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酿酒酵母中苯丙氨酸合成黄芩素的途径构建与优化
1
作者
王舜
王鉴
+5 位作者
汪方奕
于潇洁
江会峰
何如怡
田宇
刘志国
《中国酿造》
北大核心
2025年第4期112-119,共8页
为了利用合成生物学技术高效制备黄芩素,该研究以合成白杨素的酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)合成底盘细胞Ch-9为基础构建黄芩素合成途径,将来自拟南芥的辅酶A连接酶(4CL)突变体4AT及同工酶CLL-7基因,整合到产生肉桂酸脱羧酶的基因...
为了利用合成生物学技术高效制备黄芩素,该研究以合成白杨素的酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)合成底盘细胞Ch-9为基础构建黄芩素合成途径,将来自拟南芥的辅酶A连接酶(4CL)突变体4AT及同工酶CLL-7基因,整合到产生肉桂酸脱羧酶的基因PAD1位点,通过同源重组实现基因置换敲除,菌株BA-C2-1摇瓶发酵白杨素产量为40.21 mg/L。将来自苹果的烯脂酰还原酶基因MdECR整合替换至酿酒酵母中DBR基因位点,强化表达乙酰辅酶A合成酶的基因ACS来增强乙酰辅酶A的供应。结果表明,重组酵母菌株BA-C3-4摇瓶发酵白杨素产量为70.25 mg/L,比改造前的底盘细胞Ch-9提高7.2倍;在通过强化表达ACS基因,增强乙酰辅酶A后,菌株BA-C4-22摇瓶发酵白杨素产量为125.04 mg/L,对比未强化表达ACS基因的实验组提高了1.78倍;将BA-C4-22菌株整合SbaiCYP82D4基因以及ATR2基因,使合成终点延伸到黄芩素,其中菌株BA-B1-5发酵液黄芩素的产量为70.94 mg/L。
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关键词
白杨素
黄芩素
酿酒酵母改造
异源合成
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职称材料
谷氨酸棒杆菌中胞嘧啶碱基编辑工具的PAM拓展
2
作者
刘佳慧
刘叶
+1 位作者
花尔并
王猛
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第9期49-57,共9页
碱基编辑是一种新兴的基因组编辑技术,具有不产生双键断裂、不依赖同源重组且不需要添加外源模板的优势,在真核及原核生物中得到了广泛的开发与应用。为了进一步扩展碱基编辑技术在谷氨酸棒杆菌中的基因组覆盖范围,本研究将3种PAM限制...
碱基编辑是一种新兴的基因组编辑技术,具有不产生双键断裂、不依赖同源重组且不需要添加外源模板的优势,在真核及原核生物中得到了广泛的开发与应用。为了进一步扩展碱基编辑技术在谷氨酸棒杆菌中的基因组覆盖范围,本研究将3种PAM限制较为宽松的新型Cas9突变体应用于胞嘧啶碱基编辑工具中,分别为近乎PAMless的SpRY突变体(NRN>NYN PAM)、SpG突变体(NGN PAM),以及ScCas9^(++)蛋白(NNG PAM),实现对碱基编辑工具的PAM拓展。结合SpRY突变体的碱基编辑系统展示出了更宽松的PAM识别,除对CAT、CAC、TAA PAM的位点完全没有编辑外,对其他NRN种类的PAM位点均出现了不同程度的识别,但整体编辑效率低,难以推广应用;结合SpG突变体的碱基编辑系统可实现对所有NGN种类PAM位点的编辑,且编辑效率优于SpRY突变体,但对NGG PAM位点的编辑,相比原始Cas9蛋白,编辑效率下降9.3%-55.9%;结合ScCas9^(++)蛋白的碱基编辑系统,除对TCG、CTG PAM的基因组位点没有编辑外,可实现对其他测试NNG PAM的基因组位点编辑,大部分位点基因组编辑效率均较高,最高可达100%。本研究的开展不仅有助于碱基编辑工具在谷氨酸棒杆菌中覆盖更多的基因组位点,同时也为其他基于CRISPR/Cas系统的基因组编辑工具的PAM拓展提供有力的参考。
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关键词
胞嘧啶碱基编辑
谷氨酸棒杆菌
PAM拓展
CRISPR/Cas系统
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职称材料
题名
酿酒酵母中苯丙氨酸合成黄芩素的途径构建与优化
1
作者
王舜
王鉴
汪方奕
于潇洁
江会峰
何如怡
田宇
刘志国
机构
武汉轻工大学
生物
制药与工程
学院
中国科学院天津生物工业技术研究所
出处
《中国酿造》
北大核心
2025年第4期112-119,共8页
基金
天津市重大科技攻关项目(TSBICIP-KJGG-010)。
文摘
为了利用合成生物学技术高效制备黄芩素,该研究以合成白杨素的酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)合成底盘细胞Ch-9为基础构建黄芩素合成途径,将来自拟南芥的辅酶A连接酶(4CL)突变体4AT及同工酶CLL-7基因,整合到产生肉桂酸脱羧酶的基因PAD1位点,通过同源重组实现基因置换敲除,菌株BA-C2-1摇瓶发酵白杨素产量为40.21 mg/L。将来自苹果的烯脂酰还原酶基因MdECR整合替换至酿酒酵母中DBR基因位点,强化表达乙酰辅酶A合成酶的基因ACS来增强乙酰辅酶A的供应。结果表明,重组酵母菌株BA-C3-4摇瓶发酵白杨素产量为70.25 mg/L,比改造前的底盘细胞Ch-9提高7.2倍;在通过强化表达ACS基因,增强乙酰辅酶A后,菌株BA-C4-22摇瓶发酵白杨素产量为125.04 mg/L,对比未强化表达ACS基因的实验组提高了1.78倍;将BA-C4-22菌株整合SbaiCYP82D4基因以及ATR2基因,使合成终点延伸到黄芩素,其中菌株BA-B1-5发酵液黄芩素的产量为70.94 mg/L。
关键词
白杨素
黄芩素
酿酒酵母改造
异源合成
Keywords
chrysin
baicalein
Saccharomyces cerevisiae modification
heterologous synthesis
分类号
TS261.1 [轻工技术与工程—发酵工程]
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职称材料
题名
谷氨酸棒杆菌中胞嘧啶碱基编辑工具的PAM拓展
2
作者
刘佳慧
刘叶
花尔并
王猛
机构
天津
科技大学
生物
工程
学院
中国科学院天津生物工业技术研究所
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第9期49-57,共9页
基金
国家重点研发计划(2018YFA0902902,2021YFC2100201)
国家自然科学基金项目(31970063)。
文摘
碱基编辑是一种新兴的基因组编辑技术,具有不产生双键断裂、不依赖同源重组且不需要添加外源模板的优势,在真核及原核生物中得到了广泛的开发与应用。为了进一步扩展碱基编辑技术在谷氨酸棒杆菌中的基因组覆盖范围,本研究将3种PAM限制较为宽松的新型Cas9突变体应用于胞嘧啶碱基编辑工具中,分别为近乎PAMless的SpRY突变体(NRN>NYN PAM)、SpG突变体(NGN PAM),以及ScCas9^(++)蛋白(NNG PAM),实现对碱基编辑工具的PAM拓展。结合SpRY突变体的碱基编辑系统展示出了更宽松的PAM识别,除对CAT、CAC、TAA PAM的位点完全没有编辑外,对其他NRN种类的PAM位点均出现了不同程度的识别,但整体编辑效率低,难以推广应用;结合SpG突变体的碱基编辑系统可实现对所有NGN种类PAM位点的编辑,且编辑效率优于SpRY突变体,但对NGG PAM位点的编辑,相比原始Cas9蛋白,编辑效率下降9.3%-55.9%;结合ScCas9^(++)蛋白的碱基编辑系统,除对TCG、CTG PAM的基因组位点没有编辑外,可实现对其他测试NNG PAM的基因组位点编辑,大部分位点基因组编辑效率均较高,最高可达100%。本研究的开展不仅有助于碱基编辑工具在谷氨酸棒杆菌中覆盖更多的基因组位点,同时也为其他基于CRISPR/Cas系统的基因组编辑工具的PAM拓展提供有力的参考。
关键词
胞嘧啶碱基编辑
谷氨酸棒杆菌
PAM拓展
CRISPR/Cas系统
Keywords
cytosine base editing
Corynebacterium glutamicum
PAM extension
CRISPR/Cas
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
酿酒酵母中苯丙氨酸合成黄芩素的途径构建与优化
王舜
王鉴
汪方奕
于潇洁
江会峰
何如怡
田宇
刘志国
《中国酿造》
北大核心
2025
0
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职称材料
2
谷氨酸棒杆菌中胞嘧啶碱基编辑工具的PAM拓展
刘佳慧
刘叶
花尔并
王猛
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2023
0
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