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植物选择标记基因hpt在大肠杆菌中的融合表达、纯化及活性测定
被引量：
5
1
作者
杨丽琛
常团结
+3 位作者
蔡华雅
陈宛新
杨晓光
朱祯
《高技术通讯》
EI
CAS
CSCD
2003年第6期30-36,共7页
为对hpt基因编码蛋白进行的安全性评价,建立一种简便、高效的体外微生物表达体系,以获得大量的HPT蛋白,将用于植物转化的hpt基因的全编码序列克隆到原核表达载体pGEX4T-3上,在E.coli BL21中进行诱导表达,所得融合蛋白主要以包涵体的形...
为对hpt基因编码蛋白进行的安全性评价,建立一种简便、高效的体外微生物表达体系,以获得大量的HPT蛋白,将用于植物转化的hpt基因的全编码序列克隆到原核表达载体pGEX4T-3上,在E.coli BL21中进行诱导表达,所得融合蛋白主要以包涵体的形式存在,且与Glutathione Sephrose 4B纯化介质的结合率不高。后经优化诱导表达的各种条件,成功地获得了可溶性的融合蛋白,该蛋白具有明显的生物活性。经Glutathione Sephrose 4B亲和层析,所得蛋白纯度>95％。动物实验显示,融合蛋白还具有良好的免疫原性,免疫家兔后可诱导产生高滴度的抗体(>1:10000)。ELISA及Western blotting检测进一步证实了所获纯化蛋白及其抗体的特性。这为深入进行HPT蛋白的安全性评价打下了良好的基础。
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关键词
植物选择标记基因
大肠杆菌
融合表达
纯化
生物活性
HPT蛋白
包涵体
可溶性
免疫原性
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职称材料
题名
植物选择标记基因hpt在大肠杆菌中的融合表达、纯化及活性测定
被引量：
5
1
作者
杨丽琛
常团结
蔡华雅
陈宛新
杨晓光
朱祯
机构
中国
科学院遗传
研究所
植物遗传分子操作开放
实验室
中国疾病预防控制中心营养与食品安全研究所卫生部微量元素营养重点实验室
出处
《高技术通讯》
EI
CAS
CSCD
2003年第6期30-36,共7页
基金
863计划(2001AA212041
2001AA212291 2002AA212041)
+1 种基金
973计划(2001CB109001
2001AA2 12041)资助项目。
文摘
为对hpt基因编码蛋白进行的安全性评价,建立一种简便、高效的体外微生物表达体系,以获得大量的HPT蛋白,将用于植物转化的hpt基因的全编码序列克隆到原核表达载体pGEX4T-3上,在E.coli BL21中进行诱导表达,所得融合蛋白主要以包涵体的形式存在,且与Glutathione Sephrose 4B纯化介质的结合率不高。后经优化诱导表达的各种条件,成功地获得了可溶性的融合蛋白,该蛋白具有明显的生物活性。经Glutathione Sephrose 4B亲和层析,所得蛋白纯度>95％。动物实验显示,融合蛋白还具有良好的免疫原性,免疫家兔后可诱导产生高滴度的抗体(>1:10000)。ELISA及Western blotting检测进一步证实了所获纯化蛋白及其抗体的特性。这为深入进行HPT蛋白的安全性评价打下了良好的基础。
关键词
植物选择标记基因
大肠杆菌
融合表达
纯化
生物活性
HPT蛋白
包涵体
可溶性
免疫原性
Keywords
hpt,Safety assessment,Fusion expression, Inclusion body,Soluble expression, Activity assay
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
植物选择标记基因hpt在大肠杆菌中的融合表达、纯化及活性测定
杨丽琛
常团结
蔡华雅
陈宛新
杨晓光
朱祯
《高技术通讯》
EI
CAS
CSCD
2003
5
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