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广西眼镜蛇蛇毒神经生长因子在大肠杆菌中的表达
被引量：
4
1
作者
宋慧
张学荣
+2 位作者
周元聪
江涛
舒雨雁
《中国药理学与毒理学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第4期265-270,共6页
目的采用基因工程技术,在大肠杆菌(E.coli)中表达广西眼镜蛇(黑眼镜蛇)蛇毒神经生长因子(NGF)成熟蛋白并检测其生物活性。方法将天然广西眼镜蛇蛇毒的NGF蛋白基因克隆至融合表达载体pET-40b(+)中,以C端融合了6个组氨酸的形式在E.coli BL...
目的采用基因工程技术,在大肠杆菌(E.coli)中表达广西眼镜蛇(黑眼镜蛇)蛇毒神经生长因子(NGF)成熟蛋白并检测其生物活性。方法将天然广西眼镜蛇蛇毒的NGF蛋白基因克隆至融合表达载体pET-40b(+)中,以C端融合了6个组氨酸的形式在E.coli BL21(DE3)通过异丙基硫代半乳糖苷诱导表达NGF蛋白。超声破菌后,将上清液经Ni^(2+)-NTA柱纯化,收集并冻干NGF融合蛋白,用蛋白印迹法分析其NGF抗原活性,并通过促PC12细胞生长法观察其生物活性。结果经蛋白印迹分析可知在38 ku处的条带具有NGF抗原活性。加入天然蛇毒NGF,生长轴突的PC12细胞为(83±3)%,重组品为(21±3)%,表明经纯化的融合蛋白具有NGF生物活力,但活性弱于天然蛇毒NGF。结论在大肠杆菌中可以表达出有活性的蛇毒NGF蛋白。
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关键词
眼镜蛇
蛇毒
神经生长因子
蛋白表达
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职称材料
ABC-ELISA检测尿Ⅳ型胶原方法的建立及其对早期糖尿病肾病的诊断价值
被引量：
1
2
作者
谭燕
杨永年
+2 位作者
陆志强
卫军
张祖传
《复旦学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2001年第6期494-497,508,共5页
目的 建立一种新的检测尿Ⅳ型胶原 (ⅣC)的ABC ELISA系统 ,评价尿ⅣC对早期糖尿病肾病 (DN)的特异性诊断价值。方法 应用制备的抗ⅣC抗体成功地建立了ABC ELISA ,该系统能直接从尿液中检测到ⅣC。在临床试验中 ,对 12 0例 2型糖尿病 (...
目的 建立一种新的检测尿Ⅳ型胶原 (ⅣC)的ABC ELISA系统 ,评价尿ⅣC对早期糖尿病肾病 (DN)的特异性诊断价值。方法 应用制备的抗ⅣC抗体成功地建立了ABC ELISA ,该系统能直接从尿液中检测到ⅣC。在临床试验中 ,对 12 0例 2型糖尿病 (DM )病人及多组对照同时进行 2 4h尿ⅣC(UCER)和白蛋白 (UAER)的测定。结果 在 0 .5～ 5 0 0ng/ml浓度范围内 ,建立尿ⅣC测定的标准曲线。在 1～ 12 5ng/ml之间 ,尿ⅣC浓度与A值呈显著正相关 (r =0 .84 ,P <0 .0 4 )。该ELISA系统的敏感性达 0 .5ng/ml,与其他蛋白质的交叉反应性 <1%。与正常对照组、原发性肾小球肾炎组、原发性高血压组及冠心病组相比 ,UCER在DM病人中显著升高 ,尤其是在UAER 2 0 0～ 30 0mg/ 2 4h亚组更加明显 (P <0 .0 1)。在DM病人中 ,UCER与Ccr呈显著负相关(r=- 0 .4 1,P <0 .0 0 1)。结论 我们成功地建立了直接检测尿ⅣC的ABC ELISA系统并发现 。
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关键词
尿
Ⅳ型胶原
微量白蛋白尿
糖尿病肾病
诊断
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职称材料
题名
广西眼镜蛇蛇毒神经生长因子在大肠杆菌中的表达
被引量：
4
1
作者
宋慧
张学荣
周元聪
江涛
舒雨雁
机构
广西医科大学化学教研室
广西医科大学蛇毒
研究所
中国科学院
上海
生化与
细胞
研究所
中国科学院
生物物理
研究所
出处
《中国药理学与毒理学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第4期265-270,共6页
基金
国家自然科学基金(30270304)
广西省科学基金(桂科青0542043)
广西省科学基金(9811039)~~
文摘
目的采用基因工程技术,在大肠杆菌(E.coli)中表达广西眼镜蛇(黑眼镜蛇)蛇毒神经生长因子(NGF)成熟蛋白并检测其生物活性。方法将天然广西眼镜蛇蛇毒的NGF蛋白基因克隆至融合表达载体pET-40b(+)中,以C端融合了6个组氨酸的形式在E.coli BL21(DE3)通过异丙基硫代半乳糖苷诱导表达NGF蛋白。超声破菌后,将上清液经Ni^(2+)-NTA柱纯化,收集并冻干NGF融合蛋白,用蛋白印迹法分析其NGF抗原活性,并通过促PC12细胞生长法观察其生物活性。结果经蛋白印迹分析可知在38 ku处的条带具有NGF抗原活性。加入天然蛇毒NGF,生长轴突的PC12细胞为(83±3)%,重组品为(21±3)%,表明经纯化的融合蛋白具有NGF生物活力,但活性弱于天然蛇毒NGF。结论在大肠杆菌中可以表达出有活性的蛇毒NGF蛋白。
关键词
眼镜蛇
蛇毒
神经生长因子
蛋白表达
Keywords
Naja naja atra
cobra venom
nerve growth factor
protein expression
分类号
R99 [医药卫生—毒理学]
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职称材料
题名
ABC-ELISA检测尿Ⅳ型胶原方法的建立及其对早期糖尿病肾病的诊断价值
被引量：
1
2
作者
谭燕
杨永年
陆志强
卫军
张祖传
机构
复旦大学附属中山医院内分泌科
中国科学院生化与细胞研究所
出处
《复旦学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2001年第6期494-497,508,共5页
基金
95’国家科技攻关资助项目(95 90 6 0 5 0 3 )
文摘
目的 建立一种新的检测尿Ⅳ型胶原 (ⅣC)的ABC ELISA系统 ,评价尿ⅣC对早期糖尿病肾病 (DN)的特异性诊断价值。方法 应用制备的抗ⅣC抗体成功地建立了ABC ELISA ,该系统能直接从尿液中检测到ⅣC。在临床试验中 ,对 12 0例 2型糖尿病 (DM )病人及多组对照同时进行 2 4h尿ⅣC(UCER)和白蛋白 (UAER)的测定。结果 在 0 .5～ 5 0 0ng/ml浓度范围内 ,建立尿ⅣC测定的标准曲线。在 1～ 12 5ng/ml之间 ,尿ⅣC浓度与A值呈显著正相关 (r =0 .84 ,P <0 .0 4 )。该ELISA系统的敏感性达 0 .5ng/ml,与其他蛋白质的交叉反应性 <1%。与正常对照组、原发性肾小球肾炎组、原发性高血压组及冠心病组相比 ,UCER在DM病人中显著升高 ,尤其是在UAER 2 0 0～ 30 0mg/ 2 4h亚组更加明显 (P <0 .0 1)。在DM病人中 ,UCER与Ccr呈显著负相关(r=- 0 .4 1,P <0 .0 0 1)。结论 我们成功地建立了直接检测尿ⅣC的ABC ELISA系统并发现 。
关键词
尿
Ⅳ型胶原
微量白蛋白尿
糖尿病肾病
诊断
Keywords
urinary type Ⅳ collagen
microalbuminuria
diabetic nephropathy
分类号
R587.2 [医药卫生—内分泌]
R692 [医药卫生—泌尿科学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
广西眼镜蛇蛇毒神经生长因子在大肠杆菌中的表达
宋慧
张学荣
周元聪
江涛
舒雨雁
《中国药理学与毒理学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2007
4
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职称材料
2
ABC-ELISA检测尿Ⅳ型胶原方法的建立及其对早期糖尿病肾病的诊断价值
谭燕
杨永年
陆志强
卫军
张祖传
《复旦学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2001
1
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