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鹅颈藤壶多糖提取、理化性质及N-糖链表达谱分析研究 被引量:1
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作者 王茹 姜媛媛 +5 位作者 林川 潘琳 管守德 于广利 吕友晶 李国云 《中国海洋大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期95-103,共9页
本文以南海海域鹅颈藤壶(Lepas anatifera)为原料,提取鹅颈藤壶背甲与肌肉质柄中的多糖,基于其基本理化性质的分析,比较不同生长时期鹅颈藤壶N-糖链表达谱的差异性。经过脱脂、碱水解/蛋白酶解、乙醇沉淀方法提取得到粗多糖;利用高效液... 本文以南海海域鹅颈藤壶(Lepas anatifera)为原料,提取鹅颈藤壶背甲与肌肉质柄中的多糖,基于其基本理化性质的分析,比较不同生长时期鹅颈藤壶N-糖链表达谱的差异性。经过脱脂、碱水解/蛋白酶解、乙醇沉淀方法提取得到粗多糖;利用高效液相色谱法、高效凝胶渗透色谱法、苯酚-硫酸法、考马斯亮蓝法对其单糖组成、分子量分布、总糖含量及蛋白质含量进行分析;采用液质分析(PGC-ESI-MS/MS)方法对鹅颈藤壶成体(A-GB)与幼体(L-GB)肌肉质柄中N-糖链进行分析并比较。表明肌肉质柄中多糖分子量为18.40 kDa;总糖含量为11.99%,蛋白质含量60.14%,富含甘露糖、葡萄糖、氨基半乳糖,其中甘露糖的含量高达80%以上。在鹅颈藤壶成体与幼体中均鉴定得到26条N-糖链,成体中高甘露糖型N-糖链占总糖链的20.81%,且相对丰度较高的糖型组成为F_(1)H_(3)N_(2)(39.06%)、F_(1)H_(3)N_(3)(24.44%)、H_(3)N_(3)(9.35%);幼体中高甘露糖型N-糖链占总糖链的52.17%,相对丰度较高的糖型组成为F_(1)H_(3)N_(2)(21.65%)、H_(6)N_(2)(15.93%)、H_(5)N_(2)(14.75%)。鹅颈藤壶多糖是一类N-糖基化的蛋白复合物,推测N-糖链在鹅颈藤壶长发育过程中发挥着至关重要的作用,可能高甘露糖型N-糖链与其附着黏附能力密切相关。 展开更多
关键词 鹅颈藤壶多糖 N-糖链 高甘露糖型 表达谱究
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亲水作用色谱在糖类化合物分析中的应用 被引量:25
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作者 蒲江华 赵峡 +1 位作者 韩文伟 白明月 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期145-150,共6页
糖类化合物的结构和组成分析对于探究糖的结构与功能的关系具有重要作用。亲水作用色谱(HILIC)对糖类等极性化合物具有良好的分离效果。该文介绍了适合糖类分析的常用HILIC柱固定相及其分离机制,论述了强洗脱溶剂比例、流动相p H值、缓... 糖类化合物的结构和组成分析对于探究糖的结构与功能的关系具有重要作用。亲水作用色谱(HILIC)对糖类等极性化合物具有良好的分离效果。该文介绍了适合糖类分析的常用HILIC柱固定相及其分离机制,论述了强洗脱溶剂比例、流动相p H值、缓冲盐浓度和色谱柱温度对HILIC分离效果的影响,并举例说明了HILIC法在单糖组成、糖胺聚糖二糖组成、寡糖聚合度、糖苷、糖脂、糖醇以及N-/O-糖链分析中的应用。 展开更多
关键词 亲水作用色谱 固定相 保留机制 糖类分析 综述
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杂合褐藻糖胶寡糖的制备及结构分析 被引量:8
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作者 王培培 吕友晶 +4 位作者 曹欢 赵小亮 李广生 吴建东 于广利 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2012年第8期1722-1726,共5页
采用热水提取法从海蒿子(Sargassum pallidum)中得到一个杂合的褐藻糖胶(SPF);采用稀酸水解和低压凝胶渗透色谱(LPGPC)分离得到一系列杂合硫酸寡糖.结合单糖组成、甲基化和电喷雾碰撞诱导串联质谱(ES-CID-MS/MS)分析表明,所得21个寡糖... 采用热水提取法从海蒿子(Sargassum pallidum)中得到一个杂合的褐藻糖胶(SPF);采用稀酸水解和低压凝胶渗透色谱(LPGPC)分离得到一系列杂合硫酸寡糖.结合单糖组成、甲基化和电喷雾碰撞诱导串联质谱(ES-CID-MS/MS)分析表明,所得21个寡糖属于杂化岩藻寡糖硫酸酯,主要由α1→3连接的Fuc及少量β1→4连接的Xyl和β1→6连接的Gal组成;硫酸基取代位点主要存在于Fuc的C4或C2位、Xyl的C2位和Gal的C4位;Fuc主要存在于寡糖的非还原端.实验结果表明,ES-CID-MS/MS技术可用于各种杂合褐藻糖胶寡糖的结构序列分析.这些结构多样的硫酸寡糖可进一步点印到糖芯片上,研究其与蛋白相互作用. 展开更多
关键词 海蒿子 褐藻糖胶 寡糖 电喷雾碰撞诱导串联质谱
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立体选择性半合成全甲基化没食子儿茶素没食子酸酯 被引量:1
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作者 苑建 王保超 +4 位作者 左晓冰 Iris L.K.Wong 江涛 万升标 Larry M.C.Chow 《中国海洋大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第S1期172-175,共4页
为了立体选择性合成全甲基化没食子儿茶素没食子酸酯(GCG),本文以全甲基化表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)为原料,通过酯水解和Mitsunobu反应立体选择性地合成了构型C-3位翻转的目标产物全甲基化GCG。全甲基化GCG经水解得到5,7,3′,4′,... 为了立体选择性合成全甲基化没食子儿茶素没食子酸酯(GCG),本文以全甲基化表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)为原料,通过酯水解和Mitsunobu反应立体选择性地合成了构型C-3位翻转的目标产物全甲基化GCG。全甲基化GCG经水解得到5,7,3′,4′,5′-五氧甲基没食子儿茶素(GC),再经Mitsunobu反应得到全甲基化EGCG。经核磁和旋光验证,所合成的全甲基化EGCG与原料全甲基化EGCG相同。核磁测试证实两次Mitsunobu反应产物C-3均发生立体构型翻转。初步细胞实验表明1μmol/L全甲基化GCG与紫杉醇共同作用于P-gp高表达LCC6/MDR乳腺癌耐药细胞株时,紫杉醇IC50为10.1nmol/L,全甲基化GCG逆转倍数(RF)达到13.9。 展开更多
关键词 MITSUNOBU反应 没食子儿茶素没食子酸酯(GCG) 多药耐药
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重组人胰岛淀粉样多肽的制备及评价
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作者 李欣宇 张杰 +3 位作者 刘路馨 陆仲夏 王盛楠 路新枝 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期1468-1475,共8页
人胰岛淀粉样多肽(hIAPP)的淀粉样变与2型糖尿病(T2D)的发生发展密切相关。为解决体外评价化合物抗hIAPP淀粉样变活性所需hIAPP存在化学合成困难、成本高、溶解性低和批次稳定性差等问题,本研究以蛛丝蛋白N端结构域突变体NT作为融合标签... 人胰岛淀粉样多肽(hIAPP)的淀粉样变与2型糖尿病(T2D)的发生发展密切相关。为解决体外评价化合物抗hIAPP淀粉样变活性所需hIAPP存在化学合成困难、成本高、溶解性低和批次稳定性差等问题,本研究以蛛丝蛋白N端结构域突变体NT作为融合标签,构建大肠杆菌高效表达hIAPP体系。通过优化表达条件和分离纯化工艺,获得重组hIAPP(rhIAPP),并对rhIAPP二硫键形成、淀粉样变能力和淀粉样变产物的毒性进行检测。融合蛋白质以包涵体形式存在,经过尿素变性和亲和层析纯化得到融合蛋白质产量为70 mg/L发酵液,融合蛋白质经过复性、凝血酶切除融合标签和进一步纯化,最终得到rhIAPP产量为6 mg/L发酵液。检测显示,rhIAPP的巯基未形成二硫键。rhIAPP具有“S”型淀粉样变曲线,其形成的β-折叠结构远多于化学合成的hIAPP(chIAPP),化合物姜黄素能显著抑制2种来源hIAPP的淀粉样变。细胞毒检测表明,rhIAPP在与红细胞孵育过程中促进红细胞溶血。 展开更多
关键词 人胰岛淀粉样多肽(hIAPP) 蛛丝蛋白 淀粉样变 重组表达
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