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兔抗人谷氨酰胺果糖6磷酸氨基转移酶1(GFPT1)多克隆抗体的制备及应用
被引量：
3
1
作者
吴少春
刘林
+1 位作者
高艳春
顾玉超
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第7期651-656,共6页
目的 制备特异性识别人谷氨酰胺果糖6磷酸氨基转移酶1(GFPT1)的兔多克隆抗体。方法 通过比对GFPT1及其高度同源的同工酶GFPT2的蛋白质序列,针对GFPT1的特异性序列设计并合成2个多肽,多肽与钥孔戚血蓝蛋白(KLH)偶联作为抗原免疫新西兰大...
目的 制备特异性识别人谷氨酰胺果糖6磷酸氨基转移酶1(GFPT1)的兔多克隆抗体。方法 通过比对GFPT1及其高度同源的同工酶GFPT2的蛋白质序列,针对GFPT1的特异性序列设计并合成2个多肽,多肽与钥孔戚血蓝蛋白(KLH)偶联作为抗原免疫新西兰大白兔,3次加强免疫后得到抗血清,采用ELISA检测抗血清效价。构建GFPT1和GFPT2的大肠杆菌表达载体,诱导表达获得GFPT1和GFPT2重组蛋白,通过Western blot法检测GFPT1和GFPT2重组蛋白以验证抗血清的特异性、免疫荧光细胞化学染色检测786-O细胞GFPT1的表达验证获得的抗血清能否识别内源性表达的GFPT1。结果 获得了特异性识别GFPT1的多克隆抗体,效价高达1∶1 458 000,该抗体可用于Western blot法以及免疫荧光细胞化学染色。结论 成功制备了特异性识别GFPT1的兔多克隆抗体。
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关键词
谷氨酰胺果糖6磷酸氨基转移酶1(GFPT1)
重组蛋白
多克隆抗体
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职称材料
利用大肠杆菌表达系统制备具有O-GlcNAc修饰的p120ctn蛋白的研究
2
作者
刘海艳
单慧
+2 位作者
韩翠芳
于文功
顾玉超
《中国海洋大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第7期91-95,共5页
p120-连环蛋白(p120-catenin,p120ctn)是一个多功能蛋白,其在E-钙黏蛋白(E-cadherin)粘附复合体形成、Rho GTP酶信号通路和基因转录调节等过程中发挥重要作用。前期研究发现p120ctn蛋白具有O-连接的β-N-乙酰葡糖胺(Olinked N-acetylglu...
p120-连环蛋白(p120-catenin,p120ctn)是一个多功能蛋白,其在E-钙黏蛋白(E-cadherin)粘附复合体形成、Rho GTP酶信号通路和基因转录调节等过程中发挥重要作用。前期研究发现p120ctn蛋白具有O-连接的β-N-乙酰葡糖胺(Olinked N-acetylglucosamine,O-GlcNAc)修饰,然而O-GlcNAc修饰对于p120ctn功能的调节作用及其机制还未阐明。本研究中构建了p120ctn的重组表达质粒,并将其与O-GlcNAc糖基转移酶(O-GlcNAc transferase,OGT)的表达质粒共同转化到大肠杆菌BL21(DE3)菌株中。利用该菌株,实现了将p120ctn蛋白与OGT蛋白在大肠杆菌中共表达。通过免疫印迹检测发现与OGT蛋白共表达的p120ctn蛋白具有O-GlcNAc修饰。具有O-GlcNAc修饰的p120ctn蛋白的获得为后续在体外实验中对O-GlcNAc修饰调节p120ctn的作用和机制的深入研究奠定了基础。
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关键词
O-GLCNAC
P120CTN
OGT
重组表达
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职称材料
题名
兔抗人谷氨酰胺果糖6磷酸氨基转移酶1(GFPT1)多克隆抗体的制备及应用
被引量：
3
1
作者
吴少春
刘林
高艳春
顾玉超
机构
中国海洋大学医药学院糖生物学实验室
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第7期651-656,共6页
基金
国家自然科学基金(81871868)
中央高校基本科研业务费(202042011)。
文摘
目的 制备特异性识别人谷氨酰胺果糖6磷酸氨基转移酶1(GFPT1)的兔多克隆抗体。方法 通过比对GFPT1及其高度同源的同工酶GFPT2的蛋白质序列,针对GFPT1的特异性序列设计并合成2个多肽,多肽与钥孔戚血蓝蛋白(KLH)偶联作为抗原免疫新西兰大白兔,3次加强免疫后得到抗血清,采用ELISA检测抗血清效价。构建GFPT1和GFPT2的大肠杆菌表达载体,诱导表达获得GFPT1和GFPT2重组蛋白,通过Western blot法检测GFPT1和GFPT2重组蛋白以验证抗血清的特异性、免疫荧光细胞化学染色检测786-O细胞GFPT1的表达验证获得的抗血清能否识别内源性表达的GFPT1。结果 获得了特异性识别GFPT1的多克隆抗体,效价高达1∶1 458 000,该抗体可用于Western blot法以及免疫荧光细胞化学染色。结论 成功制备了特异性识别GFPT1的兔多克隆抗体。
关键词
谷氨酰胺果糖6磷酸氨基转移酶1(GFPT1)
重组蛋白
多克隆抗体
Keywords
glutamine fructose-6-phosphate amidotransferase 1(GFPT1)
recombinant protein
polyclonal antibody
分类号
Q5127 [生物学—生物化学]
S852.43 [农业科学—基础兽医学]
R392-33 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
利用大肠杆菌表达系统制备具有O-GlcNAc修饰的p120ctn蛋白的研究
2
作者
刘海艳
单慧
韩翠芳
于文功
顾玉超
机构
中国海洋大学医药学院糖生物学实验室
出处
《中国海洋大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第7期91-95,共5页
基金
国家自然科学基金项目(81172013
81101505
81272264)资助
文摘
p120-连环蛋白(p120-catenin,p120ctn)是一个多功能蛋白,其在E-钙黏蛋白(E-cadherin)粘附复合体形成、Rho GTP酶信号通路和基因转录调节等过程中发挥重要作用。前期研究发现p120ctn蛋白具有O-连接的β-N-乙酰葡糖胺(Olinked N-acetylglucosamine,O-GlcNAc)修饰,然而O-GlcNAc修饰对于p120ctn功能的调节作用及其机制还未阐明。本研究中构建了p120ctn的重组表达质粒,并将其与O-GlcNAc糖基转移酶(O-GlcNAc transferase,OGT)的表达质粒共同转化到大肠杆菌BL21(DE3)菌株中。利用该菌株,实现了将p120ctn蛋白与OGT蛋白在大肠杆菌中共表达。通过免疫印迹检测发现与OGT蛋白共表达的p120ctn蛋白具有O-GlcNAc修饰。具有O-GlcNAc修饰的p120ctn蛋白的获得为后续在体外实验中对O-GlcNAc修饰调节p120ctn的作用和机制的深入研究奠定了基础。
关键词
O-GLCNAC
P120CTN
OGT
重组表达
Keywords
O-GlcNAc
p120ctn
OGT
recombinant expression
分类号
Q5 [生物学—生物化学]
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
兔抗人谷氨酰胺果糖6磷酸氨基转移酶1(GFPT1)多克隆抗体的制备及应用
吴少春
刘林
高艳春
顾玉超
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2022
3
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职称材料
2
利用大肠杆菌表达系统制备具有O-GlcNAc修饰的p120ctn蛋白的研究
刘海艳
单慧
韩翠芳
于文功
顾玉超
《中国海洋大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2015
0
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