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人转铁蛋白基因的克隆及序列分析
被引量:
7
1
作者
王峰
黄璐圆
《暨南大学学报(自然科学与医学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第2期111-114,119,共5页
目的:克隆人转铁蛋白基因并对其编码序列进行分析。方法:以人胎肝cDNA为模板,利用PCR方法克隆人转铁蛋白基因;通过与基因组序列对比分析基因组结构;通过TargetP 1.1和S ignalP 3.0预测信号肽;通过C lustal X(1.81)进行蛋白序列联配。结...
目的:克隆人转铁蛋白基因并对其编码序列进行分析。方法:以人胎肝cDNA为模板,利用PCR方法克隆人转铁蛋白基因;通过与基因组序列对比分析基因组结构;通过TargetP 1.1和S ignalP 3.0预测信号肽;通过C lustal X(1.81)进行蛋白序列联配。结果:PCR扩增了一个长2 160 bp的基因片断,序列分析表明其覆盖了完整编码框,编码由698个氨基酸组成的人转铁蛋白。进一步分析发现人转铁蛋白基因有19个外显子和18个内含子,编码人转铁蛋白N端具有19个氨基酸组成的信号肽序列。人转铁蛋白与猩猩、猴子、兔子和老鼠的转铁蛋白氨基酸相似率分别为94%、91%、78%、73%。生物信息分析表明,人转铁蛋白含有高度保守的参与蛋白二硫键形成的半胱氨酸以及铁离子结合位点,有两个序列较同源的结构域。结论:成功克隆人转铁蛋白基因,人转铁蛋白与其它物种转铁蛋白同源。
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关键词
转铁蛋白
序列分析
基因组结构
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职称材料
双元Ti载体的发展
被引量:
4
2
作者
王峰
黄璐圆
《西北植物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第11期2397-2401,共5页
双元Ti载体是目前植物基因工程中最重要的植物转化载体。近年来双元Ti载体得到迅速的发展,新的载体不断出现。新发展的双元Ti载体结构优化,适用范围广,易于基因克隆操作,同时提高了植物转化的效率,更便于进行植物基因功能的研究。本文...
双元Ti载体是目前植物基因工程中最重要的植物转化载体。近年来双元Ti载体得到迅速的发展,新的载体不断出现。新发展的双元Ti载体结构优化,适用范围广,易于基因克隆操作,同时提高了植物转化的效率,更便于进行植物基因功能的研究。本文介绍了构建高容量载体、多基因载体、定点整合载体所采用的新策略。
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关键词
双元载体
根癌农杆菌
TI质粒
植物转化
植物基因工程
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职称材料
小鼠锰超氧化物歧化酶在大肠杆菌中的表达和纯化
被引量:
2
3
作者
王峰
黄璐圆
《华南农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第3期85-89,共5页
为构建小鼠锰超氧化物歧化酶(SOD)的原核表达载体,在大肠杆菌中进行蛋白表达、纯化和功能检测,以小鼠肝脏cDNA为模板,利用PCR方法克隆小鼠锰SOD基因,PCR扩增了1个长600bp左右的基因片段,该片段编码由198个氨基酸组成的成熟的小鼠锰SOD蛋...
为构建小鼠锰超氧化物歧化酶(SOD)的原核表达载体,在大肠杆菌中进行蛋白表达、纯化和功能检测,以小鼠肝脏cDNA为模板,利用PCR方法克隆小鼠锰SOD基因,PCR扩增了1个长600bp左右的基因片段,该片段编码由198个氨基酸组成的成熟的小鼠锰SOD蛋白.将其插入pET15b载体中,经测序鉴定正确后,将重组质粒转化大肠杆菌Rosetta-gami.含有pET15b-mMn-SOD质粒的工程菌经过IPTG诱导能表达出相对分子质量约25000的目的蛋白,超声破碎菌体,经Ni-NTA纯化后得到纯度约为95%的重组mMn-SOD蛋白.SOD活性检测表明经过诱导表达的mMn-SOD比活力为531.7U/mg.
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关键词
锰超氧化物歧化酶
表达
纯化
SOD活性
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职称材料
人锰超氧化物歧化酶基因剪接异构体的表达分析
4
作者
王峰
黄璐圆
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第3期164-167,172,共5页
对人锰超氧化物歧化酶(human manganese superoxide dismutase,hMn-SOD)基因剪接异构体进行分析,并检测异构体的表达情况。在GenBank库中检索人锰超氧化物歧化酶基因异构体及编码基因组序列,利用Vector NTI9生物软件进行核酸及蛋白序列...
对人锰超氧化物歧化酶(human manganese superoxide dismutase,hMn-SOD)基因剪接异构体进行分析,并检测异构体的表达情况。在GenBank库中检索人锰超氧化物歧化酶基因异构体及编码基因组序列,利用Vector NTI9生物软件进行核酸及蛋白序列比对;利用RT-PCR方法分析锰超氧化物歧化酶基因异构体的表达。结果显示,在GenBank库检索发现有3种人锰超氧化物歧化酶基因异构体,剪接异构的类型为可变的5′剪接位点和外显子盒,各异构体基因内含子均符合"GT-AG"规则。3种基因异构体编码两种异构体蛋白,即222个氨基酸的人锰超氧化物歧化酶蛋白以及中部缺少39个氨基酸的截短型异构蛋白。RT-PCR检测结果表明,剪接异构体hMn-SODb在HEK293T和HSC细胞中的表达比在HepG2细胞中高,未见异构体hMn-SODc的表达。
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关键词
锰超氧化物歧化酶
剪接异构
表达
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职称材料
题名
人转铁蛋白基因的克隆及序列分析
被引量:
7
1
作者
王峰
黄璐圆
机构
暨南大学药
学院
基因组药物
研究
所
中国科学院广州生物医药与健康研究院分子医学中心
出处
《暨南大学学报(自然科学与医学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第2期111-114,119,共5页
基金
广东省自然科学基金(06300563)
广东省医学科学技术研究基金(A2006356)
暨南大学引进人才科研启动项目资助(51205083)
文摘
目的:克隆人转铁蛋白基因并对其编码序列进行分析。方法:以人胎肝cDNA为模板,利用PCR方法克隆人转铁蛋白基因;通过与基因组序列对比分析基因组结构;通过TargetP 1.1和S ignalP 3.0预测信号肽;通过C lustal X(1.81)进行蛋白序列联配。结果:PCR扩增了一个长2 160 bp的基因片断,序列分析表明其覆盖了完整编码框,编码由698个氨基酸组成的人转铁蛋白。进一步分析发现人转铁蛋白基因有19个外显子和18个内含子,编码人转铁蛋白N端具有19个氨基酸组成的信号肽序列。人转铁蛋白与猩猩、猴子、兔子和老鼠的转铁蛋白氨基酸相似率分别为94%、91%、78%、73%。生物信息分析表明,人转铁蛋白含有高度保守的参与蛋白二硫键形成的半胱氨酸以及铁离子结合位点,有两个序列较同源的结构域。结论:成功克隆人转铁蛋白基因,人转铁蛋白与其它物种转铁蛋白同源。
关键词
转铁蛋白
序列分析
基因组结构
Keywords
transferrin
sequence analysis
genomic structure
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
双元Ti载体的发展
被引量:
4
2
作者
王峰
黄璐圆
机构
暨南大学药
学院
中国科学院广州生物医药与健康研究院分子医学中心
出处
《西北植物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第11期2397-2401,共5页
基金
暨南大学引进人才科研启动项目资助(51205083)
文摘
双元Ti载体是目前植物基因工程中最重要的植物转化载体。近年来双元Ti载体得到迅速的发展,新的载体不断出现。新发展的双元Ti载体结构优化,适用范围广,易于基因克隆操作,同时提高了植物转化的效率,更便于进行植物基因功能的研究。本文介绍了构建高容量载体、多基因载体、定点整合载体所采用的新策略。
关键词
双元载体
根癌农杆菌
TI质粒
植物转化
植物基因工程
Keywords
binary vector
Agrobacterium tumefaciens
Ti plasmid
plant transformation
plant genetic engineering
分类号
Q782 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
小鼠锰超氧化物歧化酶在大肠杆菌中的表达和纯化
被引量:
2
3
作者
王峰
黄璐圆
机构
暨南大学药
学院
暨南大学中药药效物质基础及创新药物
研究
广东省高校重点实验室
中国科学院广州生物医药与健康研究院分子医学中心
出处
《华南农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第3期85-89,共5页
基金
广东省医学科学技术研究基金(B2008095)
国家自然科学基金(30700704)
暨南大学211项目资助
文摘
为构建小鼠锰超氧化物歧化酶(SOD)的原核表达载体,在大肠杆菌中进行蛋白表达、纯化和功能检测,以小鼠肝脏cDNA为模板,利用PCR方法克隆小鼠锰SOD基因,PCR扩增了1个长600bp左右的基因片段,该片段编码由198个氨基酸组成的成熟的小鼠锰SOD蛋白.将其插入pET15b载体中,经测序鉴定正确后,将重组质粒转化大肠杆菌Rosetta-gami.含有pET15b-mMn-SOD质粒的工程菌经过IPTG诱导能表达出相对分子质量约25000的目的蛋白,超声破碎菌体,经Ni-NTA纯化后得到纯度约为95%的重组mMn-SOD蛋白.SOD活性检测表明经过诱导表达的mMn-SOD比活力为531.7U/mg.
关键词
锰超氧化物歧化酶
表达
纯化
SOD活性
Keywords
manganese superoxide dismutase
expression
purification
SOD activity
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
人锰超氧化物歧化酶基因剪接异构体的表达分析
4
作者
王峰
黄璐圆
机构
暨南大学药
学院
暨南大学中药药效物质基础及创新药物
研究
广东省高校重点实验室
中国科学院广州生物医药与健康研究院分子医学中心
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第3期164-167,172,共5页
基金
广东省医学科学技术研究基金项目(B2008095)
国家自然科学基金项目(30700704)
暨南大学211项目
文摘
对人锰超氧化物歧化酶(human manganese superoxide dismutase,hMn-SOD)基因剪接异构体进行分析,并检测异构体的表达情况。在GenBank库中检索人锰超氧化物歧化酶基因异构体及编码基因组序列,利用Vector NTI9生物软件进行核酸及蛋白序列比对;利用RT-PCR方法分析锰超氧化物歧化酶基因异构体的表达。结果显示,在GenBank库检索发现有3种人锰超氧化物歧化酶基因异构体,剪接异构的类型为可变的5′剪接位点和外显子盒,各异构体基因内含子均符合"GT-AG"规则。3种基因异构体编码两种异构体蛋白,即222个氨基酸的人锰超氧化物歧化酶蛋白以及中部缺少39个氨基酸的截短型异构蛋白。RT-PCR检测结果表明,剪接异构体hMn-SODb在HEK293T和HSC细胞中的表达比在HepG2细胞中高,未见异构体hMn-SODc的表达。
关键词
锰超氧化物歧化酶
剪接异构
表达
Keywords
Manganese superoxide dismutase Alternative splicing Expression
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人转铁蛋白基因的克隆及序列分析
王峰
黄璐圆
《暨南大学学报(自然科学与医学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2007
7
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
双元Ti载体的发展
王峰
黄璐圆
《西北植物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006
4
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
小鼠锰超氧化物歧化酶在大肠杆菌中的表达和纯化
王峰
黄璐圆
《华南农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
4
人锰超氧化物歧化酶基因剪接异构体的表达分析
王峰
黄璐圆
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2010
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