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车前草花叶病毒衣壳蛋白的原核表达和多克隆抗体制备
被引量：
6
1
作者
苏学思
张玉宝
+3 位作者
王若愚
王亚军
唐国亮
金卫杰
《浙江农业学报》
CSCD
北大核心
2021年第1期104-111,共8页
为制备车前草花叶病毒(Plantago asiatica mosaic virus,PlAMV)衣壳蛋白(capsid protein,CP)及其多克隆抗体,采用RT-PCR方法从甘肃省种植的切花百合上克隆了PlAMV cp基因的部分序列,连接表达载体pET-28a(+),转化Escherichia coli BL21(D...
为制备车前草花叶病毒(Plantago asiatica mosaic virus,PlAMV)衣壳蛋白(capsid protein,CP)及其多克隆抗体,采用RT-PCR方法从甘肃省种植的切花百合上克隆了PlAMV cp基因的部分序列,连接表达载体pET-28a(+),转化Escherichia coli BL21(DE3)菌株,经IPTG诱导和Ni-NTA重力柱层析获得了大量纯化的CP融合蛋白,将其作为抗原免疫家兔制备了多克隆抗体。序列分析结果表明,PlAMV cp基因片段大小为621 bp,编码207个氨基酸;与已注册的PlAMV分离物相比,核苷酸序列相似性为74.7%~100%,氨基酸序列相似性达到83.6%~100%;不同植物PlAMV的分离物序列差异明显,病毒种群分布呈现寄主差异。SDS-PAGE结果表明,CP蛋白在E.coli BL21(DE3)中大量表达,蛋白相对分子质量为24 ku。Western blot结果显示,抗体能够特异结合天然PlAMV病毒蛋白,可用于检测感病材料中PlAMV蛋白的表达量。本研究可以为PlAMV的血清学检测技术开发和致病机理研究提供一定的参考。
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关键词
百合
车前草花叶病毒
衣壳蛋白
原核表达
多克隆抗体
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职称材料
魔芋花叶病毒衣壳蛋白的原核表达和多克隆抗体制备
被引量：
3
2
作者
唐国亮
张玉宝
+4 位作者
王若愚
王亚军
赵霞
苏学思
金卫杰
《浙江农业学报》
CSCD
北大核心
2022年第11期2471-2481,共11页
采用小RNA测序技术对甘肃省榆中县疑似感染病毒病的当归[(Angelica sinensis(Oliv.)Diels]样品进行测序鉴定,发现样品中含有魔芋花叶病毒(Konjac mosaic virus,KoMV),通过反转录PCR(RT-PCR)扩增KoMV衣壳蛋白(capsid protein,CP)的cp基因...
采用小RNA测序技术对甘肃省榆中县疑似感染病毒病的当归[(Angelica sinensis(Oliv.)Diels]样品进行测序鉴定,发现样品中含有魔芋花叶病毒(Konjac mosaic virus,KoMV),通过反转录PCR(RT-PCR)扩增KoMV衣壳蛋白(capsid protein,CP)的cp基因,克隆的KoMV cp基因连接原核表达载体pET-28a(+),导入E.coli Rosetta ^(TM)(DE3)诱导表达蛋白,在Ni-NTA重力柱层析作用下纯化CP融合蛋白,并以此作为抗原免疫新西兰大耳白兔制备多克隆抗体。序列分析表明:KoMV cp基因片段大小为840 bp,编码280个氨基酸的外壳蛋白;与GenBank已注册同源性较高的KoMV分离物相比,核苷酸序列相似性为85.58%~99.41%,氨基酸序列相似性为89.32%~99.29%;KoMV的病毒种群分布存在明显的区域性和寄主差异。SDS-PAGE显示,不同温度诱导下KoMV CP融合蛋白在E.coli Rosetta ^(TM)(DE3)中均以包涵体的形式大量表达,融合蛋白分子量为36 ku。间接ELISA和Western blot检测结果显示,制备的多克隆抗体效价达到32000,能够与感染KoMV的当归叶片和纯化蛋白特异性结合,具有良好的特异性。本研究成功制备了当归KoMV CP融合蛋白的多克隆抗体IgG,为开发KoMV的血清学检测技术及CP蛋白的功能研究奠定了基础。
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关键词
当归
魔芋花叶病毒
外壳蛋白
原核表达
多克隆抗体
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职称材料
题名
车前草花叶病毒衣壳蛋白的原核表达和多克隆抗体制备
被引量：
6
1
作者
苏学思
张玉宝
王若愚
王亚军
唐国亮
金卫杰
机构
中国科学院西北生态环境资源研究院皋兰生态与农业综合试验站
中国科学院
大学
出处
《浙江农业学报》
CSCD
北大核心
2021年第1期104-111,共8页
基金
陇原青年创新创业人才(团队)项目(2020-339)
兰州市人才创新创业项目(2019-HLJC-9)
兰州市城关区科技计划(2019-6-2)。
文摘
为制备车前草花叶病毒(Plantago asiatica mosaic virus,PlAMV)衣壳蛋白(capsid protein,CP)及其多克隆抗体,采用RT-PCR方法从甘肃省种植的切花百合上克隆了PlAMV cp基因的部分序列,连接表达载体pET-28a(+),转化Escherichia coli BL21(DE3)菌株,经IPTG诱导和Ni-NTA重力柱层析获得了大量纯化的CP融合蛋白,将其作为抗原免疫家兔制备了多克隆抗体。序列分析结果表明,PlAMV cp基因片段大小为621 bp,编码207个氨基酸;与已注册的PlAMV分离物相比,核苷酸序列相似性为74.7%~100%,氨基酸序列相似性达到83.6%~100%;不同植物PlAMV的分离物序列差异明显,病毒种群分布呈现寄主差异。SDS-PAGE结果表明,CP蛋白在E.coli BL21(DE3)中大量表达,蛋白相对分子质量为24 ku。Western blot结果显示,抗体能够特异结合天然PlAMV病毒蛋白,可用于检测感病材料中PlAMV蛋白的表达量。本研究可以为PlAMV的血清学检测技术开发和致病机理研究提供一定的参考。
关键词
百合
车前草花叶病毒
衣壳蛋白
原核表达
多克隆抗体
Keywords
lily
Plantago asiatica mosaic virus
capsid protein
prokaryotic expression
polyclonal antibody
分类号
S432.41 [农业科学—植物病理学]
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
魔芋花叶病毒衣壳蛋白的原核表达和多克隆抗体制备
被引量：
3
2
作者
唐国亮
张玉宝
王若愚
王亚军
赵霞
苏学思
金卫杰
机构
中国科学院西北生态环境资源研究院皋兰生态与农业综合试验站
甘肃省
生态
农业
综合
试验
野外
科学
观测
研究
站
中国科学院
大学
出处
《浙江农业学报》
CSCD
北大核心
2022年第11期2471-2481,共11页
基金
国家重点研发计划(2018YFE0127200)
甘肃省知识产权计划(20ZSCQ033)
+1 种基金
国防科工局核能开发项目(E19005040)
兰州市人才创新创业项目(2019-HLJC-9)。
文摘
采用小RNA测序技术对甘肃省榆中县疑似感染病毒病的当归[(Angelica sinensis(Oliv.)Diels]样品进行测序鉴定,发现样品中含有魔芋花叶病毒(Konjac mosaic virus,KoMV),通过反转录PCR(RT-PCR)扩增KoMV衣壳蛋白(capsid protein,CP)的cp基因,克隆的KoMV cp基因连接原核表达载体pET-28a(+),导入E.coli Rosetta ^(TM)(DE3)诱导表达蛋白,在Ni-NTA重力柱层析作用下纯化CP融合蛋白,并以此作为抗原免疫新西兰大耳白兔制备多克隆抗体。序列分析表明:KoMV cp基因片段大小为840 bp,编码280个氨基酸的外壳蛋白;与GenBank已注册同源性较高的KoMV分离物相比,核苷酸序列相似性为85.58%~99.41%,氨基酸序列相似性为89.32%~99.29%;KoMV的病毒种群分布存在明显的区域性和寄主差异。SDS-PAGE显示,不同温度诱导下KoMV CP融合蛋白在E.coli Rosetta ^(TM)(DE3)中均以包涵体的形式大量表达,融合蛋白分子量为36 ku。间接ELISA和Western blot检测结果显示,制备的多克隆抗体效价达到32000,能够与感染KoMV的当归叶片和纯化蛋白特异性结合,具有良好的特异性。本研究成功制备了当归KoMV CP融合蛋白的多克隆抗体IgG,为开发KoMV的血清学检测技术及CP蛋白的功能研究奠定了基础。
关键词
当归
魔芋花叶病毒
外壳蛋白
原核表达
多克隆抗体
Keywords
Angelica sinensis
Konjac mosaic virus
capsid protein
prokaryotic expression
polyclonal antibody
分类号
S435.67 [农业科学—农业昆虫与害虫防治]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
车前草花叶病毒衣壳蛋白的原核表达和多克隆抗体制备
苏学思
张玉宝
王若愚
王亚军
唐国亮
金卫杰
《浙江农业学报》
CSCD
北大核心
2021
6
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职称材料
2
魔芋花叶病毒衣壳蛋白的原核表达和多克隆抗体制备
唐国亮
张玉宝
王若愚
王亚军
赵霞
苏学思
金卫杰
《浙江农业学报》
CSCD
北大核心
2022
3
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