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重组日本血吸虫抱雌沟蛋白rGST-SjGCP配伍GEL 02或ISA 201佐剂的免疫效果比较 被引量:1
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作者 石帅锋 贾静 +4 位作者 郑明政 张倩 洪炀 林矫矫 傅志强 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第4期63-70,共8页
为评估日本血吸虫抱雌沟蛋白作为疫苗候选抗原的潜力及其与GEL 02和ISA 201佐剂配伍后的免疫应答,本研究通过构建重组质粒pGEX-4T-1/SjGCP并在大肠杆菌(E.coli)中诱导表达,纯化融合蛋白rGST-SjGCP,用Western blot检测其抗原性,再将其分... 为评估日本血吸虫抱雌沟蛋白作为疫苗候选抗原的潜力及其与GEL 02和ISA 201佐剂配伍后的免疫应答,本研究通过构建重组质粒pGEX-4T-1/SjGCP并在大肠杆菌(E.coli)中诱导表达,纯化融合蛋白rGST-SjGCP,用Western blot检测其抗原性,再将其分别与2种佐剂配伍后免疫小鼠评估其免疫效果,用ELISA检测特异性抗体水平。结果显示:重组质粒pGEX-4T-1/SjGCP在大肠杆菌中成功诱导表达,纯化后得到约100 kDa的融合蛋白rGST-SjGCP;rGST-SjGCP分别与GEL 02和ISA 201佐剂配伍后免疫小鼠,均诱导小鼠产生较高水平的特异性IgG抗体,分别是佐剂对照组的7.07倍(P<0.001)和6.86倍(P<0.001),特异性抗体亚型IgG1/IgG2a的比值与佐剂对照组相比分别升高了13.68%(P<0.05)和14.71%(P=0.3468);日本血吸虫感染小鼠血清和融合蛋白rGST-SjGCP免疫小鼠血清均可特异性识别目的蛋白,表明rGST-SjGCP具有良好的抗原性;与PBS组相比,rGST-SjGCP与GEL 02佐剂配伍后在小鼠中诱导了25.87%(P<0.01)的减虫率和27.36%(P<0.05)的肝脏减卵率,rGST-SjGCP与ISA 201佐剂配伍后在小鼠中未诱导产生差异显著的减虫率和肝脏减卵率。结果表明,rGST-SjGCP结合GEL 02佐剂可诱导偏向Th2型免疫应答,具有免疫保护效果。本研究为评价日本血吸虫抱雌沟蛋白作为疫苗候选抗原的潜力及疫苗佐剂的选择提供了依据。 展开更多
关键词 日本血吸虫 抱雌沟蛋白 佐剂 疫苗
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锥虫可变表面糖蛋白的表达调控、结构及免疫应答
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作者 曾晴勤 李如松 +11 位作者 李瑞 朱淳殷 王欣乐 何学东 环嘉玲 叶子雨 王莹 张璟 夏天奇 宋厚辉 郑亚东 杨永春 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第11期4829-4839,共11页
锥虫是一类由媒介传播的血液原虫,可感染人和动物引起锥虫病,危害巨大。锥虫的体表为单一可变表面糖蛋白(variant surface glycoprotein,VSG)形成的致密“外套”,会在每个虫血症时期进行周期性更换,以逃避宿主免疫杀伤作用。锥虫基因组... 锥虫是一类由媒介传播的血液原虫,可感染人和动物引起锥虫病,危害巨大。锥虫的体表为单一可变表面糖蛋白(variant surface glycoprotein,VSG)形成的致密“外套”,会在每个虫血症时期进行周期性更换,以逃避宿主免疫杀伤作用。锥虫基因组含有成百上千个VSG基因和假基因,而虫体可通过精确的表达调控保证在特定感染阶段只表达一种VSG。VSG具有良好的抗原性,这主要由位于其N端结构域(N-terminal domain,NTD)顶叶(top lobe)的免疫显性表位、糖基化修饰和亚结构域及其构象共同决定。VSG特异的IgM反应在清除锥虫感染中发挥重要作用,但IgG介导的免疫裂解作用则十分有限。宿主特异IgG免疫反应变得固化,只会针对每个VSG中有限的免疫显性表位,降低了与不同VSG之间的交叉反应。本文综述了VSG在表达调控、蛋白质结构、免疫原性及免疫应答等方面的最新研究进展,为深入认识锥虫致病机理、研制有效锥虫病防控手段提供理论参考。 展开更多
关键词 锥虫 可变表面糖蛋白 表达调控 蛋白质结构 免疫应答
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红带锥蝽性别决定基因doublesex的克隆及表达分析 被引量:2
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作者 田芸嘉 郭云海 +3 位作者 张仪 朱丹 李元元 刘琴 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2023年第3期150-157,共8页
Doublesex是昆虫性别决定级联通路上的关键基因,其在控制昆虫性别分化中起着重要的作用。本研究旨在克隆、鉴定美洲锥虫病重要媒介红带锥蝽(Triatoma rubrofasciata)的性别决定基因doublesex(Trdsx),分析其不同发育时期的表达谱。基于... Doublesex是昆虫性别决定级联通路上的关键基因,其在控制昆虫性别分化中起着重要的作用。本研究旨在克隆、鉴定美洲锥虫病重要媒介红带锥蝽(Triatoma rubrofasciata)的性别决定基因doublesex(Trdsx),分析其不同发育时期的表达谱。基于红带锥蝽基因组数据库,比对Trdsx相关片段,分别以雌雄红带锥蝽cDNA为模板,采用PCR方法克隆Trdsx基因,利用生物信息软件对所得序列进行结构域预测、氨基酸序列比对和进化树分析。根据Trdsx特异性表达引物,利用real time RT-PCR方法研究其在红带锥蝽不同发育时期及雌雄个体的表达谱。从红带锥蝽雌、雄成虫中克隆获得一个雌、雄共有的Trdsx cDNA全长开放性读码框序列,命名为TrdsxB。TrdsxB长度为948 nt,编码315个氨基酸。结构域分析发现TrdsxB包含锌离子结合序列、具有保守的锌螯合残基C2H2C4的DM结构域和参与泛素介导的蛋白水解序列的UBA结构域。TrdsxB在卵中高表达,随后逐渐减少,在四期若虫降至最低,之后再次升高。TrdsxB雌、雄锥蝽中存在表达差异。本研究获得了红带锥蝽性别决定基因doublesex(TrdsxB)的全长开放性读码框序列,TrdsxB具有保守的结构域,其在雌、雄锥蝽体内存在表达差异。本研究结果将为红带锥蝽的性别调控机制和生物防制研究提供理论基础。 展开更多
关键词 红带锥蝽 性别决定 doublesex基因 分子克隆 表达分析
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大片形吸虫硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶的表达纯化及多克隆抗体制备
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作者 何宇婷 郭晴晴 +7 位作者 岳永程 贾静 韩艳辉 周岩 卢丽丹 唐文强 洪炀 傅志强 《中国动物传染病学报》 2025年第5期150-157,共8页
片形吸虫病主要是由大片形吸虫(Fasciola gigantica)和肝片形吸虫(Fasciola hepatica)寄生在草食性哺乳动物或人肝胆内引起的一种人畜共患寄生虫病。片形吸虫中存在的硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶(TGR)是其氧化还原系统中一个含硒的多功能... 片形吸虫病主要是由大片形吸虫(Fasciola gigantica)和肝片形吸虫(Fasciola hepatica)寄生在草食性哺乳动物或人肝胆内引起的一种人畜共患寄生虫病。片形吸虫中存在的硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶(TGR)是其氧化还原系统中一个含硒的多功能酶。本研究对大片形吸虫硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶(FgTGR)进行了克隆、表达及纯化,并制备其多克隆抗体。通过PCR方法扩增了含开放阅读框(ORF)的FgTGR序列与含硒蛋白序列的FgTGR序列(FgTGRsec),分别构建了克隆质粒pMD19T-FgTGR和表达质粒pET28a(+)-FgTGRsec。将pET28a(+)-FgTGRsec单独转入BL21(DE3)感受态细胞后进行诱导表达,此外,将pET28a(+)-FgTGRsec与pSUABC质粒共同转入BL21(DE3)感受态细胞后进行表达,并对表达后的这两种重组蛋白分别进行纯化。以纯化的重组FgTGR蛋白(rFgTGR)作为免疫抗原对BALB/c小鼠进行皮下免疫,制备多克隆抗体。FgTGR ORF为1920 bp,编码639个氨基酸,理论分子量约为70 kDa,FgTGRsec基因片段为1968 bp,编码656个氨基酸,表达的重组蛋白理论分子量约为72 kDa,两者在大肠杆菌中表达的重组蛋白在蛋白电泳结果中均符合预测大小。成功制备了针对rFgTGR的多克隆抗体,将该抗体1∶400稀释后作为蛋白免疫印迹实验的一抗,可成功地检测到rFgTGRsec条带。本研究成功表达了含硒蛋白和不含硒蛋白的重组FgTGR蛋白,制备了针对FgTGR蛋白的多克隆抗体,为FgTGR的酶动力学研究及其抑制物的筛选提供了基础。 展开更多
关键词 大片形吸虫 硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶 表达纯化 多克隆抗体
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