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H5N1亚型禽流感病毒NA基因在Sf9昆虫细胞中的表达
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作者 张晓东 陶玲 +1 位作者 王汉中 格日勒图 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2009年第7期28-32,共5页
【目的】在Sf9昆虫细胞中表达H5N1亚型禽流感病毒（Avian influenza virus,AIV）神经氨酸酶（NA）基因。【方法】用PCR方法克隆H5N1亚型AIVNA基因,定点插入到转移载体pFastBacHTb中,构建重组转移载体pFastBacHTb-NA。将其转化到含有AcBa... 【目的】在Sf9昆虫细胞中表达H5N1亚型禽流感病毒（Avian influenza virus,AIV）神经氨酸酶（NA）基因。【方法】用PCR方法克隆H5N1亚型AIVNA基因,定点插入到转移载体pFastBacHTb中,构建重组转移载体pFastBacHTb-NA。将其转化到含有AcBacmid和helper质粒的E.coliDH10B感受态细胞中,与AcBacmid重组,获得rAcBacmid-NA。提取重组的Bacmid,转染处于对数生长期的昆虫Sf9细胞,获得重组杆状病毒vAc-NA。将vAc-NA重新感染处于对数生长期的昆虫Sf9细胞,3-5 d后收集被感染细胞。取转染细胞、感染细胞、破碎感染细胞上清和破碎感染细胞沉淀进行SDS-PAGE和Western-blotting分析。【结果】通过PCR成功地克隆了1 352 bp的H5N1亚型AIV不含信号肽序列的NA基因;pFastBacHTb-NA和rAcBacmid-NA构建成功。AIVNA基因在昆虫Sf9细胞内得到有效表达,表达产物分子质量约为52 ku,且具有免疫原性。【结论】H5N1亚型AIVNA基因在昆虫Sf9细胞中表达成功。 展开更多
关键词 H5N1亚型禽流感病毒 神经氨酸酶 杆状病毒载体 真核表达
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