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下呼吸道感染病原体检测方法研究进展 被引量:20
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作者 贾雪洋 任红宇 +2 位作者 聂旭冬 秦天 李建国 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期263-270,共8页
下呼吸道感染(lower respiratory tract infection, LRTI)是常见的呼吸系统疾病,包括肺炎、慢性支气管炎等多种感染类型,以抗生素治疗为主,尽快确定下呼吸道感染的病原体并采取针对性治疗可以大大降低下呼吸道感染死亡率,因此病原体的... 下呼吸道感染(lower respiratory tract infection, LRTI)是常见的呼吸系统疾病,包括肺炎、慢性支气管炎等多种感染类型,以抗生素治疗为主,尽快确定下呼吸道感染的病原体并采取针对性治疗可以大大降低下呼吸道感染死亡率,因此病原体的快速检测对疾病准确诊断和及时治疗相当关键。目前下呼吸道感染病原体检测技术较多,高通量、自动化和快速检测成为其主要发展趋势。本文介绍了下呼吸道感染检测标本类型和下呼吸道感染常见及非常见病原体,并着重对目前常用的病原体检测方法尤其是多种病原体同时检测方法进行综述,旨在指导临床根据疾病采集相应的样本类型,选择适宜的检测方法,快速确定感染病原体并及时治疗。 展开更多
关键词 下呼吸道 感染 病原体 检测 标本
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中国西南地区结核分枝杆菌临床分离菌株一线药物耐药状况调查 被引量:15
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作者 陈杏 李雨晴 +5 位作者 万李 刘海灿 赵秀芹 管茶香 万康林 袁秀琴 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期300-304,共5页
目的了解西南地区结核分枝杆菌临床分离株的耐药表型及其影响因素情况,为结核病的预防和控制提供基础参考数据。方法选取中国西南4个地区(贵州、广西、四川和重庆)2006—2013年从结核病患者痰标本中分离培养的500株结核分枝杆菌,用比例... 目的了解西南地区结核分枝杆菌临床分离株的耐药表型及其影响因素情况,为结核病的预防和控制提供基础参考数据。方法选取中国西南4个地区(贵州、广西、四川和重庆)2006—2013年从结核病患者痰标本中分离培养的500株结核分枝杆菌,用比例法药物敏感试验对4种一线抗结核药物进行药物敏感性检测,用SPSS22.0中的χ~2检验和Logistic回归进行统计学分析。结果 500株结核分枝杆菌临床分离株,对INH、RFP、EMB和SM的耐药率分别为30.40%、26.00%、9.80%和24.40%,总体耐药率和耐多药率分别是40.60%和27.20%;贵州、四川、广西和重庆的总耐药率和MDR率分别为64.10%和46.15%、59.54%和51.90%、28.88%和14.97%、20.19%和3.85%。χ~2检验结果显示,各地区间菌株对4种药物的耐药率、总体耐药率和耐多药率差异均有统计学意义(P<0.05);多因素Logistic回归分析结果显示,地区和病例类型是结核病耐药及耐多药发生的影响因素(P<0.05)。结论西南地区,特别是贵州和四川的耐药结核病、尤其是耐多药结核病的流行状况严峻。应加强结核分枝杆菌耐药性监测,以指导临床用药和预防控制耐药结核病的发生和流行。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 耐药性 LOGISTIC回归分析
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福建省临床分离非结核分枝杆菌菌种分布研究 被引量:35
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作者 黄明翔 万康林 +2 位作者 陈力舟 张丽水 李丹 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期1227-1230,共4页
目的分析我院临床分离非结核分枝杆菌(NTM)菌株,探讨福建省NTM临床分离率和菌种分布情况。方法对我院2009-2012年临床分离6 362株分枝杆菌进行结核分枝杆菌复合群(MTBC)与NTM鉴别,对鉴定为NTM菌株应用hsp65-和rpoB-PCR-RFLP进行菌种鉴... 目的分析我院临床分离非结核分枝杆菌(NTM)菌株,探讨福建省NTM临床分离率和菌种分布情况。方法对我院2009-2012年临床分离6 362株分枝杆菌进行结核分枝杆菌复合群(MTBC)与NTM鉴别,对鉴定为NTM菌株应用hsp65-和rpoB-PCR-RFLP进行菌种鉴定。结果 6 362株临床分离分枝杆菌共鉴别出649株NTM。鉴别出的649株NTM菌株,经hsp65-和rpoB-PCR-RFLP鉴定,菌种分布达24个种,其中菌株数量前3位菌种为:胞内分枝杆菌(M.intracellulare)302株(46.5%),鸟分枝杆菌(M.avium)138株(21.3%),脓肿分枝杆菌(M.abscessus)81株(12.5%)。结论 2009-2012年福建省NTM临床分离率占分枝杆菌培养阳性菌株的10.2%,NTM种类多,以鸟-胞内分枝杆菌复合群(MAC)为福建省NTM的主要流行菌种,占总数的67.8%。 展开更多
关键词 非结核分枝杆菌 PCR-RFLP 菌种鉴定
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IPCC第五次评估报告气候变化对人类福祉影响的新认知 被引量:44
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作者 张存杰 黄大鹏 +1 位作者 刘昌义 刘起勇 《气候变化研究进展》 CSCD 北大核心 2014年第4期246-250,共5页
IPCC第五次评估报告(AR5)第二工作组(WGⅡ)报告评估了气候变化对人类健康、人类安全、生计与贫困的影响,指出气候变化已经对人类健康和安全造成了负面影响,气候变化、气候变率和极端气候事件给城市和农村的贫困人口增添了额外的负担,与... IPCC第五次评估报告(AR5)第二工作组(WGⅡ)报告评估了气候变化对人类健康、人类安全、生计与贫困的影响,指出气候变化已经对人类健康和安全造成了负面影响,气候变化、气候变率和极端气候事件给城市和农村的贫困人口增添了额外的负担,与气候变化相关的风险增大。21世纪的气候变化,将继续加剧现有健康问题,增加人类的迁徙,放大冲突的驱动因素的影响,对许多国家的关键基础设施造成不利影响,给小岛国和有很长海岸线国家的领土完整带来风险;整个21世纪,气候变化将减缓经济增长,进一步威胁粮食安全,使减贫更为困难,贫困问题更加突出。 展开更多
关键词 气候变化 影响与适应 人类健康 人类安全 生计与贫困
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诺卡氏菌研究进展 被引量:52
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作者 张媛 张媛媛 +1 位作者 李振军 万康林 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期628-634,共7页
目的诺卡氏菌是一种新发的人兽共患病病原,呈全球性分布,它能引起不同程度的人类疾病。近年来,病例报道明显增加,但大多数人对该菌不熟悉,本文就诺卡氏菌的分布、感染途径、致病性、分类及鉴定等做一综述。
关键词 诺卡菌 分类 鉴定
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44株甘肃疑似非结核分枝杆菌临床分离株的菌种鉴定 被引量:12
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作者 连璐璐 姜元 +7 位作者 赵秀芹 同重湘 余琴 张敬蕊 董海燕 张媛媛 吴移谋 万康林 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期343-348,共6页
目的对甘肃44株疑似非结核分枝杆菌临床分离株进行菌种鉴定。方法收集2010年甘肃省兰州市胸科医院从结核病患者痰标本中分离的、抗酸染色阳性和改良罗氏培养基,TCH和PNB鉴别培养基培养鉴定为非结核分枝杆菌(non-tuberculosis Mycobacter... 目的对甘肃44株疑似非结核分枝杆菌临床分离株进行菌种鉴定。方法收集2010年甘肃省兰州市胸科医院从结核病患者痰标本中分离的、抗酸染色阳性和改良罗氏培养基,TCH和PNB鉴别培养基培养鉴定为非结核分枝杆菌(non-tuberculosis Mycobacteria,NTM),采用rpoB-PRA和PCR产物DNA测序等分子生物学方法进行细菌种的鉴定。结果共对44株疑似非结核分枝杆菌临床分离株进行了鉴定。经rpoB-PRA、rpoB和hsp65基因DNA测序分析,其中非结核分枝杆菌13株(29.55%),包括龟分枝杆菌(M.chelonae)5株,戈登分枝杆菌(M.gordonae)4株,胞内分枝杆菌(M.intracellulare)2株,赛特分枝杆菌(M.setense)1株,耻垢分枝杆菌(M.smegmatis)1株;诺卡菌(Nocardia)31株(70.45%),其中鼻疽诺卡菌(N.farcinica)30株,卡尔涅亚诺卡菌(N.carnea)1株。结论抗酸染色阳性、PNB/TCH鉴定为非结核分枝杆菌临床分离株中包含不同种类的非结核分枝杆菌和诺卡菌,应开展进一步菌种鉴定,以便于临床正确诊断和合理治疗。 展开更多
关键词 非结核分枝杆菌 诺卡菌 鉴定 RPOB PRA
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诺卡菌的培养和染色特征研究 被引量:17
7
作者 张媛 张媛媛 +1 位作者 万康林 李振军 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期230-236,共7页
目的了解诺卡菌的培养及染色特征。方法采用脑心浸液琼脂培养基、哥伦比亚血琼脂基础培养基和沙保弱琼脂培养基,分别在25℃和37℃条件下培养,观察不同种类诺卡菌的生长时间和菌落生长形态。应用革兰染色、抗酸染色及改良抗酸染色方法进... 目的了解诺卡菌的培养及染色特征。方法采用脑心浸液琼脂培养基、哥伦比亚血琼脂基础培养基和沙保弱琼脂培养基,分别在25℃和37℃条件下培养,观察不同种类诺卡菌的生长时间和菌落生长形态。应用革兰染色、抗酸染色及改良抗酸染色方法进行染色,观察诺卡菌的染色特征和形态特点。结果共对从德国的DSMZ菌种保藏中心购得的7个种23株诺卡菌标准参照菌株进行了培养观察。诺卡菌的菌落形态和颜色多样,菌落形态有针尖状、雪花状、菜花状、不规则状等,菌落颜色有白色、黄色、橙红色、灰色等。诺卡菌为革兰氏阳性菌,弱抗酸性菌,用不同浓度的脱色液进行抗酸染色,所用脱色液浓度越低,抗酸染色阳性率越高,硫酸脱色液浓度为0.125%时,诺卡菌抗酸染色阳性率最高。结论诺卡菌具有独特的培养和染色特征,菌落形态和镜下形态多样。诺卡菌为弱抗酸菌,0.125%硫酸脱色液的改良抗酸染色方法检测阳性率最高。 展开更多
关键词 诺卡氏菌 培养 染色 改良抗酸染色
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hsp65 and rpoB PCR-RFLP用于龟/脓肿分枝杆菌复合群种的快速鉴定(英文) 被引量:12
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作者 李艳冰 张媛媛 +4 位作者 黄明翔 赵秀芹 张丽水 万康林 刘文恩 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期645-652,共8页
目的探讨和评价hsp65and rpoB PCR-RFLP用于龟/脓肿分枝杆菌复合群种的快速鉴定。方法收集经PNB/TCH鉴别培养基表型鉴定和16s rRNA基因测序鉴定为龟/脓肿分枝杆菌复合群的临床分离菌株,用hsp65and rpoBPCR-RFLP进行种/亚种鉴定。结果经... 目的探讨和评价hsp65and rpoB PCR-RFLP用于龟/脓肿分枝杆菌复合群种的快速鉴定。方法收集经PNB/TCH鉴别培养基表型鉴定和16s rRNA基因测序鉴定为龟/脓肿分枝杆菌复合群的临床分离菌株,用hsp65and rpoBPCR-RFLP进行种/亚种鉴定。结果经表型鉴定为非结核分枝杆菌的27株临床菌株,16s rRNA基因测序分析与龟/脓肿分枝杆菌的同源性达到99.7%。经hsp65PCR-RFLP and rpoBPCR-RFLP鉴定18株为脓肿分枝杆菌(M.abscessus),4株为溃疡分枝杆菌(M.absecces),另5株表现为独特的指纹特征,可能是一个新的亚种。结论能够快速进行龟/脓肿分枝杆菌复合群种/亚种的鉴定。 展开更多
关键词 非结核分枝杆菌 龟/脓肿分枝杆菌复合群 PCR-RFLP
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耐多药结核分枝杆菌对喹诺酮类药物的耐药性与gyr基因突变的初步研究 被引量:5
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作者 赵丽丽 夏强 +2 位作者 赵秀芹 刘志广 万康林 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期390-393,共4页
目的分析耐多药结核分枝杆菌(Multiple drug-resistant tuberculosis,MDR-TB)临床分离株的gyr基因突变特点,探讨MDR-TB对喹诺酮类药物耐药产生与gyr基因突变的关系。方法采用比例法对耐多药结核临床分离菌株进行氧氟沙星的药物敏感性检... 目的分析耐多药结核分枝杆菌(Multiple drug-resistant tuberculosis,MDR-TB)临床分离株的gyr基因突变特点,探讨MDR-TB对喹诺酮类药物耐药产生与gyr基因突变的关系。方法采用比例法对耐多药结核临床分离菌株进行氧氟沙星的药物敏感性检测,应用DNA直接测序法检测MDR-TB的gyr基因突变情况。结果 125株MDR-TB临床分离株中,50株对喹诺酮类耐药,耐药率为40%。50株耐药菌株中,40株gyr基因发生突变:其中39株gyrA基因突变,突变率为78%,突变位点包括90,91和94位氨基酸;5株gyrB基因突变,其中4株合并gyrA基因突变,gyrB基因突变位点为500,506,534和539位氨基酸。结论 MDR-TB中的喹诺酮类药物耐药态势比较严峻,其对喹诺酮类药物耐药机制主要与gyrA基因突变有关。 展开更多
关键词 喹诺酮 GYRA基因 gyrB基因 耐多药结核分枝杆菌 耐药决定区
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2株胞内分枝杆菌临床分离株的鉴定 被引量:5
10
作者 潘爱珍 张媛媛 +2 位作者 王心 赵秀芹 万康林 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期218-221,共4页
目的联合应用多种分子生物学技术进行分枝杆菌菌种鉴定。方法从经PNB、TCH鉴别培养基鉴定为结核分枝杆菌的临床分离菌株285株中选取6株,其中包括oxyR-ahpC基因间隔区检测时PCR产物分子量异常的2株和另外随机选择的PCR产物分子量正常者4... 目的联合应用多种分子生物学技术进行分枝杆菌菌种鉴定。方法从经PNB、TCH鉴别培养基鉴定为结核分枝杆菌的临床分离菌株285株中选取6株,其中包括oxyR-ahpC基因间隔区检测时PCR产物分子量异常的2株和另外随机选择的PCR产物分子量正常者4株,采用H37Rv、鸟分枝杆菌95001和胞内分支杆菌95002做对照,PCR扩增oxyR-ahpC基因间隔区,对其产物进行测序和网上同源性(H37Rv、U18263、U71061)比对。同时,采用多位点PCR扩增和hsp65 PCR-限制性酶切片段长度多态性分析,从而判定分枝杆菌菌种类型。结果经PNB、TCH鉴别培养基鉴定初步判定为结核分枝杆菌的285株临床分离株中2株临床菌株oxyR-ahpC基因间隔区PCR产物大小约为1 000bp,DNA序列与胞内分枝杆菌同源性极高,达99%,而与同片段序列结核分枝杆菌H37Rv的差异大,同源性为84%。多位点PCR指纹显示为非分枝结核杆菌,hsp65 PCR-RLFP/RFLP指纹与95002一致。结论2株oxyR-ahpC基因间隔区PCR产物分子量异常的经PNB、TCH鉴别培养基鉴定为结核分枝杆菌的临床分离株确定为胞内分枝杆菌。多种分子生物学技术联合应用能够快速、简便、更准确地鉴定分枝杆菌菌种。 展开更多
关键词 分枝杆菌 结核分枝杆菌 胞内分枝杆菌 菌种鉴定
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结核分枝杆菌链霉素耐药临床分离株rpsL基因突变特征分析 被引量:6
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作者 魏淑贞 赵秀芹 +1 位作者 刘志广 万康林 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期1097-1100,共4页
目的了解我国结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)rpsL基因突变特征及其与链霉素耐药的相关性,并评价其应用价值。方法对302株结核分枝杆菌临床分离株的rpsL基因采用聚合酶链反应-直接测序(PCR-DS)进行检测。结果 59株对INH、... 目的了解我国结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)rpsL基因突变特征及其与链霉素耐药的相关性,并评价其应用价值。方法对302株结核分枝杆菌临床分离株的rpsL基因采用聚合酶链反应-直接测序(PCR-DS)进行检测。结果 59株对INH、RFP、SM、EMB和PAS全部敏感,rpsL基因没有突变,61株对SM敏感的耐药株有6株突变,SM敏感菌株突变率为5.00%(6/120)。182株SM耐药MTB,rpsL基因突变率为70.33%,其中43位密码子赖氨酸转变为精氨酸(Lys43Arg)突变率为52.20%;88位密码子有4种突变类型,突变率为17.58%;86位密码子精氨酸转变为谷氨酰胺(Arg86Gln)突变率为0.55%。SM耐药株的rpsL基因突变率明显高于SM敏感株的基因突变率,两者之间的差异有统计学意义,χ2=125.05,P<0.05。结论 rpsL基因突变与结核分枝杆菌链霉素耐药高度相关,其中Lys43Arg突变是主要突变类型,PCR-DS检测rpsL基因突变可以用于临床结核菌链霉素耐药的快速检测。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 链霉素 耐药 基因突变
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结核分枝杆菌分子分型技术研究进展 被引量:4
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作者 吕冰 高守一 万康林 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期487-490,494,共5页
关键词 结核分枝杆菌感染 分子分型技术 分子流行病学 全基因组序列 人类健康 H37RV 结核病 致病机制
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山西省某医院发现的携带碳青霉烯酶基因的肺炎克雷伯菌的流行特征研究(英文) 被引量:3
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作者 庞慧 弓艳娥 +6 位作者 袁敏 蒋毅 郭步平 龚林 李水仙 李娟 万康林 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期1110-1115,共6页
目的肺炎克雷伯菌是一类重要的引起院内感染的病原微生物,可导致机体多个器官和组织受累。本研究主要是针对携带有碳青霉烯酶基因的肺炎克雷伯菌进行分子特征和流行状况的评价。方法本研究中所用菌株是2008-2012年分离自山西省长治某医... 目的肺炎克雷伯菌是一类重要的引起院内感染的病原微生物,可导致机体多个器官和组织受累。本研究主要是针对携带有碳青霉烯酶基因的肺炎克雷伯菌进行分子特征和流行状况的评价。方法本研究中所用菌株是2008-2012年分离自山西省长治某医院的标本,通过琼脂扩散和E纸条试验来分析菌株的药敏状况。碳青霉烯酶的产生情况经Carba NP试验来确认,而碳青霉烯酶基因的测定及确证由PCR和DNA测序完成。最后,将碳青霉烯类抗生素耐药菌株进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)和多位点序列分型(MLST)研究。结果 1 297株临床分离的肺炎克雷伯菌中,有9株对碳青霉烯类抗生素的耐药株,它们都是产A组碳青霉烯酶、肺炎克雷伯菌的碳青霉烯酶(KPC-2)基因阳性,而其它的检测基因均为阴性。尽管9株菌都属于MLST中的ST11型,但就PFGE分析发现,可能存在两次院内感染的传播:分别在2010和2012年。结论携带KPC-2基因的耐药肺炎克雷伯菌已经在医院内传播,加强院内严密监控和制定严格的感染控制措施已是刻不容缓。 展开更多
关键词 肺炎克雷伯菌 碳青霉烯酶 药物敏感性试验 脉冲场凝胶电泳 多位点序列分型
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福建省46株耐多药结核分枝杆菌rpoB基因突变特征分析 被引量:2
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作者 魏淑贞 陈求扬 +5 位作者 万康林 林淑芳 梁庆福 赵永 林建 郑金凤 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期913-916,共4页
目的阐明来源于福建省耐药性调查的46株耐多药结核分枝杆菌rpoB基因的突变特征,为福建省耐多药结核病快速诊断方法的建立提供一定的分子基础。方法对福建省9个监测点进行耐药性调查,收集菌株进行菌种鉴定、药物敏感性试验。选取46株耐... 目的阐明来源于福建省耐药性调查的46株耐多药结核分枝杆菌rpoB基因的突变特征,为福建省耐多药结核病快速诊断方法的建立提供一定的分子基础。方法对福建省9个监测点进行耐药性调查,收集菌株进行菌种鉴定、药物敏感性试验。选取46株耐多药结核分枝杆菌和15株全敏感株,扩增包含rpoB热点突变区的基因片段,测序后比对分析。结果 15株全敏感株未检测到突变。42株耐多药结核分枝杆菌rpoB基因检测到13种突变类型,涉及10个氨基酸,突变率为91.30%。突变均位于核心突变区内,包括9种点突变、1个插入突变和3种联合突变,531位和526位密码子的点突变率之和达69.57%。结论福建省耐多药结核分枝杆菌杆rpoB基因最常见的点突变发生于531位和526位。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 耐多药 利福平 RPOB基因 突变
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利用分枝杆菌的重组工程系统将TAP标签敲入耻垢分枝杆菌的方法研究 被引量:2
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作者 赵丽丽 夏强 +1 位作者 赵秀芹 万康林 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期539-542,546,共5页
目的利用pJV53质粒编码的分枝杆菌重组工程系统将TAP标签敲入耻垢分枝杆菌基因组。方法将pJV53质粒转入耻垢分枝杆菌,使其表达重组蛋白,制备带有重组蛋白的感受态细胞;从质粒pBS1479中扩增出tap片段,从质粒pSMT3中扩增hyg片段,从耻垢分... 目的利用pJV53质粒编码的分枝杆菌重组工程系统将TAP标签敲入耻垢分枝杆菌基因组。方法将pJV53质粒转入耻垢分枝杆菌,使其表达重组蛋白,制备带有重组蛋白的感受态细胞;从质粒pBS1479中扩增出tap片段,从质粒pSMT3中扩增hyg片段,从耻垢分枝杆菌基因组中分别扩增出aasf基因及其5′端非编码区片段AASF5和aasf基因下游3′端非编码区片段AASF3,利用重叠PCR将以上4个片段拼接在一起,形成最终的敲入片段A5THA3;将构建好的敲入片段转入感受态细胞,使其重组入耻垢分枝杆菌基因组中,PCR和DNA测序鉴定敲入效果。结果重叠PCR技术得到全长为3 200 bp的敲入片段,PCR与DNA测序结果证实带有TAP标签的A5THA3片段已成功敲入耻垢分枝杆菌基因组中。结论成功将TAP标签敲入耻垢分枝杆菌基因组,为下一步进行目的基因功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 重组工程系统 pJV53质粒 串联亲和纯化标签 敲入片段 重叠PCR 耻垢分枝杆菌
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TaqMan-MGB荧光定量PCR快速检测结核分枝杆菌katG基因突变 被引量:2
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作者 潘爱珍 赵秀芹 +3 位作者 张媛媛 王晓萌 柳正卫 万康林 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期14-18,23,共6页
目的建立一种特异、灵敏、快速检测结核分枝杆菌katG基因突变的TaqMan-MGB荧光定量PCR方法。方法根据结核分枝杆菌katG基因315位点突变的特点,设计一对特异性TaqMan-MGB探针和引物,通过反应条件优化,建立荧光定量PCR方法;用克隆到PMD18-... 目的建立一种特异、灵敏、快速检测结核分枝杆菌katG基因突变的TaqMan-MGB荧光定量PCR方法。方法根据结核分枝杆菌katG基因315位点突变的特点,设计一对特异性TaqMan-MGB探针和引物,通过反应条件优化,建立荧光定量PCR方法;用克隆到PMD18-T载体上katG基因阳性标准品及不同菌株来评价该方法的特异性、敏感性和重复性。结果灵敏度高,检测目的基因的最低检测下限10copies/μL,比常规PCR灵敏高100倍;特异性高,检测16株非结核分枝杆菌标准株和7种常见呼吸道感染细菌的标准株均为阴性;与测序法相比,野生型和突变型探针的敏感性和特异性均为100%。重复性好,批内批间CT值变异系数均小于1%。结论 TaqMan-MGB荧光定量PCR的方法能特异、灵敏、快速检测结核杆菌菌株katG315位点突变。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 KATG基因 TaqMan-MGB荧光定量PCR
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多位点PCR用于安徽391株分枝杆菌临床分离株的快速鉴定 被引量:2
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作者 包训迪 连璐璐 +4 位作者 徐东芳 赵秀芹 董海燕 王庆 万康林 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期659-663,共5页
目的评价多位点PCR用于分枝杆菌临床分离株快速鉴定效果。方法收集从临床结核病患者分离到的抗酸染色阳性的培养物,经PNB/TCH鉴别培养基进行培养鉴定后,采用聚合酶链反应(PCR)对16SrRNA、Rv0577、IS1561、Rv1510、Rv1970、Rv3877/8和Rv3... 目的评价多位点PCR用于分枝杆菌临床分离株快速鉴定效果。方法收集从临床结核病患者分离到的抗酸染色阳性的培养物,经PNB/TCH鉴别培养基进行培养鉴定后,采用聚合酶链反应(PCR)对16SrRNA、Rv0577、IS1561、Rv1510、Rv1970、Rv3877/8和Rv3120基因位点进行扩增,鉴定至种,再经rpoB-PRA、hsp65和rpoB基因测序进行验证。结果共对391株分枝杆菌临床分离株应用多位点PCR进行了鉴定,结果显示结核分枝杆菌378株,非洲分枝杆菌I型6株,非结核分枝杆菌7株。7株非结核分枝杆菌分别为鸟分枝杆菌1株,马赛分枝杆菌2株,胞内分枝杆菌4株。而PNB/TCH鉴别培养基培养鉴定结果为结核分枝杆菌复合群385株,非结核分枝杆菌6株。多位点PCR结果与rpoB-PRA、hsp65和rpoB基因测序结果一致。结论多位点PCR技术鉴定分枝杆菌菌种结果准确可靠,且具有简便和快速等优点,有较大的分子流行病学应用价值,且对于临床诊断和治疗都具有重要意义。 展开更多
关键词 多位点聚合酶链反应 分枝杆菌 菌种鉴定
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一株马鼻疽诺卡菌临床分离株的鉴定 被引量:2
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作者 李晓亮 张媛媛 +4 位作者 赵平 赵秀芹 陈祥 焦新安 万康林 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期411-413,417,共4页
目的应用基因测序分析进行诺卡菌(Nocardia farcinica)鉴定。方法将临床分离菌株BJ7菌株与诺卡菌标准参照菌株AY756551和结核分枝杆菌H37Rv接种L-J、PNB/TCH鉴别培养基。用生长良好的培养物提取全基因组DNA。设计引物,对rpoB、16S rDNA... 目的应用基因测序分析进行诺卡菌(Nocardia farcinica)鉴定。方法将临床分离菌株BJ7菌株与诺卡菌标准参照菌株AY756551和结核分枝杆菌H37Rv接种L-J、PNB/TCH鉴别培养基。用生长良好的培养物提取全基因组DNA。设计引物,对rpoB、16S rDNA基因片段进行PCR扩增,对其PCR产物进行测序和网上同源性比对。结果 PNB/TCH鉴别培养基鉴定BJ7为非结核分枝杆菌,进化树中BJ7 16S rDNA序列亲缘关系与诺卡菌标准参照菌株AY756551比较相近,且16S rDNA和rpoBDNA序列与马鼻疽诺卡菌同源性极高,分别达到100%和99%。结论从结核病患者分离的菌株BJ7为马鼻疽诺卡菌。DNA测序分析能够快速、简便、准确地鉴定诺卡菌。 展开更多
关键词 非结核分枝杆菌 马鼻疽诺卡菌 菌种鉴定 测序分析
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将串联亲和纯化标签敲入耻垢分枝杆菌基因组的方法研究(英文)
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作者 赵秀芹 夏强 +1 位作者 赵丽丽 万康林 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期1167-1172,共6页
目的利用pJV53质粒编码的分枝杆菌重组工程系统将串取亲和纯化(TAP)标签敲入耻垢分枝杆菌基因组。方法从质粒pBS1479中扩增出tap片段,从质粒pSMT3中扩增hyg片段,从耻垢分枝杆菌基因组中分别扩增出aasf基因及其5’端非编码区片段AASF5和a... 目的利用pJV53质粒编码的分枝杆菌重组工程系统将串取亲和纯化(TAP)标签敲入耻垢分枝杆菌基因组。方法从质粒pBS1479中扩增出tap片段,从质粒pSMT3中扩增hyg片段,从耻垢分枝杆菌基因组中分别扩增出aasf基因及其5’端非编码区片段AASF5和aasf基因下游3’端非编码区片段AASF3,利用重叠PCR将以上4个片段拼接在一起,形成最终的敲入片段A5THA3;将pJV53质粒转入耻垢分枝杆菌,使其表达重组蛋白,制备带有重组蛋白的感受态细胞;将构建好的敲入片段转入感受态细胞,使其重组入耻垢分枝杆菌基因组中,PCR和DNA测序鉴定敲入效果。结果 PCR与DNA测序结果证实带有TAP标签的A5THA3片段已成功敲入耻垢分枝杆菌基因组中。结论成功将TAP标签敲入耻垢分枝杆菌基因组,为下一步进行目的基因功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 重组工程系统 串联亲和纯化标签 敲入片段 重叠PCR 耻垢分枝杆菌
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甘肃省临床分离结核分枝杆菌MLVA分型初步研究 被引量:9
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作者 同重湘 赵秀芹 +6 位作者 马建军 刘志广 曹文静 杨永红 吕冰 姜元 万康林 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期627-630,共4页
目的随机选取2005-2007年间甘肃省肺科医院临床分离结核分枝杆菌菌株,通过多位点可变数目串联重复序列(Multiple locus variable numbers of tandemrepeats analysis,MLVA)分型,了解甘肃结核分枝杆菌流行菌株基因型情况。方法选择标化... 目的随机选取2005-2007年间甘肃省肺科医院临床分离结核分枝杆菌菌株,通过多位点可变数目串联重复序列(Multiple locus variable numbers of tandemrepeats analysis,MLVA)分型,了解甘肃结核分枝杆菌流行菌株基因型情况。方法选择标化的15个VNTR位点,对临床分离菌株DNA进行检测,DNA指纹图谱使用Bio Numerics4.5软件进行统计分析,得出聚类分析结果。结果 228株结核分枝杆菌被分为4大基因群,7个大基因类型,分别包含13(5.7%)、3(1.3%)、7(3.1%)、1(0.4%)、171(75%)、31(13.6%)、2(0.9%)个株菌;在株水平基因分型上,93(40.8%)株为单菌株基因型;其余菌株基因型分别包含2-10株结核分枝杆菌,共构成132个基因簇。结论甘肃结核分枝杆菌菌株存在丰富的基因多态性,ML-VA方法具有较高的基因分型能力,可以满足结核分枝杆菌株水平DNA分型的需要。甘肃省结核分枝杆菌流行株主要为北京家族基因型菌株。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 多位点可变数目串联重复序列 基因分型 北京家族基因型
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