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噬菌体对结核病模型豚鼠免疫功能的影响 被引量:5
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作者 彭丽 罗永艾 +3 位作者 陈保文 黎友伦 沈小兵 王国治 《医药导报》 CAS 2006年第8期767-770,共4页
目的观察噬菌体D29对结核病模型豚鼠体液免疫功能与细胞免疫功能的影响。方法采用皮下攻击法建立敏感和耐药结核分枝杆菌感染的结核病豚鼠模型,分别将感染敏感菌和耐药菌的豚鼠随机分为对照组、噬菌体组、利福平(RFP)组和联合化疗组... 目的观察噬菌体D29对结核病模型豚鼠体液免疫功能与细胞免疫功能的影响。方法采用皮下攻击法建立敏感和耐药结核分枝杆菌感染的结核病豚鼠模型,分别将感染敏感菌和耐药菌的豚鼠随机分为对照组、噬菌体组、利福平(RFP)组和联合化疗组。对照组给予0.9%氯化钠溶液隔日灌胃;RFP组给予RFP溶液隔日灌胃,每次给药剂量为15mg·kg^-1,每周3次;联合化疗组采用RFP+乙胺丁醇+吡嗪酰胺+左氧氟沙星隔日灌胃,4种药物的剂量分别为15,25,25,6mg·kg^-1,每周3次;噬菌体组采用滴鼻的方式隔日给予噬菌体,每次1×10^8PFU(0.5mL),每周3次。均共治疗4~7周。观察治疗期间豚鼠血清中噬菌体中和抗体的动态变化,以及实验开始4周后豚鼠血清中白细胞介素.2(IL-2)、IL-4、γ干扰素(IFN-γ)的变化,并在电镜下观察巨噬细胞对噬菌体的吞噬情况。结果结核病模型豚鼠采用噬菌体治疗18d后,血清中均开始出现噬菌体中和抗体,抗体滴度与时间呈正相关。电镜观察发现巨噬细胞可以吞噬、消化部分噬菌体。敏感结核分枝杆菌感染模型采用利福平或噬菌体治疗4周后,血清中IL-2含量高于对照组;耐药结核分枝杆菌感染模型中RFP组、噬菌体组和联合化疗组的IL-2含量均高于对照组,其中噬菌体组血清IL-2含量最高,与对照组比较,差异有显著性(P〈0.05)。各组IL-4、IFN-γ均差异无显著性。结论噬菌体具有抗原的特性,可刺激机体产生中和抗体,同时可改善机体的细胞免疫功能,协同噬菌体杀灭机体内的结核分枝杆菌。 展开更多
关键词 噬菌体 结核分枝杆菌 豚鼠 免疫功能
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结核分枝杆菌噬菌体试剂盒的研制与初步评价 被引量:6
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作者 彭丽 沈小兵 +1 位作者 罗永艾 王国治 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期389-392,共4页
目的:研制能快速检测标本中结核分枝杆菌的噬菌体试剂盒,并对之在临床上的应用做出初步评价。方法:采用不同方法对噬菌体的生产和保存工艺进行探讨,并且观察该方法中所用试剂的稳定性。建立噬菌体快速检测结核分枝杆菌的方法,分别用噬... 目的:研制能快速检测标本中结核分枝杆菌的噬菌体试剂盒,并对之在临床上的应用做出初步评价。方法:采用不同方法对噬菌体的生产和保存工艺进行探讨,并且观察该方法中所用试剂的稳定性。建立噬菌体快速检测结核分枝杆菌的方法,分别用噬菌体法与传统培养法检测34份临床标本中的结核分枝杆菌,以培养法作为金标准观察噬菌体法的敏感度、特异度和符合率。结果:①在37℃环境中采用琼脂双层法进行噬菌体扩增生产,48h后采用孵育-过滤法收集,可以获得较为理想的产量且简单易行。②噬菌体以液体形式4℃保存或以噬菌体宿主菌的无细胞菌苗作为保护剂进行真空冻干后4℃保存,28周后效价下降不足10的一个数量级。③噬菌体法中的重要试剂:辅助细菌和杀病毒剂,4℃保存40周均具有良好的稳定性。④34份痰标本培养4周,其中2份污染,29份阳性,3份阴性;噬菌体法检测标本中结核分枝杆菌的敏感度、特异度和符合率分别为86.2%(25/29)、66.7%(2/3)、84.4%(27/32)。结论:噬菌体法在48h内可以快速检测标本中的结核分枝杆菌活菌,并且具有以试剂盒形式进行商业化生产的可行性,将有助于临床结核病的快速诊断。 展开更多
关键词 噬菌体 分枝杆菌 结核 诊断
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斑点免疫金渗滤法检测抗荚膜组织胞浆菌抗体的研究 被引量:2
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作者 王璞 陈保文 +1 位作者 徐苗 王国治 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第20期1979-1981,共3页
目的研究快速检测荚膜组织胞浆菌抗体的方法。方法荚膜组织胞浆菌素纯蛋白衍生物(P-HTPM)为包被抗原,以葡萄球菌A蛋白(SPA)标记的免疫胶体金为检测标记物,采用斑点免疫金渗滤试验(DIGFA)检测荚膜组织胞浆菌(HC)免疫小鼠血清中抗HC抗体... 目的研究快速检测荚膜组织胞浆菌抗体的方法。方法荚膜组织胞浆菌素纯蛋白衍生物(P-HTPM)为包被抗原,以葡萄球菌A蛋白(SPA)标记的免疫胶体金为检测标记物,采用斑点免疫金渗滤试验(DIGFA)检测荚膜组织胞浆菌(HC)免疫小鼠血清中抗HC抗体以及其他真菌免疫血清中抗体。结果DIGFA检测20份HC小鼠免疫血清,结果全为阳性,与ELISA检测结果一致,敏感性为100%。检测8份正常小鼠血清出现1份假阳性,特异性为87.5%。检测其他真菌免疫血清结果为:念珠菌属和马尔尼菲青霉菌免疫血清结果全为阴性;8份皮炎芽生菌血清出现1份阳性,9份副球孢子菌血清出现2份阳性。结论斑点免疫金渗滤法检测抗HC抗体有较高的敏感性和特异性,快速简便。经临床标本扩大验证后将对荚膜组织胞浆菌病的快速诊断有应用价值。 展开更多
关键词 荚膜组织胞浆菌 斑点免疫金渗滤法 荚膜组织胞浆菌抗体
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结核分枝杆菌CFP10的基因克隆及表达 被引量:2
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作者 周丽蓉 徐敬华 +1 位作者 罗永艾 王国治 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期703-705,共3页
目的克隆结核分枝杆菌CFP10基因,在大肠杆菌中进行表达,为进一步研究其在结核病诊断中的价值奠定基础。方法以结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA为模板,通过PCR方法对CFP10的基因进行扩增,以PET-30a(+)为载体构建重组质粒,将重组质粒先转化入... 目的克隆结核分枝杆菌CFP10基因,在大肠杆菌中进行表达,为进一步研究其在结核病诊断中的价值奠定基础。方法以结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA为模板,通过PCR方法对CFP10的基因进行扩增,以PET-30a(+)为载体构建重组质粒,将重组质粒先转化入大肠杆菌DH5α中,抽提质粒,进行双酶切鉴定,再转化到表达宿主菌BL21(DE3)中,以IPTG诱导表达,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析蛋白表达形式。结果构建了具有正确基因序列的CFP10重组表达质粒,重组蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中以包涵体形式表达。结论目的基因克隆入宿主菌中并表达成功,为深入研究该蛋白的生物学、免疫学活性奠定了基础。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 CFP10 基因克隆
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结核分枝杆菌脂多糖的提取及其检测血清结核抗体的研究 被引量:3
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作者 周丽蓉 罗永艾 王国治 《中国防痨杂志》 CAS 2007年第3期235-237,共3页
目的提取结核分枝杆菌(MTB)脂多糖抗原,检测结核血清参考品,评价其在血清学诊断中的价值。方法将MTB菌体冰浴超声破碎,用酚/氯仿、氯仿/甲醇抽提除去蛋白和脂质,再用DNase I酶和RNase酶作用除去DNA和RNA,得到初步纯化的脂多糖即LPS-1,LP... 目的提取结核分枝杆菌(MTB)脂多糖抗原,检测结核血清参考品,评价其在血清学诊断中的价值。方法将MTB菌体冰浴超声破碎,用酚/氯仿、氯仿/甲醇抽提除去蛋白和脂质,再用DNase I酶和RNase酶作用除去DNA和RNA,得到初步纯化的脂多糖即LPS-1,LPS-1在去污剂Triton-X114作用后,分成含有阿拉伯甘露糖(AM)的水相即LPS-2和含有脂阿拉伯甘露糖(LAM)和脂甘露糖(LM)的有机相即LPS-3,以三种多糖作为抗原,通过ELISA方法检测结核阳性和阴性血清参考品。结果LPS-1对结核血清参考品检测的敏感性为71.7%,特异性为96%,LPS-3的敏感性为43.9%(18/41),而特异性达到100%。结论脂多糖抗原检测血清结核抗体显示出较强的特异性,可望成为结核病血清学的诊断组合抗原之一。 展开更多
关键词 分枝杆菌 结核 脂多糖 抗原
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培养温度对冻干分枝杆菌菌种复苏的影响 被引量:1
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作者 闫李侠 居军 +2 位作者 陈保文 刘裕田 王国治 《中国防痨杂志》 CAS 2008年第3期248-250,共3页
关键词 分枝杆菌 菌种 培养温度 冻干
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