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双重实时荧光定量PCR检测产志贺毒素大肠埃希菌stx_1和stx_2基因 被引量:10
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作者 赵爱兰 孟琼 +3 位作者 白向宁 刘学通 刘凯 熊衍文 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期241-244,共4页
目的建立一种检测产志贺毒素大肠埃希菌(STEC)的双重实时荧光定量PCR法。方法根据stx1和stx2及其变种序列,设计PCR引物和TaqMan探针,建立双重实时荧光定量PCR检测体系,进行灵敏度和特异性评价,并对STEC模拟粪便标本及动物粪便标本进行... 目的建立一种检测产志贺毒素大肠埃希菌(STEC)的双重实时荧光定量PCR法。方法根据stx1和stx2及其变种序列,设计PCR引物和TaqMan探针,建立双重实时荧光定量PCR检测体系,进行灵敏度和特异性评价,并对STEC模拟粪便标本及动物粪便标本进行检测分析。结果双重实时荧光定量PCR检测含志贺毒素基因重组质粒的灵敏度为1×102copies/反应体系;该法对17种常见肠道病原菌均无特异性扩增,对47株不同志贺毒素类型及变种的已知STEC菌株的检测特异性为100%;对模拟粪便标本的检测下限为3.55×103CFU/g;对动物粪便标本的检测阳性率高于细菌分离培养。结论建立的双重实时荧光定量PCR可作为不同志贺毒素类型及变种的STEC菌株的快速鉴定方法,亦可用于人感染性腹泻标本和动物粪便标本STEC感染的快速筛查。 展开更多
关键词 产志贺毒素大肠埃希菌 实时荧光定量聚合酶链反应 志贺毒素
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多重PCR检测肠出血性大肠埃希菌O157:H7 被引量:5
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作者 王涛 熊衍文 +3 位作者 白雪梅 刘凯 叶长芸 徐建国 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期264-266,共3页
目的建立一种快速、特异的检测肠出血性大肠埃希菌O157:H7菌株的多重PCR方法。方法针对O157:H7菌株的O157、H7抗原特异基因rfbEO157、fliCH7以及stx1、stx2、eaeA和hlyA四种毒力基因设计相应引物,在同一扩增体系中进行PCR反应,通过优化... 目的建立一种快速、特异的检测肠出血性大肠埃希菌O157:H7菌株的多重PCR方法。方法针对O157:H7菌株的O157、H7抗原特异基因rfbEO157、fliCH7以及stx1、stx2、eaeA和hlyA四种毒力基因设计相应引物,在同一扩增体系中进行PCR反应,通过优化多重PCR反应条件和循环参数,建立检测O157:H7菌株的多重PCR方法,并测定其特异性和灵敏度。结果 6对特异性引物各自扩增相应的基因片段,检测结果与常规PCR获得的结果一致。细菌纯培养物的检测灵敏度为1.33×104CFU。结论该多重PCR方法能在一次检测中同时反映待测菌株是否为肠出血性大肠埃希菌O157:H7及其携带毒力基因的情况,可为O157:H7大肠埃希菌感染的诊断及流行病学调查提供一种简便、快速的检测手段。 展开更多
关键词 大肠埃希菌O157:H7 特异性基因 毒力基因 多重PCR
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国内外食品源及动物源弯曲菌流行性及耐药性调查研究进展 被引量:8
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作者 陈霞 李娟 +2 位作者 骆鹏杰 袁敏 吴永宁 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第8期230-236,共7页
弯曲菌是重要的食品源性致病微生物,在很多动物中属于正常携带细菌,能通过食物链传递给人类,可引起人类肠炎的暴发流行和食物中毒。在畜牧养殖业大量抗菌药物的使用,造成动物源弯曲菌耐药性日益增加,给人类带来健康风险。发达国家很早... 弯曲菌是重要的食品源性致病微生物,在很多动物中属于正常携带细菌,能通过食物链传递给人类,可引起人类肠炎的暴发流行和食物中毒。在畜牧养殖业大量抗菌药物的使用,造成动物源弯曲菌耐药性日益增加,给人类带来健康风险。发达国家很早就开展了动物源性弯曲菌流行性和耐药性监测工作,很多发展中国家也对弯曲菌流行性和耐药性监测越来越重视,文章将就近年来国内外动物源性弯曲菌的流行及耐药情况调查工作做简单的总结,为中国动物源性弯曲菌流行性和耐药性工作的开展提供比较及理论分析数据。 展开更多
关键词 弯曲菌 流行性 耐药性
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外泌体内microRNA-135a跨血脑屏障转运的初步研究 被引量:9
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作者 刘辰庚 郝婷 +2 位作者 杨婷婷 孟双 王培昌 《中国医药导报》 CAS 2017年第33期22-25,30,共5页
目的初步研究外泌体内micro RNA-135a(miR-135a)跨血脑屏障和细胞转运的现象。方法提取APP/PS1双转基因小鼠脑脊液(CSF)的高miR-135a外泌体,将其注射入野生型小鼠脑室并干预SH-SY5Y细胞,检测小鼠外周血和培养基外泌体内miR-135a水平及SH... 目的初步研究外泌体内micro RNA-135a(miR-135a)跨血脑屏障和细胞转运的现象。方法提取APP/PS1双转基因小鼠脑脊液(CSF)的高miR-135a外泌体,将其注射入野生型小鼠脑室并干预SH-SY5Y细胞,检测小鼠外周血和培养基外泌体内miR-135a水平及SH-SY5Y细胞β分泌酶-1(BACE-1)的表达和活性。结果高miR-135a外泌体脑室注射能使野生型小鼠CSF和血浆外泌体miR-135a显著升高(P<0.05);经APP/PS1双转基因小鼠CSF源外泌体干预的SH-SY5Y细胞,其细胞内的miR-135a含量显著高于其他干预组和对照组(P<0.05);SH-SY5Y细胞的BACE-1活性显著降低(P<0.05),且其m RNA表达水平的变化趋势与活性变化趋势一致。结论外泌体可将脑脊液中的"高miR-135a"这一生物信号跨越血脑屏障传递至外周血,这为将血浆外泌体miR-135a作为阿尔茨海默病诊断生物标志物提供了更坚实的实验依据。 展开更多
关键词 阿尔茨海默病 MICRORNA 外泌体
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纹带棒状杆菌耐药性及院内传播特征分析 被引量:5
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作者 徐帅 王雪冰 +6 位作者 周海健 崔尧 马小涵 娄静 李丹 李振军 陈东科 《临床检验杂志》 CAS 2021年第11期817-821,共5页
目的揭示纹带棒状杆菌临床分离株耐药性及分子分型特征,为制定纹带棒状杆菌感染防治措施提供依据。方法收集从临床标本中分离的124株纹带棒状杆菌,经基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)和16S rRNA鉴定后,采用微量肉汤稀释... 目的揭示纹带棒状杆菌临床分离株耐药性及分子分型特征,为制定纹带棒状杆菌感染防治措施提供依据。方法收集从临床标本中分离的124株纹带棒状杆菌,经基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)和16S rRNA鉴定后,采用微量肉汤稀释法进行体外药敏试验,并分析交叉耐药情况;采用脉冲场凝胶电泳进行分子分型,并进行聚类分析。结果所有菌株均对环丙沙星耐药,96.0%的菌株为多重耐药菌株。124株纹带棒状杆菌可分为28个耐药谱,其中,美罗培南-克林霉素-四环素-头孢噻肟-环丙沙星-红霉素-青霉素为主要的耐药表型(37.9%,47/124)。克林霉素与红霉素、头孢噻肟与青霉素、美罗培南与青霉素之间存在交叉耐药。124株纹带棒状杆菌共分为44个型别,其中优势型别为CSS01.CN0058、CSS01.CN0022、CSS01.CN0055、CSS01.CN0015,具有相同或相似的耐药谱。结论纹带棒状杆菌已逐渐发展为院内感染常见病原菌,在院内传播过程中具有4个优势型别,耐药严重,传播能力强,应加强纹带棒状杆菌的系统监测。 展开更多
关键词 纹带棒状杆菌 药物敏感性 交叉耐药 分子分型 院内感染
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高危型HPV-18E6引起小鼠骨髓源性树突细胞p53的磷酸化
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作者 孙丽娜 韦超 +1 位作者 吉兴照 李振军 《中国医药导报》 CAS 2016年第36期22-25,F0004,共5页
目的 探讨高危型HPV-18E6对树突细胞中p53蛋白磷酸化的作用。方法 构建真核表达载体pGFP-18E6,转染小鼠骨髓源性的树突细胞,采用磷酸化的p53抗体免疫荧光化学染色,共聚焦显微镜下动态观察其表达水平。选用p53磷酸化位点的抗体(包括Ser6... 目的 探讨高危型HPV-18E6对树突细胞中p53蛋白磷酸化的作用。方法 构建真核表达载体pGFP-18E6,转染小鼠骨髓源性的树突细胞,采用磷酸化的p53抗体免疫荧光化学染色,共聚焦显微镜下动态观察其表达水平。选用p53磷酸化位点的抗体(包括Ser6、Ser9、Ser15、Ser20、Ser37、Ser46和Ser392)对GFP-18E6融合蛋白表达的细胞进行免疫细胞化学染色,进一步探讨磷酸化的p53蛋白在转染后12-72 h的动态表达水平。结果 树突细胞在转染pGFP-18E6和p EGFP-C1质粒后,GFP-18E6主要定位于细胞核内,而对照组只表达GFP的蛋白则均匀分布于树突细胞。GFP-18E6诱导了p53蛋白的Ser15、Ser20和Ser392三个位点磷酸化。激光共聚焦显微镜测量细胞荧光强度显示,GFP-18E6的表达与时间有相关性。结论 高危型HPV-18E6可以诱导树突细胞的p53蛋白发生多个位点的磷酸化,包括Ser15、Ser20和Ser392,p53多个位点磷酸化是病毒宿主相互作用的一种机制。 展开更多
关键词 HPV18-E6 树突细胞 p53磷酸化 定位
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