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抗真菌蛋白分子生物学研究进展
被引量：
3
1
作者
刘柱
胡新文
+1 位作者
刘志昕
郭建春
《莱阳农学院学报》
2001年第3期197-201,共5页
对几种抗真菌蛋白的分类、功能进行了综述 。
关键词
抗真菌蛋白
研究进展
分类
分子生物学
几丁质酶
渗透蛋白
真菌病害
在线阅读
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职称材料
萝卜抗真菌蛋白Rs-AFP_2基因PCR定点突变及其在大肠杆菌中的表达
2
作者
刘柱
胡新文
+1 位作者
朱建清
杨志荣
《西南农业学报》
CSCD
2002年第3期85-89,共5页
根据已报道的萝卜抗真菌蛋白Rs AFP2 基因序列 ,结合基因及其表达调控中遗传密码的偏爱性 ,人工合成引物 ,利用PCR重叠延伸法 ,使编码序列区的部分核苷酸突变 ,采用嵌套PCR ,迅速克隆到目的基因片段Rs AFPm ,连接到 pGEM Teasy载体上 ,...
根据已报道的萝卜抗真菌蛋白Rs AFP2 基因序列 ,结合基因及其表达调控中遗传密码的偏爱性 ,人工合成引物 ,利用PCR重叠延伸法 ,使编码序列区的部分核苷酸突变 ,采用嵌套PCR ,迅速克隆到目的基因片段Rs AFPm ,连接到 pGEM Teasy载体上 ,转化大肠杆菌XL1菌株 ,筛选到阳性克隆。序列分析结果表明 ,PCR产物全长 2 40bp ,有一个阅读框 ,编码 2 9个氨基酸的信号肽和 5 1个氨基酸的抗真菌蛋白 ,与突变前的Rs AFP2 基因相比 ,在编码区第 3号氨基酸Lys相差一个碱基 (TTG→TTA) ,第 5号氨基酸Gln相差一个碱基 (CAG→CAA) ,第 6号稀有密码Arg相差两个碱基 (CAG→CGA) ,但二者编码产生相同。重新合成引物 ,将切除信号肽的Rs AFP2 基因和Rs AFPm基因分别克隆到pET 2 1b(+ )质粒载体上 ,导入大肠杆菌BL2 1菌株。Tricine SDS PAGE电泳显示工程菌中存在 6KD左右的目的蛋白带 ;软件分析显示 ,突变后pETAFPm的表达产物约为突变前 pETAFPo表达产物的2倍 ;抑菌结果表明 ,pETAFPm表达产物的抑菌半径大于 pETAFP2 表达产物的抑菌半径。这些都说明改造后的Rs AFPm基因与Rs AFP2 基因相比 ,已有效的提高表达量。
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关键词
大肠杆菌
密码偏爱性
PCR定点突变
萝卜抗真菌蛋白
Rs-AFP2
基因表达
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职称材料
题名
抗真菌蛋白分子生物学研究进展
被引量：
3
1
作者
刘柱
胡新文
刘志昕
郭建春
机构
中国热带农科院热带作物生物技术国家重点实验室
出处
《莱阳农学院学报》
2001年第3期197-201,共5页
文摘
对几种抗真菌蛋白的分类、功能进行了综述 。
关键词
抗真菌蛋白
研究进展
分类
分子生物学
几丁质酶
渗透蛋白
真菌病害
分类号
S432.44 [农业科学—植物病理学]
Q51 [生物学—生物化学]
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职称材料
题名
萝卜抗真菌蛋白Rs-AFP_2基因PCR定点突变及其在大肠杆菌中的表达
2
作者
刘柱
胡新文
朱建清
杨志荣
机构
四川大学生命科学学院
中国热带农科院热带作物生物技术国家重点实验室
出处
《西南农业学报》
CSCD
2002年第3期85-89,共5页
基金
国家自然科学基金资助项目 (3 9960 0 65 )
文摘
根据已报道的萝卜抗真菌蛋白Rs AFP2 基因序列 ,结合基因及其表达调控中遗传密码的偏爱性 ,人工合成引物 ,利用PCR重叠延伸法 ,使编码序列区的部分核苷酸突变 ,采用嵌套PCR ,迅速克隆到目的基因片段Rs AFPm ,连接到 pGEM Teasy载体上 ,转化大肠杆菌XL1菌株 ,筛选到阳性克隆。序列分析结果表明 ,PCR产物全长 2 40bp ,有一个阅读框 ,编码 2 9个氨基酸的信号肽和 5 1个氨基酸的抗真菌蛋白 ,与突变前的Rs AFP2 基因相比 ,在编码区第 3号氨基酸Lys相差一个碱基 (TTG→TTA) ,第 5号氨基酸Gln相差一个碱基 (CAG→CAA) ,第 6号稀有密码Arg相差两个碱基 (CAG→CGA) ,但二者编码产生相同。重新合成引物 ,将切除信号肽的Rs AFP2 基因和Rs AFPm基因分别克隆到pET 2 1b(+ )质粒载体上 ,导入大肠杆菌BL2 1菌株。Tricine SDS PAGE电泳显示工程菌中存在 6KD左右的目的蛋白带 ;软件分析显示 ,突变后pETAFPm的表达产物约为突变前 pETAFPo表达产物的2倍 ;抑菌结果表明 ,pETAFPm表达产物的抑菌半径大于 pETAFP2 表达产物的抑菌半径。这些都说明改造后的Rs AFPm基因与Rs AFP2 基因相比 ,已有效的提高表达量。
关键词
大肠杆菌
密码偏爱性
PCR定点突变
萝卜抗真菌蛋白
Rs-AFP2
基因表达
Keywords
codon bias
PCR sited directed mutagenesis
Raphanus sativus antifungal protein 2 gene( Rs AFP 2 )
expression
分类号
TQ460.38 [化学工程—制药化工]
S482.29 [农业科学—农药学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
抗真菌蛋白分子生物学研究进展
刘柱
胡新文
刘志昕
郭建春
《莱阳农学院学报》
2001
3
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职称材料
2
萝卜抗真菌蛋白Rs-AFP_2基因PCR定点突变及其在大肠杆菌中的表达
刘柱
胡新文
朱建清
杨志荣
《西南农业学报》
CSCD
2002
0
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