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SARS冠状病毒感染恒河猴的病毒、血清学检测研究
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作者 魏强 王健伟 +12 位作者 张扬清 鲍琳琳 涂新明 蒋虹 高红 丛喆 朱华 邓巍 佟巍 张兵林 黄澜 刘亚莉 秦川 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2005年第S1期37-38,共2页
[目的]对感染SARS-CoV的恒河猴进行病毒、血清学等指标检测及研究,确定模型动物成功感染,并为SARS发病机制,疫苗评价,药物筛选确定参考指标。[方法]SARSCo-V经鼻腔接种8只恒河猴,在感染的第1天开始到5、7、10、15、20、30和60天分别安... [目的]对感染SARS-CoV的恒河猴进行病毒、血清学等指标检测及研究,确定模型动物成功感染,并为SARS发病机制,疫苗评价,药物筛选确定参考指标。[方法]SARSCo-V经鼻腔接种8只恒河猴,在感染的第1天开始到5、7、10、15、20、30和60天分别安乐死时,不同时间取咽拭子、血液和脏器,进行病毒分离,RT-PCR检测和抗体测定。[结果]用巢式RT-PCR在感染后每天提取的咽拭子标本中检测SARS-CoV的RNA,以细胞培养冠状病毒为阳性对照,以正常恒河猴咽拭子为阴性对照,在8只动物病毒接种第5天开始可检测到大小为797bp的目的条带,阳性检出最长可持续到第15天。进一步用病毒分离实验对PCR结果进行确证,8只动物中的5只恒河猴接种5天的咽拭子标本中,经Vero细胞培养,细胞产生了典型细胞病变(CPE),提示SARS冠状病毒能感染恒河猴并有病毒的复制和排毒。IFA方法证实为SRAS-CoV抗原存在。SARS-CoV感染恒河猴后,可以检测出免疫反应。在SARS冠状病毒接种前和接种后第5、8、11、15、19、23、26、30、34、每隔4-7天以及安乐死时采血,制备血清测定抗体,8只恒河猴接种病毒前均血清中SARS冠状病毒特异性抗体IgG为阴性,10天后安乐处死的5只感染猴在11-15天开始,至安乐死时,均为阳性。IgG阳性的5只恒河猴均有一定的中和抗体产生,且对SARS病毒感染细胞有一定的保护性。感染SARS病毒猴后与正常猴比较,其细胞杀伤效应明显增强。感染SARS-CoV的恒河猴不仅出现与SARS患者类似的临床和病理学改变,也在一定时期内排毒,出现特异免疫反应,这些指标均可作为药物筛选、疫苗评价等方面的重要参数。 展开更多
关键词 实验动物 SARS 动物模型 检测
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IL-1和TNF-α拮抗剂治疗骨关节炎实验研究 被引量:24
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作者 王海军 于长隆 +5 位作者 岸裕幸 村口笃 毛泽斌 傅欣 张继英 张智清 《中国运动医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期551-555,共5页
目的:观察腺病毒载体介导的白细胞介素1受体拮抗蛋白(IL-1Ra)和可溶性肿瘤坏死因子Ⅰ型受体(sTNF-RI)基因转移对兔骨关节炎的治疗作用,并探讨IL-1和TNF-α在骨关节炎发生中的作用。方法:构建Ad-IL-1Ra和Ad-sTNF-RI腺病毒载体,注射到兔... 目的:观察腺病毒载体介导的白细胞介素1受体拮抗蛋白(IL-1Ra)和可溶性肿瘤坏死因子Ⅰ型受体(sTNF-RI)基因转移对兔骨关节炎的治疗作用,并探讨IL-1和TNF-α在骨关节炎发生中的作用。方法:构建Ad-IL-1Ra和Ad-sTNF-RI腺病毒载体,注射到兔骨性关节炎膝关节腔内。关节内注射腺病毒后第3天和第7天,分别用1ml生理盐水灌洗膝关节,抽取关节腔灌注液采用ELISA分析外源基因的表达。第7天处死动物,取膝关节股骨内侧髁软骨和滑膜常规石蜡切片,软骨HE染色、甲苯胺蓝染色和滑膜组织HE染色检查病理改变,并进行软骨组织学评分。结果:膝关节内注射IL-1Ra能明显抑制关节软骨的破坏,但对滑膜炎无明显治疗作用;单独sTNF-RI基因治疗对关节软骨的破坏和滑膜炎均无明显的作用。结论:IL-1Ra对骨关节炎关节软骨有明显的保护作用,而sTNF-RI对骨关节炎无明显的治疗作用,这提示在骨关节炎的发生中IL-1可能起主要的作用,因而抑制IL-1的作用对骨关节炎的治疗更为有效。 展开更多
关键词 基因治疗 骨性关节炎 IL-1RA sTNF—RI 腺病毒载体
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表达HPV16 L1、L2和E7蛋白的非复制重组痘苗病毒诱发的抗肿瘤免疫反应 被引量:8
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作者 范江涛 陈心秋 张卉 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期317-320,共4页
目的:评价表达HPV16 L1、L2E7的非复制重组痘苗病毒疫苗的抗肿瘤免疫反应。方法:采用肿瘤预防、肿瘤治疗和肿瘤切除等方法,观察疫苗NTVJL1/L2E7的抗肿瘤效果,用酶联免疫斑点(ELISPOT)和CTL检测该疫苗在小鼠体内诱发的细胞免疫应答。结果... 目的:评价表达HPV16 L1、L2E7的非复制重组痘苗病毒疫苗的抗肿瘤免疫反应。方法:采用肿瘤预防、肿瘤治疗和肿瘤切除等方法,观察疫苗NTVJL1/L2E7的抗肿瘤效果,用酶联免疫斑点(ELISPOT)和CTL检测该疫苗在小鼠体内诱发的细胞免疫应答。结果:在肿瘤预防和肿瘤治疗试验中,疫苗可以分别使60%和50%的小鼠免受HPV16阳性的治疗细胞攻击,肿瘤切除试验中,疫苗可以使70%的小鼠免于肿瘤复发,与对照组之间的差异具有显著性。ELISPOT和CTL均检测出强的特异性细胞免疫水平。结论:NTVJL1/L2E7能够在小鼠体内诱发出理想的抗肿瘤免疫反应,可以作为防治宫颈癌的候选疫苗。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒 痘苗 疫苗 免疫反应
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不同牛PrP合成肽段的抗原性研究 被引量:3
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作者 赵丽 王健伟 +3 位作者 计融 韩春卉 于修平 洪涛 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2005年第8期681-684,共4页
目的研究PrP多肽的抗原性以及不同偶联方法对多肽免疫原性的影响。方法选择4段牛PrP多肽(BoP1、BoP2、BoP3、BoP4)为半抗原,KLH为载体,MBS、戊二醛两种偶联方法进行偶联,免疫BALB/c小鼠,间接ELISA方法检测小鼠血清中抗体效价,并对两种... 目的研究PrP多肽的抗原性以及不同偶联方法对多肽免疫原性的影响。方法选择4段牛PrP多肽(BoP1、BoP2、BoP3、BoP4)为半抗原,KLH为载体,MBS、戊二醛两种偶联方法进行偶联,免疫BALB/c小鼠,间接ELISA方法检测小鼠血清中抗体效价,并对两种偶联方法进行比较。结果两组动物均出现死亡,戊二醛偶联多肽免疫小鼠出现不同程度的腹水,MBS偶联多肽免疫小鼠未见其它异常反应;戊二醛偶联的4种多肽产生的抗体效价无显著性差异(P>0.05),MBS偶联的KLH-BoP1、KLH-BoP2、KLH-BoP4产生抗体效价无显著性差异(P>0.05),MBS偶联的KLH-BoP3抗体效价低于其它3种多肽(P<0.05);对同一种多肽而言,不同偶联方法KLH-BoP1、KLH-BoP2、KLH-BoP4所产生抗体效价无显著性差异(P>0.05),戊二醛偶联KLH-BoP3产生的抗体效价明显高于MBS偶联KLH-BoP3产生的抗体效价(P<0.05)。结论PrP多肽可作为半抗原刺激小鼠强烈的免疫反应,不同偶联方法,不同肽段抗原性不同,为抗PrP多克隆及单克隆抗体的制备奠定了基础。 展开更多
关键词 朊蛋白 多肽 半抗原 抗原性 载体
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恒河猴感染SARS-CoV的病毒学、血清学检测 被引量:1
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作者 魏强 王健伟 +12 位作者 张扬清 鲍琳琳 涂新明 蒋虹 高红 丛喆 朱华 邓巍 佟巍 张兵林 黄澜 刘亚莉 秦川 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2005年第3期144-146,共3页
目的对感染SARS-CoV的8只恒河猴进行病毒学、血清学指标检测.方法SARS-CoV经鼻腔接种8只恒河猴,在感染的第1天开始到5、7、10、15、20、30和60天分别安乐处死时,不同时间取咽拭子、血液和脏器,进行病毒分离,RT-PCR检测和抗体测定.结果RT... 目的对感染SARS-CoV的8只恒河猴进行病毒学、血清学指标检测.方法SARS-CoV经鼻腔接种8只恒河猴,在感染的第1天开始到5、7、10、15、20、30和60天分别安乐处死时,不同时间取咽拭子、血液和脏器,进行病毒分离,RT-PCR检测和抗体测定.结果RT-PCR证实感染病毒检出时间为5~16 d,8只猴中的5只分离到了病毒,感染15 d后可检测到抗体.结论感染SARS-CoV的恒河猴不仅出现与SARS患者类似的临床和病理学改变,也在一定时期内排毒,出现特异免疫反应,这些指标均可作为药物筛选、疫苗评价等方面的重要参数. 展开更多
关键词 SARS-COV 恒河猴 血清学 病毒学
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SARS病原导致人体脏器发生的病理及超微结构改变 被引量:7
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作者 孙异临 曲宝清 +5 位作者 张辉 洪涛 陈良标 屈建国 王建伟 任丽丽 《首都医科大学学报》 CAS 2003年第2期129-132,F003,共5页
对SARS死亡患者的尸检标本进行了光镜和电镜观察。结果:SARS病原体引起人体多个脏器的超微结构发生病理变化,表现为肺泡壁增厚,肺泡腔有絮状渗出物、间质可见纤维素及少量炎细胞浸润;心肌纤维断裂,线粒体肿胀;脾和淋巴结细胞膜崩解破坏... 对SARS死亡患者的尸检标本进行了光镜和电镜观察。结果:SARS病原体引起人体多个脏器的超微结构发生病理变化,表现为肺泡壁增厚,肺泡腔有絮状渗出物、间质可见纤维素及少量炎细胞浸润;心肌纤维断裂,线粒体肿胀;脾和淋巴结细胞膜崩解破坏;肾小管上皮细胞坏死脱落。在病变组织中可见少量病原颗粒。提示:SARS病原引起人体的细胞免疫病理反应,引起机体多个脏器,特别是肺、心及免疫器官的损害。 展开更多
关键词 SARS 严重急性呼吸综合征 人体脏器 病理 超微结构
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阳离子脂质体Lipofectin介导的β-半乳糖苷酶基因在_及GRC细胞株中的表达 被引量:2
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作者 程香普 段芳龄 +5 位作者 张智清 陈庆华 李振峰 赵治国 崔静 卢高峰 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2004年第3期455-457,共3页
目的 :研究阳离子脂质体Lipofectin介导的 β 半乳糖苷酶基因在不同肿瘤细胞株中的表达。 方法 :质粒pDCβ在大肠杆菌DH5α中扩增后用碱裂解法提取 ,并经Sepharose 2B凝胶过滤柱层析 ,以Lipofectin分别转染人肝癌细胞株HepG2 、人肾癌... 目的 :研究阳离子脂质体Lipofectin介导的 β 半乳糖苷酶基因在不同肿瘤细胞株中的表达。 方法 :质粒pDCβ在大肠杆菌DH5α中扩增后用碱裂解法提取 ,并经Sepharose 2B凝胶过滤柱层析 ,以Lipofectin分别转染人肝癌细胞株HepG2 、人肾癌细胞株GRC ,然后用X gal细胞化学染色法检测 β 半乳糖苷酶活性。 结果 :β 半乳糖苷酶活性在HepG2 、GRC中均有表达。结论 展开更多
关键词 阳离子脂质体 基因转染 Β-半乳糖苷酶基因 肿瘤 细胞株
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分泌AFP的人肝癌细胞株中阳离子脂质体介导肝癌组织特异性载体的表达 被引量:2
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作者 程香普 金中奎 +4 位作者 段芳龄 张智清 唐芙爱 冯常炜 郑鹏远 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2004年第4期613-616,共4页
目的 :研究阳离子脂质体 (cationicliposome)介导甲胎蛋白 (α fetoprotein ,AFP)启动子 /增强子载体在分泌AFP的人肝癌细胞株中的靶向表达。方法 :测定比较阳离子脂质体Lipofectin介导质粒pDR2 luc、pEBAFluc转染分泌AFP的人肝癌细胞株... 目的 :研究阳离子脂质体 (cationicliposome)介导甲胎蛋白 (α fetoprotein ,AFP)启动子 /增强子载体在分泌AFP的人肝癌细胞株中的靶向表达。方法 :测定比较阳离子脂质体Lipofectin介导质粒pDR2 luc、pEBAFluc转染分泌AFP的人肝癌细胞株 (HepG2 )、不分泌AFP的人肝癌细胞株 (SMMC772 1 )、人肾癌细胞株 (GRC)及非洲绿猴肾细胞(COS7)的转染效率 ,通过液体闪烁计数仪单光子计数法测定荧光素酶活性 ,估计转染效率。结果 :①以Lipofectin介导pDR2 luc转染 4株细胞 ,荧光素酶活性在 4株细胞中均能表达 ,且表达活性差异有统计学意义 (P <0 .0 5 ) ;②以Lipofectin介导pEBAFluc转染 4株细胞 ,荧光素酶活性仅在能分泌AFP的HepG2 中表达。结论 :含人AFP启动子 展开更多
关键词 脂质体 甲胎蛋白 转录调控序列 肝细胞
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