酸杆菌静息细胞转化制备6-脱氧-6-氨基(N-羟乙基)-α-L-呋喃山梨糖,考察了生物转化条件(温度、pH值、摇床转速、细胞浓度、底物浓度、金属离子、转化时间等)对转化反应的影响,并通过单因素实验和正交实验,确定摇瓶转化的最优条件如下:反应温度为25℃,pH值为6.0,摇床转速为200r·min-1,细胞浓度为60g·L-1,底物浓度为60g·L-1,转化时间为48h,在此条件下目标产物的产率为87.5%。研究还发现在转化液中添加Mg2+对转化具有促进作用。 展开更多
关键词 氧化葡萄糖酸杆菌 静息细胞 生物转化
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赤藓糖醇产生菌诱变育种新途径 被引量:1
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作者 贾丰彬 陈建华 《化学与生物工程》 CAS 2011年第5期59-62,共4页
以产甘油的耐高渗酵母CF4为出发菌株,经过紫外诱变处理,得到几株产赤藓糖醇的变异株,其中UV3-CF4-5摇瓶发酵产量最高,约25.68 g·L-1,通过摇瓶发酵实验研究了菌株UV3-CF4-5的遗传稳定性。结果表明,经过多次传代,菌株UV3-CF4-5产赤... 以产甘油的耐高渗酵母CF4为出发菌株,经过紫外诱变处理,得到几株产赤藓糖醇的变异株,其中UV3-CF4-5摇瓶发酵产量最高,约25.68 g·L-1,通过摇瓶发酵实验研究了菌株UV3-CF4-5的遗传稳定性。结果表明,经过多次传代,菌株UV3-CF4-5产赤藓糖醇的能力没有改变,表明其是稳定的变异株。 展开更多
关键词 甘油 耐高渗酵母 赤藓糖醇 紫外诱变
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