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结核分枝杆菌H37Rv两种抗原Ag85b、HspX的制备及其与佐剂的联合应用
被引量：
4
1
作者
陈磊
徐苗
+7 位作者
都伟欣
陈保文
王志玉
王雅君
董娜
苏城
沈小兵
王国治
《中国医学科学院学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第4期403-409,共7页
目的用分子生物学方法制备H37Rv的两种抗原Ag85b、HspX,通过与铝佐剂和CpG佐剂联用免疫小鼠进行初步药理学实验以观察其生物学活性。方法常规方法分别构建重组表达质粒pET30a-Ag85b和pET30a-HspX,内切酶鉴定目的片段后两种质粒分别转化B...
目的用分子生物学方法制备H37Rv的两种抗原Ag85b、HspX,通过与铝佐剂和CpG佐剂联用免疫小鼠进行初步药理学实验以观察其生物学活性。方法常规方法分别构建重组表达质粒pET30a-Ag85b和pET30a-HspX,内切酶鉴定目的片段后两种质粒分别转化BL-21大肠杆菌,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导后分别产生两种蛋白;用阴离子交换柱Source30、QHP以及疏水层析柱对两种蛋白进行纯化;蛋白测序进行鉴定。纯化后的两种蛋白分别与铝佐剂和CpG佐剂联用(Ag85b,Ag85b+Al,Ag85b+CpG,Ag85b+Al+CpG;HspX,HspX+Al,HspX+CpG,HspX+Al+CpG),免疫C57/BL小鼠,同时设置生理盐水对照组,取脾细胞进行酶联免疫斑点实验(ELISPOT)检测干扰素-γ(IFN-γ)的分泌;同时进行淋巴细胞增殖实验检测脾淋巴细胞经体外刺激后的增殖情况。结果成功构建了两种重组表达质粒pET30a-Ag85b和pET30a-HspX,成功诱导表达了两种蛋白;经过纯化,两种蛋白纯度均达到95%;经鉴定两种蛋白纯化产物的N端15个氨基酸序列与目的序列相同;Ag85b+CpG、Ag85b+Al和Ag85b+CpG+Al组经Ag85b(80μg/ml)体外刺激后分泌IFN-γ显著升高,与生理盐水组比较差异具有显著性(P<0.05);HspX+CpG+Al组经HspX(80μg/ml)体外刺激后分泌IFN-γ显著升高,与生理盐水组比较差异具有显著性(P<0.05)。结论成功表达并纯化了结核分枝杆菌H37Rv的两种抗原Ag85b和HspX,与铝佐剂和CpG佐剂联用后成功刺激小鼠产生了细胞免疫反应,证实了两种重组蛋白的生物学活性,为下一步药效学评估奠定了基础。
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关键词
结核分枝杆菌
重组蛋白质
佐剂
AG85B
HSPX
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职称材料
耻垢分枝杆菌疫苗对小鼠巨噬细胞产生一氧化氮的影响
被引量：
3
2
作者
徐苗
陈保文
+2 位作者
沈小兵
苏城
王国治
《中国医学科学院学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第4期410-412,共3页
目的探讨耻垢分枝杆菌疫苗对小鼠腹腔巨噬细胞产生一氧化氮的影响。方法将Balb/c小鼠随机分成生理盐水对照组和耻垢分枝杆菌疫苗低、中、高剂量组,分别注射生理盐水和不同剂量的耻垢分枝杆菌疫苗。取小鼠腹腔巨噬细胞体外培养,化学显色...
目的探讨耻垢分枝杆菌疫苗对小鼠腹腔巨噬细胞产生一氧化氮的影响。方法将Balb/c小鼠随机分成生理盐水对照组和耻垢分枝杆菌疫苗低、中、高剂量组,分别注射生理盐水和不同剂量的耻垢分枝杆菌疫苗。取小鼠腹腔巨噬细胞体外培养,化学显色法测定培养上清中一氧化氮的含量。结果生理盐水对照组和耻垢分枝杆菌疫苗低、中、高剂量组产生的一氧化氮分别为(3.50±3.11)、(16.63±6.47)、(13.97±6.20)和(7.55±2.26)ng/ml,不同剂量疫苗免疫小鼠产生的一氧化氮水平均显著高于对照组(P<0.01)。结论耻垢分枝杆菌疫苗可促进小鼠巨噬细胞产生一氧化氮。
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关键词
耻垢分枝杆菌
疫苗
一氧化氮
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职称材料
题名
结核分枝杆菌H37Rv两种抗原Ag85b、HspX的制备及其与佐剂的联合应用
被引量：
4
1
作者
陈磊
徐苗
都伟欣
陈保文
王志玉
王雅君
董娜
苏城
沈小兵
王国治
机构
山东大学公共卫生学院病毒学研究
室
中国药品生物制品检定所细菌一室
中国
医学科学院北京协和医学院实验动物研究所
出处
《中国医学科学院学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第4期403-409,共7页
基金
国家高技术研究发展计划项目(863项目)(2006AA02Z464)~~
文摘
目的用分子生物学方法制备H37Rv的两种抗原Ag85b、HspX,通过与铝佐剂和CpG佐剂联用免疫小鼠进行初步药理学实验以观察其生物学活性。方法常规方法分别构建重组表达质粒pET30a-Ag85b和pET30a-HspX,内切酶鉴定目的片段后两种质粒分别转化BL-21大肠杆菌,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导后分别产生两种蛋白;用阴离子交换柱Source30、QHP以及疏水层析柱对两种蛋白进行纯化;蛋白测序进行鉴定。纯化后的两种蛋白分别与铝佐剂和CpG佐剂联用(Ag85b,Ag85b+Al,Ag85b+CpG,Ag85b+Al+CpG;HspX,HspX+Al,HspX+CpG,HspX+Al+CpG),免疫C57/BL小鼠,同时设置生理盐水对照组,取脾细胞进行酶联免疫斑点实验(ELISPOT)检测干扰素-γ(IFN-γ)的分泌;同时进行淋巴细胞增殖实验检测脾淋巴细胞经体外刺激后的增殖情况。结果成功构建了两种重组表达质粒pET30a-Ag85b和pET30a-HspX,成功诱导表达了两种蛋白;经过纯化,两种蛋白纯度均达到95%;经鉴定两种蛋白纯化产物的N端15个氨基酸序列与目的序列相同;Ag85b+CpG、Ag85b+Al和Ag85b+CpG+Al组经Ag85b(80μg/ml)体外刺激后分泌IFN-γ显著升高,与生理盐水组比较差异具有显著性(P<0.05);HspX+CpG+Al组经HspX(80μg/ml)体外刺激后分泌IFN-γ显著升高,与生理盐水组比较差异具有显著性(P<0.05)。结论成功表达并纯化了结核分枝杆菌H37Rv的两种抗原Ag85b和HspX,与铝佐剂和CpG佐剂联用后成功刺激小鼠产生了细胞免疫反应,证实了两种重组蛋白的生物学活性,为下一步药效学评估奠定了基础。
关键词
结核分枝杆菌
重组蛋白质
佐剂
AG85B
HSPX
Keywords
Mycobacterium tuberculosis
recombinant protein
adjuvant
Ag85b
HspX
分类号
R378.911 [医药卫生—病原生物学]
R392.11 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
耻垢分枝杆菌疫苗对小鼠巨噬细胞产生一氧化氮的影响
被引量：
3
2
作者
徐苗
陈保文
沈小兵
苏城
王国治
机构
中国药品生物制品检定所细菌一室
出处
《中国医学科学院学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第4期410-412,共3页
基金
国家高技术研究发展计划项目(863项目)(2005AA2Z3F71)~~
文摘
目的探讨耻垢分枝杆菌疫苗对小鼠腹腔巨噬细胞产生一氧化氮的影响。方法将Balb/c小鼠随机分成生理盐水对照组和耻垢分枝杆菌疫苗低、中、高剂量组,分别注射生理盐水和不同剂量的耻垢分枝杆菌疫苗。取小鼠腹腔巨噬细胞体外培养,化学显色法测定培养上清中一氧化氮的含量。结果生理盐水对照组和耻垢分枝杆菌疫苗低、中、高剂量组产生的一氧化氮分别为(3.50±3.11)、(16.63±6.47)、(13.97±6.20)和(7.55±2.26)ng/ml,不同剂量疫苗免疫小鼠产生的一氧化氮水平均显著高于对照组(P<0.01)。结论耻垢分枝杆菌疫苗可促进小鼠巨噬细胞产生一氧化氮。
关键词
耻垢分枝杆菌
疫苗
一氧化氮
Keywords
Mycobacterium smegmatis
vaccine
nitric oxide
分类号
R378.91 [医药卫生—病原生物学]
R183.3 [医药卫生—流行病学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
结核分枝杆菌H37Rv两种抗原Ag85b、HspX的制备及其与佐剂的联合应用
陈磊
徐苗
都伟欣
陈保文
王志玉
王雅君
董娜
苏城
沈小兵
王国治
《中国医学科学院学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009
4
在线阅读
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职称材料
2
耻垢分枝杆菌疫苗对小鼠巨噬细胞产生一氧化氮的影响
徐苗
陈保文
沈小兵
苏城
王国治
《中国医学科学院学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009
3
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