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应用实时高分辨率熔解曲线技术检测巴尔通体
被引量：
6
1
作者
刘云彦
宋秀平
+2 位作者
刘起勇
陈忠科
栗冬梅
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第11期1027-1032,共6页
目的 应用实时高分辨率熔解曲线PCR技术建立特异性强、灵敏度高和稳定性好快速检测巴尔通体物种方法。方法 查找巴尔通体属特有基因ssrA特异引物进行常规PCR扩增,随后将扩增产物连接到pEASY？-T5Zero克隆载体上制备标准品。优化扩增反...
目的 应用实时高分辨率熔解曲线PCR技术建立特异性强、灵敏度高和稳定性好快速检测巴尔通体物种方法。方法 查找巴尔通体属特有基因ssrA特异引物进行常规PCR扩增,随后将扩增产物连接到pEASY？-T5Zero克隆载体上制备标准品。优化扩增反应的退火温度和引物浓度,评估实时高分辨率熔解曲线方法的特异性、敏感性及重复性,并与常规PCR进行比较。结果 优化的退火温度为60℃,引物浓度均为300nmol/L。特异性实验结果显示只有巴尔通体物种扩增出荧光信号,且相对应的熔解温度值为81.05℃±0.31,阴性对照菌株均未见荧光信号和熔解曲线;敏感性实验结果显示在20μL的反应体系中,实时高分辨率熔解曲线方法检测汉赛巴尔通体物种最低检出限为3.82×101个拷贝,比常规PCR敏感性提高了100倍,此外也显示出良好的线性关系和扩增效率,相关系数R2分别为0.999,E值分别为98.4%。重复性实验结果显示组内和组间的变异系数值为0.30%~0.62%和0.29%~0.36%,在允许范围内。结论 建立的实时高分辨率熔解曲线PCR方法特异性强、灵敏度高、稳定性好,可快速地检测鉴定巴尔通体物种,为巴尔通体所引起的猫抓病、战壕热、心内膜炎、杆菌性血管瘤和卡瑞恩病等一系列疾病的早期快速诊断、监测和流行病学调查等研究提供有效手段。
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关键词
高分辨率熔解曲线
巴尔通体
猫抓病
战壕热
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职称材料
题名
应用实时高分辨率熔解曲线技术检测巴尔通体
被引量：
6
1
作者
刘云彦
宋秀平
刘起勇
陈忠科
栗冬梅
机构
中国疾病预防控制中心
传染病
预防
控制所
、传染病
预防
控制
国家
重点
实验室
中国疾病预防控制中心传染病预防控制所媒介生物控制室、传染病预防控制国家重点实验室/中国疾病预防控制中心传染病监测预警重点实验室
出处
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第11期1027-1032,共6页
基金
国家科技重大项目(No.2012ZX10004219-002)资助~~
文摘
目的 应用实时高分辨率熔解曲线PCR技术建立特异性强、灵敏度高和稳定性好快速检测巴尔通体物种方法。方法 查找巴尔通体属特有基因ssrA特异引物进行常规PCR扩增,随后将扩增产物连接到pEASY？-T5Zero克隆载体上制备标准品。优化扩增反应的退火温度和引物浓度,评估实时高分辨率熔解曲线方法的特异性、敏感性及重复性,并与常规PCR进行比较。结果 优化的退火温度为60℃,引物浓度均为300nmol/L。特异性实验结果显示只有巴尔通体物种扩增出荧光信号,且相对应的熔解温度值为81.05℃±0.31,阴性对照菌株均未见荧光信号和熔解曲线;敏感性实验结果显示在20μL的反应体系中,实时高分辨率熔解曲线方法检测汉赛巴尔通体物种最低检出限为3.82×101个拷贝,比常规PCR敏感性提高了100倍,此外也显示出良好的线性关系和扩增效率,相关系数R2分别为0.999,E值分别为98.4%。重复性实验结果显示组内和组间的变异系数值为0.30%~0.62%和0.29%~0.36%,在允许范围内。结论 建立的实时高分辨率熔解曲线PCR方法特异性强、灵敏度高、稳定性好,可快速地检测鉴定巴尔通体物种,为巴尔通体所引起的猫抓病、战壕热、心内膜炎、杆菌性血管瘤和卡瑞恩病等一系列疾病的早期快速诊断、监测和流行病学调查等研究提供有效手段。
关键词
高分辨率熔解曲线
巴尔通体
猫抓病
战壕热
Keywords
High Resolution Melting analysis
Bartonella~ cat scratch disease（CSD） ；trench fever
分类号
R379 [医药卫生—病原生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
应用实时高分辨率熔解曲线技术检测巴尔通体
刘云彦
宋秀平
刘起勇
陈忠科
栗冬梅
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015
6
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职称材料
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