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扩增子测序技术在牡蛎GⅡ型诺如病毒基因多样性研究中的评估 被引量:1
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作者 赵璐 董蕾 +2 位作者 喻勇新 靳淼 王永杰 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2024年第16期299-305,共7页
牡蛎中诺如病毒基因多样的研究对病毒的流行传播和疫情防控具有十分重要的意义,二代测序技术(next generation sequencing, NGS)的扩增子测序具有高通量、高准确性等优势,被广泛应用于基因组学、转录组学和表观基因组学等领域。为评估... 牡蛎中诺如病毒基因多样的研究对病毒的流行传播和疫情防控具有十分重要的意义,二代测序技术(next generation sequencing, NGS)的扩增子测序具有高通量、高准确性等优势,被广泛应用于基因组学、转录组学和表观基因组学等领域。为评估扩增子测序技术对牡蛎中诺如病毒多样性研究的可行性,采用经典的巢式反转录PCR(reverse transcription-PCR, RT-PCR)方法对人为污染诺如病毒的牡蛎样品进行检测并将产物进行扩增子测序,对病毒基因型覆盖度和灵敏度进行分析。结果显示,在覆盖度方面,扩增子测序技术能够检测出人为添加到牡蛎中的6种GⅡ型诺如病毒,覆盖率达到100%;在灵敏度方面,对人为污染有不同数量诺如病毒的牡蛎进行检测及测序分析,证实扩增子测序的灵敏性较高,低于50个病毒粒子也能检测出。综上,扩增子测序技术提高了牡蛎中诺如病毒检测的准确性以及基因型的丰富度。 展开更多
关键词 诺如病毒 贝类 扩增子测序 引物评估 多样性
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脂质体转染法与电转染法在丙型肝炎病毒RNA转染人肝癌细胞中的应用效果比较 被引量:11
2
作者 卢莎 谭文杰 +5 位作者 张玲 邓瑶 陶格斯 蔡敏 李恋 沈晓玲 《山东医药》 CAS 北大核心 2016年第19期15-18,共4页
目的:比较脂质体转染法与电转染法在丙型肝炎病毒( HCV ) RNA转染人肝癌细胞中的应用效果。方法培养人肝癌细胞Huh7.5-CD81并分为A、B组及对照组。 A组采用电转染质粒pHebei(E1E2)/JFH1来源的HCV RNA;B组采用脂质体转染质粒pHe... 目的:比较脂质体转染法与电转染法在丙型肝炎病毒( HCV ) RNA转染人肝癌细胞中的应用效果。方法培养人肝癌细胞Huh7.5-CD81并分为A、B组及对照组。 A组采用电转染质粒pHebei(E1E2)/JFH1来源的HCV RNA;B组采用脂质体转染质粒pHebei(E1E2)/JFH1来源的HCV RNA;对照组采用脂质体转染复制缺陷质粒pJFH1/GND转录获得的HCV RNA。光学显微镜下观察各组转染后细胞形态,采用免疫荧光法( IFA)检测三组转染效率,real-time PCR法检测三组细胞培养液上清中的HCV RNA,采用TCID50法检测A、B组细胞培养液上清中的丙型肝炎病毒(HCVcc)感染滴度。结果 A组转染使用细胞数为1×106,转染后第2天细胞损伤过半,边缘毛糙;B组转染使用细胞数为2×105,转染后第2天细胞基本无损伤。 A组转染效率为9.98%±0.83%,B组转染效率为2.58%±0.39%,两组转染效率相比,P<0.01;对照组未检出荧光阳性细胞。 A、B组转染后细胞培养液上清中HCV RNA拷贝数均呈现先下降后升高的趋势,最终稳定于106 copies/mL。 A组转染后21 d、B组转染后31 d方能检测到HCV感染滴度,A、B组收获HCV最高感染滴度均为104 ffu/mL。结论脂质体转染和电转染两种方法均可建立嵌合HCV的人肝癌细胞培养体系,脂质体转染法对细胞的损伤较小,电转染法转染效率较高、收获HCVcc的时间较短,但两种方法收获的HCVcc感染滴度无明显差异。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 电穿孔 脂质体 RNA转染
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扶正解毒化瘀方总苷提取物对呼吸道合胞病毒感染宿主细胞炎性反应的影响 被引量:8
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作者 程淼 王明哲 +3 位作者 宋金华 董晓旭 杨春静 王成祥 《中国中医药信息杂志》 CAS CSCD 2018年第12期35-39,共5页
目的观察扶正解毒化瘀方总苷提取物对呼吸道合胞病毒(RSV)感染HEp-2细胞Toll样受体(TLRs)相关细胞炎性因子的影响,探讨其可能的作用机制。方法建立RSV感染HEp-2细胞模型,随机分为病毒对照组、总苷提取物组及利巴韦林组,各给药组给予相... 目的观察扶正解毒化瘀方总苷提取物对呼吸道合胞病毒(RSV)感染HEp-2细胞Toll样受体(TLRs)相关细胞炎性因子的影响,探讨其可能的作用机制。方法建立RSV感染HEp-2细胞模型,随机分为病毒对照组、总苷提取物组及利巴韦林组,各给药组给予相应药物,同时以未感染RSV的HEp-2细胞作为空白对照。应用液相色谱-质谱分析扶正解毒化瘀方全方、总苷提取物及其药物血清的主要成分。采用ELISA检测细胞上清液白细胞介素(IL)-1β、IL-8、干扰素-α(IFN-α)、TLR3、TLR7水平。结果扶正解毒化瘀方全方提取物共鉴别出10个化学成分,以苷类为主。扶正解毒化瘀方总苷提取物共鉴别出9个化学成分,其中入血成分共鉴别出8个化学成分,包括芍药苷、木犀草素、野黄芩苷、连翘酯苷H、异荭草苷、连翘苷、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re。与HEp-2细胞组比较,病毒对照组感染后24、48、72 h IFN-α、IL-1β、IL-8、TLR3和TLR7水平均升高;与病毒对照组比较,总苷提取物组感染后24、48、72 h IFN-α、IL-1β、IL-8、TLR3和TLR7水平均降低。结论扶正解毒化瘀方总苷提取物可能通过调节TLRs相关细胞炎性因子,抑制细胞炎性反应起到治疗RSV肺炎的作用。 展开更多
关键词 呼吸道合胞病毒 扶正解毒化瘀方总苷提取物 液相色谱-质谱分析 Toll样受体 细胞因子 大鼠
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喀什0507JS32病毒的分离鉴定 被引量:4
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作者 吕新军 吕志 +3 位作者 孙肖红 付士红 王焕琴 梁国栋 《中国医药导报》 CAS 2009年第9期21-23,共3页
2005年7~8月,在喀什地区采集蚊虫进行病毒分离,从当地居民家畜圈采集的一组库蚊分离到0507JS32病毒,该病毒对C6/36细胞致病变,而对Vero细胞不致病变。电镜观察显示,完整病毒颗粒呈球形,直径55nm,无包膜,衣壳表面壳粒结构明显。基因组... 2005年7~8月,在喀什地区采集蚊虫进行病毒分离,从当地居民家畜圈采集的一组库蚊分离到0507JS32病毒,该病毒对C6/36细胞致病变,而对Vero细胞不致病变。电镜观察显示,完整病毒颗粒呈球形,直径55nm,无包膜,衣壳表面壳粒结构明显。基因组核酸电泳显示基因组为12节段双链RNA(double stranded RNA,dsRNA)。利用辽宁病毒(Liaoning virus,LNV)第12基因片段特异性引物对病毒RNA进行RT-PCR扩增,PCR产物进行序列测定,所得核酸序列进行BLAST比较,结果显示,与LNV病毒第12基因片段核酸序列同源性大于89%,证实该病毒为LNV病毒。 展开更多
关键词 喀什 库蚊 辽宁病毒
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H7N9禽流感病毒等温扩增快速检测方法的建立 被引量:5
5
作者 董志珍 郑文杰 +7 位作者 王乃福 赵祥平 吴冬雪 王玉玲 马晶 贾润清 王建华 张晓光 《中国动物检疫》 CAS 2013年第7期72-77,共6页
目的建立H7N9禽流感病毒环介导等温扩增(LAMP)快速检测方法。方法从GISAID数据库中获得H7N9禽流感病毒血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)基因序列,应用DNAStar软件MegAlign程序分析其序列,利用PrimerExplorer V4软件在序列保守区域设计LAMP引... 目的建立H7N9禽流感病毒环介导等温扩增(LAMP)快速检测方法。方法从GISAID数据库中获得H7N9禽流感病毒血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)基因序列,应用DNAStar软件MegAlign程序分析其序列,利用PrimerExplorer V4软件在序列保守区域设计LAMP引物,即外引物、内引物,同时以所克隆的阳性质粒为模板,建立H7N9禽流感病毒等温扩增快速检测方法。结果LAMP检测方法对H7N9禽流感病毒的灵敏度达到10个拷贝,所用引物对于H1、H3、H5亚型禽流感病毒和新城疫病毒无非特异性扩增,表现出良好特异性。结论建立的H7N9禽流感病毒等温扩增快速检测方法灵敏度高、特异性强,为快速检测禽流感病毒提供了新方法。 展开更多
关键词 H7N9 禽流感病毒 等温扩增
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肠道病毒71型外壳蛋白VP1在大肠杆菌中的表达 被引量:7
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作者 周世力 李琳琳 何雅青 《分析科学学报》 CAS CSCD 2007年第2期157-159,共3页
将扩增得到的肠道病毒71型外壳蛋白VP1基因克隆到测序载体pGEM-T,测序验证该序列为目的片段后,将目的基因克隆到原核表达载体pGEX-5x-1中,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,产物经SDS-PAGE分析和Western blot验证。结果表明,在经IPTG诱导... 将扩增得到的肠道病毒71型外壳蛋白VP1基因克隆到测序载体pGEM-T,测序验证该序列为目的片段后,将目的基因克隆到原核表达载体pGEX-5x-1中,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,产物经SDS-PAGE分析和Western blot验证。结果表明,在经IPTG诱导的BL21中检测到分子量与预期大小相符的大约60 kDa的融合蛋白。利用表达产物作为抗原,对EV71感染病人阳性血清的检测初步证实,重组蛋白VP1可以作为检测EV71感染的检测用抗原。 展开更多
关键词 肠道病毒71型 VP1 大肠杆菌BL21
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适配器-超速离心法提高电镜检测病毒的灵敏度 被引量:1
7
作者 屈建国 余兴明 +3 位作者 鲁茁壮 邹小辉 宋敬东 洪涛 《电子显微学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期373-378,共6页
通过专用超速离心机将病毒直接离心至载网是重要的提高诊断电镜灵敏度的方法,作者尝试建立适配器-超速离心法实现相同目的。设计制造了外形类似离心管的载网适配器,其内部有一平底的凹槽,可以放置电镜载网,添加病毒悬液后,经过超速离心... 通过专用超速离心机将病毒直接离心至载网是重要的提高诊断电镜灵敏度的方法,作者尝试建立适配器-超速离心法实现相同目的。设计制造了外形类似离心管的载网适配器,其内部有一平底的凹槽,可以放置电镜载网,添加病毒悬液后,经过超速离心,能够将病毒粒子直接离心到载网上。利用重组腺病毒和重组腺相关病毒为模式病毒,适配器-超速离心法较悬滴法的病毒检测灵敏度提高了50~200倍;对人腺病毒41型(Ad41)细胞培养物进行电镜检测,灵敏度提高了50倍。如果将免疫凝集法(immune clumping)与适配器-超速离心法相联合进行电镜制样,检测灵敏度较常规免疫凝集法提高1~2个数量级。这些结果说明适配器-超速离心法能够高效地富集病毒,可以应用于病毒的电镜检测工作。 展开更多
关键词 病毒富集 适配器 超速离心 诊断电镜 免疫凝集
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汉坦病毒重组蛋白检测血清中特异性IgA、IgM抗体的动态变化 被引量:1
8
作者 陈宇萍 安丽敏 +5 位作者 牛聪敏 耿志州 郭彦敏 王丽英 马士恒 孟祥芝 《中国医药导报》 CAS 2007年第06Z期13-15,共3页
目的:探讨重组蛋白检测血清中特异性IgA、IgM抗体的动态变化。方法:用杆状病毒表达的汉坦病毒重组核蛋白(rNP)和糖蛋白(rGP)为抗原,检测14例61份急性期SEO型病人系列血清中的特异性IgA、IgM,寻找HFRS病人IgA、IgM抗体的动态变化规律。结... 目的:探讨重组蛋白检测血清中特异性IgA、IgM抗体的动态变化。方法:用杆状病毒表达的汉坦病毒重组核蛋白(rNP)和糖蛋白(rGP)为抗原,检测14例61份急性期SEO型病人系列血清中的特异性IgA、IgM,寻找HFRS病人IgA、IgM抗体的动态变化规律。结果:几乎所有HFRS病人早期即有强烈的IgA、IgM应答,尤其是针对rNP的抗体出现早且滴度高,抗rGP出现亦早,但滴度偏低。结论:应用rNP和rGP为抗原,在发病早期检测IgM的同时,检测I-gA,可以起到互补的作用,特别是对HFRS早期临床表现不典型的病例。 展开更多
关键词 汉坦病毒 血清IgA抗体 临床诊断
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乙肝病毒核心蛋白的结构与功能及其在抗病毒治疗中的应用 被引量:1
9
作者 王雪艳 陈红松 王宇 《山东医药》 CAS 北大核心 2010年第16期101-103,共3页
关键词 肝炎病毒 乙型 病毒核心蛋白质类 抗病毒治疗
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利用类病毒脂质体抗原检测H5N1亚型禽流感病毒抗体ELISA方法的建立 被引量:1
10
作者 杨倩 朱道中 +6 位作者 薛春宜 李晓明 曹永长 段燕喻 王莹 吴晓薇 刘志玲 《动物医学进展》 北大核心 2015年第1期5-10,共6页
利用昆虫杆状病毒表达系统制备了H5N1亚型禽流感病毒(AIV)HA蛋白、类病毒脂质体和病毒样颗粒,分别作为包被抗原,建立了相应的检测H5N1亚型禽流感病毒抗体的ELISA方法。特异性试验、敏感性试验、重复性试验和稳定性试验结果表明,利用3种... 利用昆虫杆状病毒表达系统制备了H5N1亚型禽流感病毒(AIV)HA蛋白、类病毒脂质体和病毒样颗粒,分别作为包被抗原,建立了相应的检测H5N1亚型禽流感病毒抗体的ELISA方法。特异性试验、敏感性试验、重复性试验和稳定性试验结果表明,利用3种抗原包被所建立的ELISA方法均具有良好的重复性和稳定性,批间和批内变异系数均小于10%,但单独表达的HA蛋白和类病毒脂质体特异性更好,而且类病毒脂质体有更高的免疫反应性,与灭活全病毒相比安全性更高,故在H5N1亚型AIV抗体水平检测方面更具有应用前景。 展开更多
关键词 昆虫杆状病毒表达系统 禽流感病毒 类病毒脂质体 抗体检测
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含巨细胞病毒早期启动子的EPO逆转录病毒表达载体的构建 被引量:3
11
作者 陈广南 梁希若 吴淑华 《广州医学院学报》 1997年第2期1-4,共4页
本文构建了含巨细胞病毒(CMV)早期启动子的红细胞生成素(EPO)逆转录病毒表达我体。困逆转录病毒表达我体pN2A需用外源启动子才能表达国的基因,故把CMV早期启动手及包括除信号肽中第2、3和4位氨基酸外的所有编码区及两个内含子序列... 本文构建了含巨细胞病毒(CMV)早期启动子的红细胞生成素(EPO)逆转录病毒表达我体。困逆转录病毒表达我体pN2A需用外源启动子才能表达国的基因,故把CMV早期启动手及包括除信号肽中第2、3和4位氨基酸外的所有编码区及两个内含子序列的EPO次全基因片段一起克隆到pN2A载体neo基因下游的多聚接头上的单一酶切位点BglⅡ上,构建成重组质粒pN2ACMVEPO。 展开更多
关键词 红细胞生成素(EPO) 逆转录病毒载体 基因重组
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腺病毒载体介导的RNAi对SK-BR-3细胞c-Met表达的影响
12
作者 赵慧 陈东 +2 位作者 袁振华 王忠山 吴小兵 《解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期549-552,共4页
目的:通过腺病毒载体介导的RNA干扰技术抑制乳腺癌细胞HGF受体c-Met的表达,抑制乳腺癌细胞增殖、诱导细胞凋亡。方法:PCR法获得人U6启动子及带有c-Met反向互补靶序列的片段HU6shmet;利用腺病毒载体将其传递至SK-BR-3细胞;RNA狭缝杂交检... 目的:通过腺病毒载体介导的RNA干扰技术抑制乳腺癌细胞HGF受体c-Met的表达,抑制乳腺癌细胞增殖、诱导细胞凋亡。方法:PCR法获得人U6启动子及带有c-Met反向互补靶序列的片段HU6shmet;利用腺病毒载体将其传递至SK-BR-3细胞;RNA狭缝杂交检测SK-BR-3细胞c-Met mRNA水平,Western印迹检测c-Met蛋白水平。结果:获得了带有人U6启动子及c-Met反向互补靶序列的重组腺病毒载体rAdUshmet1和rAdUshmet2。转导了重组腺病毒的SK-BR-3细胞的c-Met mRNA和蛋白相对表达量均有所下降。结论:腺病毒载体rAdUshmet通过抑制HGF受体c-Met表达,能在一定程度上阻断HGF-c-Met信号转导通路,有可能成为对乳腺癌进行基因治疗的有效载体。 展开更多
关键词 c—Met 肝细胞生长因子 腺病毒 RNA干扰
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医学病毒形态识别中的假象
13
作者 宋敬东 《电子显微学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期386-399,共14页
基于透射电子显微镜负染技术和超薄切片技术的病毒形态识别是病毒鉴定的重要手段,病毒的形态识别在病毒相关的科研工作及重大疫情、生物恐怖事件的病原体鉴定中均发挥重要的作用。但是,无论负染样本中还是超薄切片上有时存在类似病毒结... 基于透射电子显微镜负染技术和超薄切片技术的病毒形态识别是病毒鉴定的重要手段,病毒的形态识别在病毒相关的科研工作及重大疫情、生物恐怖事件的病原体鉴定中均发挥重要的作用。但是,无论负染样本中还是超薄切片上有时存在类似病毒结构的假象,往往导致误判。本文对负染样本、超薄切片样本中常见的医学病毒类似结构的假象结构进行列举,包括噬菌体、球形杂质颗粒、线粒体成分、支原体、网格蛋白及非网格蛋白包被囊泡、多泡体、高尔基体运输囊泡、糖原颗粒、微管、染色质周围颗粒、核孔、微绒毛、分泌泡和胶原原纤维等结构,期望为医学病毒形态判定提供一定的思路。 展开更多
关键词 透射电子显微镜技术 医学病毒 形态 假象 鉴别
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桦褐孔菌乙酸乙酯萃取物对朊病毒复制的抑制作用 被引量:1
14
作者 王琳 姚强 +5 位作者 杨微 陈嘉 胡超 夏影 陈志宝 陈操 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2022年第22期23-30,共8页
探究桦褐孔菌乙酸乙酯萃取物对朊病毒复制的影响及潜在作用机制。采用Cell Counting Kit-8(CCK-8)方法对桦褐孔菌二氯甲烷萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物进行细胞毒性评价,得到最大作用浓度;应用三种萃取物的安全浓度(0.1×2... 探究桦褐孔菌乙酸乙酯萃取物对朊病毒复制的影响及潜在作用机制。采用Cell Counting Kit-8(CCK-8)方法对桦褐孔菌二氯甲烷萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物进行细胞毒性评价,得到最大作用浓度;应用三种萃取物的安全浓度(0.1×2^(−14)~0.1×2^(−8) mg/mL)处理SMB-S15细胞,通过PrP特异性蛋白质免疫印迹(Western blot)试验检测不同萃取物对朊病毒复制的影响;对乙酸乙酯萃取物处理细胞后的活性氧、过氧化氢及相关抗氧化因子水平进行测定。结果显示,桦褐孔菌二氯甲烷萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物的最大作用浓度为0.1×2^(−8) mg/mL,在该浓度下处理细胞3 d,发现乙酸乙酯萃取物可抑制朊病毒复制(P<0.01),而二氯甲烷萃取物及正丁醇萃取物对朊病毒复制没有影响。进一步发现,乙酸乙酯萃取物可降低活性氧和过氧化氢水平,增加HO-1、GCLC蛋白表达,升高SOD活性和总谷胱甘肽水平,以上均具有统计学意义。本研究表明桦褐孔菌乙酸乙酯萃取物具有抑制朊病毒复制作用,且此抑制作用可能与激活Nrf2信号通路相关。 展开更多
关键词 桦褐孔菌 乙酸乙酯萃取物 朊病毒 抗氧化作用 Nrf2信号通路
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长春市孕产妇风疹病毒抗体水平调查 被引量:3
15
作者 齐丹丹 宋杰 +4 位作者 刘天树 牛春艳 崔淑萍 徐艳玲 许文波 《中国实用医药》 2009年第28期243-244,共2页
目的了解长春市孕产妇风疹抗体水平,评估孕产妇对风疹的易感性,为控制先天性风疹综合征(Congenital Rubella Syndrome,CRS)提供科学依据。方法2006年4月至2007年6月,在吉林大学第二医院妇产科住院部,随机选取21~41岁的孕产妇18... 目的了解长春市孕产妇风疹抗体水平,评估孕产妇对风疹的易感性,为控制先天性风疹综合征(Congenital Rubella Syndrome,CRS)提供科学依据。方法2006年4月至2007年6月,在吉林大学第二医院妇产科住院部,随机选取21~41岁的孕产妇180人,收集其分娩的新生儿脐带血180份进行血清流行病学调查。结果孕产妇风疹IgG抗体总阳性率为82.78%。风疹抗体阳性率随着年龄增长而下降。各年龄组间抗体阳性率差异有统计学意义。而按地区、孕周、自然流产史等因素分组,差异无统计学意义。结论风疹发病与年龄有关,随着年龄增长抗体阳性率有下降趋势。长春市有17.22%的孕产妇有患风疹的危险。而且随着各省市、地区风疹计划免疫的实施,风疹现有的流行局势可能被打破,会出现风疹在较大年龄组中爆发流行的新局势。 展开更多
关键词 孕产妇 脐血 风疹病毒抗体 先天性风疹综合征
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一种用于贴壁培养细胞感染病毒检测的简易光镜-电镜联用技术 被引量:2
16
作者 冯红丽 彭宇宁 宋敬东 《电子显微学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期86-93,共8页
目的:建立一种简单易行的适用于病毒检测的光镜-电镜联用技术。方法:使用Lab-Tek腔室玻片培养细胞并接种不同类型病毒,通过光学显微镜选取目标病变细胞或通过荧光蛋白、免疫细胞化学标记、免疫荧光标记、量子点标记确定目标细胞并在腔... 目的:建立一种简单易行的适用于病毒检测的光镜-电镜联用技术。方法:使用Lab-Tek腔室玻片培养细胞并接种不同类型病毒,通过光学显微镜选取目标病变细胞或通过荧光蛋白、免疫细胞化学标记、免疫荧光标记、量子点标记确定目标细胞并在腔室玻片上标记其部位。随后将腔室玻片改造为包埋模具,最后钻取目标细胞及其包埋树脂,并对目标细胞进行靶向性超薄切片及透射电子显微镜观察。结果:光镜下选取的目标细胞在透射电子显微镜下可顺利定位并进行观察。结论:建立了一种基于腔室玻片包埋模具的可用于病毒检测的光镜-电镜联用技术。 展开更多
关键词 透射电子显微镜 光镜-电镜联用技术 病毒 检测
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笼型蛋白仿生纳米结构构建及抗病毒研究
17
作者 袁嫕 王超 +4 位作者 郭琼 王刚 谢志萍 段招军 郑丽舒 《电子显微学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期6-12,共7页
本研究利用笼型铁蛋白亚基的解聚和自组装过程,在蛋白酶促活性位点上仿生合成1~3 nm尺径可控的金纳米团簇,构建了新型高生物活性抗病毒纳米药物Au@HFn,使用多种电镜学方法对其形貌、结构进行了表征;在抗病毒功效方面,Au@HFn具有抑制HepG... 本研究利用笼型铁蛋白亚基的解聚和自组装过程,在蛋白酶促活性位点上仿生合成1~3 nm尺径可控的金纳米团簇,构建了新型高生物活性抗病毒纳米药物Au@HFn,使用多种电镜学方法对其形貌、结构进行了表征;在抗病毒功效方面,Au@HFn具有抑制HepG 2.2.15细胞HBV s/e抗原分泌和降低HBV核酸复制的效果,抑制效果随金团簇尺径增加而提高并与纳米药物的浓度呈正相关;在细胞毒性实验测试中,Au@HFn未发现有细胞毒性,且增高了细胞活力,具有很高的生物安全性。本研究提出了一种新的抗病毒纳米药物构建策略,相对传统小分子抗病毒药物,在提高药物生物兼容性、降低毒副作用和抗耐药性等方面具有较大的潜力和应用前景。 展开更多
关键词 笼型蛋白 自组装 仿生合成 纳米结构 抗病毒
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一种寨卡病毒富集检测方法的性能评价
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作者 李阿茜 孔令君 +4 位作者 刘洋 伊洁 李川 梁米芳 窦亚玲 《协和医学杂志》 CSCD 2022年第3期455-460,共6页
目的 对一种无需核酸提取纯化的寨卡病毒实时荧光定量反转录PCR检测方法的性能进行评价。方法 该检测方法基于实时荧光定量反转录PCR技术,样本处理采用病毒富集法:取100~200μL待测样本,加入112~224μL样本处理液Ⅰ,5~10μL样本处理液Ⅱ... 目的 对一种无需核酸提取纯化的寨卡病毒实时荧光定量反转录PCR检测方法的性能进行评价。方法 该检测方法基于实时荧光定量反转录PCR技术,样本处理采用病毒富集法:取100~200μL待测样本,加入112~224μL样本处理液Ⅰ,5~10μL样本处理液Ⅱ,混匀后进行离心富集(12 000 r/min,离心半径8.6 cm,离心5 min)。离心后弃上清液,加入20μL复溶缓冲液重悬沉淀;取10μL重悬液,加入50μL PCR反应液上机检测。从定量检测下限、交叉反应、抗干扰性、精密度方面评价该检测方法的性能。收集北京协和医院检验科临床样本(血清、尿液、唾液样本),随机选取约1/5构建寨卡病毒感染模拟临床样本,进一步评定该检测方法的性能。结果 该检测方法对MR766、ZKC2/2016毒株的检测下限均为10;半数组织培养感染剂量(50%tissue culture infective dose, TCID50)/mL;对17种常见虫媒病原体检测结果均为阴性,无交叉反应发生;潜在干扰物质胆红素(15 mg/L)、血红蛋白(100 mg/L)、甘油三酯(2000 mg/L)、IgG(37.5 g/L)和EDTA-Na;(2.5 g/L)对其检测结果无干扰;检测低、中、高浓度寨卡病毒的批次内和批次间Ct值变异系数均<10%,精密度良好。共收集344份北京协和医院检验科临床样本,其中构建寨卡病毒感染模拟临床样本73份。采用该检测方法对344份样本进行检测,结果均与实际相符,无假阳性和假阴性。结论 寨卡病毒简单富集后再检测的方法特异性高、重复性好,检测结果不受干扰物质的影响,检测下限满足临床需求,且操作简便,但应用效果仍需在真实临床样本中进一步验证。 展开更多
关键词 寨卡病毒 快速检测 病毒富集法 性能评价
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miRNA-146a在鼻咽炎症和癌症病变组织中的表达及意义 被引量:5
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作者 敬敏 赵颖海 +2 位作者 陈小毅 杜海军 曾毅 《山东医药》 CAS 2012年第37期1-3,共3页
目的探讨miRNA-146a在鼻咽炎症和癌症病变组织中的表达及意义。方法 SYBR Green实时定量PCR方法定量检测miRNA-146a在13例鼻咽黏膜慢性炎症患者和16例鼻咽癌患者病变组织中的表达,比较miR-NA-146a表达在鼻咽炎症与癌症组织中以及鼻咽癌... 目的探讨miRNA-146a在鼻咽炎症和癌症病变组织中的表达及意义。方法 SYBR Green实时定量PCR方法定量检测miRNA-146a在13例鼻咽黏膜慢性炎症患者和16例鼻咽癌患者病变组织中的表达,比较miR-NA-146a表达在鼻咽炎症与癌症组织中以及鼻咽癌不同临床病理特征的组间差异。结果鼻咽癌组织中miRNA-146a表达水平明显高于鼻咽黏膜慢性炎症组织(P<0.01);miRNA-146a在鼻咽癌淋巴结转移组中的表达水平高于无淋巴结转移组(P<0.05);miRNA-146a表达水平在不同年龄及临床分期比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论人鼻咽癌组织中miRNA-146a呈高表达,可能促进鼻咽癌淋巴道转移。 展开更多
关键词 鼻咽肿瘤 miRNA-146a 肿瘤转移 SYBR Green实时定量PCR
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肉及肉制品中6种致病菌的GeXP多重PCR检测 被引量:9
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作者 杨梦婕 徐玲丽 +1 位作者 马学军 武桂珍 《食品研究与开发》 CAS 北大核心 2021年第13期168-173,共6页
利用多重基因表达(GenomeLabTM eXpress Profiling,GeXP)遗传分析系统建立一种可单管一次同时检测大肠杆菌O157∶H7、金黄色葡萄球菌、志贺氏菌、副溶血性弧菌、单核细胞增生李斯特菌和沙门氏菌6种肉及肉制品中致病菌的多重聚合酶链式反... 利用多重基因表达(GenomeLabTM eXpress Profiling,GeXP)遗传分析系统建立一种可单管一次同时检测大肠杆菌O157∶H7、金黄色葡萄球菌、志贺氏菌、副溶血性弧菌、单核细胞增生李斯特菌和沙门氏菌6种肉及肉制品中致病菌的多重聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测方法。评价此方法特异性和灵敏性,并初步应用于市场随机购买的肉类样品的检测。结果显示,该方法可在短时间内实现同时对上述6种致病菌进行检测,且检测灵敏度低至103 CFU/mL,为食源性致病菌高通量快速有效检测提供新的方法技术支持,具有较强的实际应用价值。 展开更多
关键词 食品安全 肉及肉制品 GeXP多重聚合酶链式反应 致病菌 快速检测
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