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应用实时高分辨率熔解曲线技术检测巴尔通体 被引量:6
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作者 刘云彦 宋秀平 +2 位作者 刘起勇 陈忠科 栗冬梅 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期1027-1032,共6页
目的 应用实时高分辨率熔解曲线PCR技术建立特异性强、灵敏度高和稳定性好快速检测巴尔通体物种方法。方法 查找巴尔通体属特有基因ssrA特异引物进行常规PCR扩增,随后将扩增产物连接到pEASY?-T5Zero克隆载体上制备标准品。优化扩增反... 目的 应用实时高分辨率熔解曲线PCR技术建立特异性强、灵敏度高和稳定性好快速检测巴尔通体物种方法。方法 查找巴尔通体属特有基因ssrA特异引物进行常规PCR扩增,随后将扩增产物连接到pEASY?-T5Zero克隆载体上制备标准品。优化扩增反应的退火温度和引物浓度,评估实时高分辨率熔解曲线方法的特异性、敏感性及重复性,并与常规PCR进行比较。结果 优化的退火温度为60℃,引物浓度均为300nmol/L。特异性实验结果显示只有巴尔通体物种扩增出荧光信号,且相对应的熔解温度值为81.05℃±0.31,阴性对照菌株均未见荧光信号和熔解曲线;敏感性实验结果显示在20μL的反应体系中,实时高分辨率熔解曲线方法检测汉赛巴尔通体物种最低检出限为3.82×101个拷贝,比常规PCR敏感性提高了100倍,此外也显示出良好的线性关系和扩增效率,相关系数R2分别为0.999,E值分别为98.4%。重复性实验结果显示组内和组间的变异系数值为0.30%~0.62%和0.29%~0.36%,在允许范围内。结论 建立的实时高分辨率熔解曲线PCR方法特异性强、灵敏度高、稳定性好,可快速地检测鉴定巴尔通体物种,为巴尔通体所引起的猫抓病、战壕热、心内膜炎、杆菌性血管瘤和卡瑞恩病等一系列疾病的早期快速诊断、监测和流行病学调查等研究提供有效手段。 展开更多
关键词 高分辨率熔解曲线 巴尔通体 猫抓病 战壕热
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奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌脉冲场凝胶电泳分型研究 被引量:5
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作者 李建平 周海健 +3 位作者 袁林 杨学云 王治才 胡松华 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期684-687,共4页
为探讨新疆北疆奶牛乳房炎致病菌的流行规律,本研究采用SmaⅠ酶切,脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型的方法对43株分离自新疆6个规模奶牛场隐性乳房炎奶样的金黄色葡萄球菌进行了分子分型比较研究。结果表明,所有菌株都能被PFGE法分型,43株金黄... 为探讨新疆北疆奶牛乳房炎致病菌的流行规律,本研究采用SmaⅠ酶切,脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型的方法对43株分离自新疆6个规模奶牛场隐性乳房炎奶样的金黄色葡萄球菌进行了分子分型比较研究。结果表明,所有菌株都能被PFGE法分型,43株金黄色葡萄球菌可分为A、B、C、D和E5个基因型。A型株(22株,51.2%)有13个亚型,相似度在81.8%~96.8%之间,在5个奶牛场均分离到,是主要的流行株;B型(25.6%)、C型(14.0%)、D型(7.0%)各型别内菌株间的相似度为100%,E型仅有1株。不同地区主要流行株有差别:乌鲁木齐主要流行A型菌株,昌吉以A型和B型菌株为主,而奎屯主要流行C型和B型。有2个奶牛场流行株只有1个基因型,也有2种基因型(3个牛场)或3种基因型(1个牛场)同时存在,但以1种为优势株。这些结果提示,不同地区主要流行株有差别,多数奶牛场以1种流行株感染为主,不同牛场可能流行相同的菌株,在较大地域范围内某些流行株具有侵染优势。 展开更多
关键词 奶牛乳房炎 金黄色葡萄球菌 脉冲场凝胶电泳 分型
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我国结核与非结核分枝杆菌混合感染的系统性回顾及Meta分析 被引量:5
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作者 王瑞白 许达 +1 位作者 赵秀芹 万康林 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第12期1147-1151,共5页
目的了解我国结核(TB)与非结核分枝杆菌(NTM)混合感染的流行现状以及对结核病防控的影响。方法检索中外文文献数据库,纳入2020年以前发表的包含大陆地区结核病患者临床样本中分枝杆菌分离鉴定数据的原始文献,系统性回顾分析TB/NTM的混... 目的了解我国结核(TB)与非结核分枝杆菌(NTM)混合感染的流行现状以及对结核病防控的影响。方法检索中外文文献数据库,纳入2020年以前发表的包含大陆地区结核病患者临床样本中分枝杆菌分离鉴定数据的原始文献,系统性回顾分析TB/NTM的混合感染情况。结果在疑似/确诊结核病患者中,分枝杆菌的粗分离率为35.4%(28.9%~41.9%),NTM的粗分离率为5.2%(4.7%~5.7%),NTM在分枝杆菌中的占比为12%(11.2%~12.7%);NTM/TB混合感染在疑似/确诊结核病人中的分离率为0.6%(0.2%~1.1%),在分枝杆菌中的占比为1.4%(1.1%~1.8%)。结论国内对NTM/TB混合感染的报道非常有限,检测方法和成本阻碍了混合感染的检出。 展开更多
关键词 结核 非结核分枝杆菌 混合感染 菌种鉴定
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mCIM、eCIM对碳青霉烯酶检测能力评估及CRE耐药特点分析 被引量:6
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作者 黄军祉 董爱英 +4 位作者 周海健 汪亚斯 付玉冰 张嫘 李宁 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第12期1809-1814,共6页
目的:评估碳青霉烯酶失活试验(modified carbapenem inactivation method,mCIM)、EDTA碳青霉烯酶失活试验(EDTAcarbapenem inactivation method,eCIM)及改良Hodge试验对肠杆菌科细菌不同基因型碳青霉烯酶的检测能力,分析碳青霉烯类耐药... 目的:评估碳青霉烯酶失活试验(modified carbapenem inactivation method,mCIM)、EDTA碳青霉烯酶失活试验(EDTAcarbapenem inactivation method,eCIM)及改良Hodge试验对肠杆菌科细菌不同基因型碳青霉烯酶的检测能力,分析碳青霉烯类耐药的肠杆菌科细菌(carbapenem-resistant Enterobacteriaceae,CRE)对临床常用药物最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC),便于临床合理选择用药。方法:收集华北理工大学附属医院2018年6月至12月临床标本中分离的CRE菌株40株,经VITEK 2 Compact全自动细菌鉴定/药敏系统进行鉴定及药敏试验,E-test法检测亚胺培南、美罗培南、替加环素、阿米卡星、左氧氟沙星、复方新诺明对CRE的MIC,微量肉汤稀释法检测多粘菌素的MIC。用mCIM、eCIM和改良Hodge试验检测CRE菌株产碳青霉烯酶的情况,用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测碳青霉烯类耐药基因(blaKPC、blaNDM、blaIMP、blaVIM、blaOXA-48)、超广谱β-内酰胺酶基因(SHV、TEM、CTX、OXA-1)、AmpC酶编码基因(FOX)及膜孔蛋白ompK35、ompK36基因。结果:40株CRE中38株确定携带碳青霉烯酶基因,其中携带blaKPC35株,包括同时携带blaNDM7株,blaKPC+blaNDM4株。改良Hodge试验和mCIM、e CIM试验对KPC型碳青霉烯酶的阳性率均为100%(38/38);mCIM、eCIM试验对NDM型碳青霉烯酶的阳性率为100%(3/3),改良Hodge试验对NDM型碳青霉烯酶的阳性率为0。耐药性分析:40株CRE菌株对临床常用抗菌药物如三代、四代头孢菌素,酶抑制剂复合制剂,氨曲南,亚胺培南及美罗培南的耐药率均为100%,对左氧氟沙星、阿米卡星、复方新诺明的耐药率分别为90.0%、60.0%和42.5%,尚未发现对替加环素及多黏菌素耐药的菌株。结论:mCIM、eCIM试验和改良Hodge试验对KPC型碳青霉烯酶的敏感度高,mCIM、eCIM试验对NDM型的敏感性高于改良Hodge试验;不同基因型的CRE菌株耐药情况不同,建议针对不同耐药表型的CRE感染,合理选择抗菌药物。 展开更多
关键词 mCIM、eCIM试验 改良HODGE试验 碳青霉烯类耐药的肠杆菌科细菌 耐药
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