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鲤两种孕激素受体基因克隆、表达及比较分析
被引量：
2
1
作者
朱锐
叶雨情
+6 位作者
王雅欣
杨晨茹
王红伟
孙晓晴
张研
李尚琪
李炯棠
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第7期46-53,共8页
孕激素受体(Progesterone receptor,Pgr)是介导孕激素调控鱼类性腺发育和生殖细胞成熟的受体。为研究鲤(Cyprinus carpio)2种Pgr时空表达模式和表达分化趋势,采用cDNA末端快速扩增方法克隆两种Pgr基因(Pgr1和Pgr2)。Pgr1和Pgr2的全长cDN...
孕激素受体(Progesterone receptor,Pgr)是介导孕激素调控鱼类性腺发育和生殖细胞成熟的受体。为研究鲤(Cyprinus carpio)2种Pgr时空表达模式和表达分化趋势,采用cDNA末端快速扩增方法克隆两种Pgr基因(Pgr1和Pgr2)。Pgr1和Pgr2的全长cDNA序列分别为2 713 bp和2 730 bp,均编码628个氨基酸。二者核酸和蛋白质一致性分别为91%和90%。这两个基因都含有锌指结构域和核激素受体域同源超家族两个功能域。进化分析将鲤Pgr1和鲫Pgr1聚在一起,鲤Pgr2和鲫Pgr2聚为一支;这两支再与斑马鱼Pgr汇成一支。鲤Pgr1和Pgr2的非同义替换率与同义替换率比值为0.360,表明Pgr1和Pgr2受负选择压力。实时荧光qPCR分析表明,Pgr1和Pgr2在性腺的表达显著高于其他组织,说明二者可能参与性腺发育过程。催产素诱导后,Pgr1和Pgr2在精液和卵细胞的表达量高于受精卵,表明这两种基因与鲤生殖细胞成熟相关。大多数状态下Pgr1表达量显著高于Pgr2,表明Pgr1是介导鲤性腺发育和生殖细胞成熟的主表达基因。
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关键词
孕激素受体
鲤
实时荧光定量PCR
性腺
生殖细胞
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职称材料
鲤上皮瘤细胞两种转染试剂的条件优化及应用
被引量：
1
2
作者
李尚琪
徐梓明
+3 位作者
赵然
孙晓晴
张研
李炯棠
《水产科学》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第2期252-263,共12页
鲤上皮瘤细胞是常用的鱼类细胞系,广泛使用在各种病毒学和基因功能研究中。利用细胞转染技术在鲤上皮瘤细胞进行基因功能研究时,转染试剂和DNA的剂量以及取样时间没有统一的数据支持。为解决该问题,选取两种常用转染试剂Lipofectamine&#...
鲤上皮瘤细胞是常用的鱼类细胞系,广泛使用在各种病毒学和基因功能研究中。利用细胞转染技术在鲤上皮瘤细胞进行基因功能研究时,转染试剂和DNA的剂量以及取样时间没有统一的数据支持。为解决该问题,选取两种常用转染试剂Lipofectamine®2000和FuGENE®HD,分别对荧光蛋白标记的多种质粒进行多配组转染试验,多温度、多时间节点追踪记录转染效率。28℃,以35 mm培养皿铺板,16μL Lipofectamine®2000和4μg DNA在转染后48 h达到最高转染效率(5.92±0.52)%;12μL FuGENE®HD和4μg DNA在转染72 h后转染效率达到(9.81±0.33)%。为验证该条件,构建一个鲤高不饱和脂肪酸合成相关转录因子过氧化物酶体增殖物激活受体蛋白α(PPARα)的EGFP标签载体,该载体利用两种转染试剂分别获得了约4%和约8%的转染效率。以实时荧光定量PCR检测该转录因子对下游脂肪酸去饱和酶2(fads2)基因的转录调控效应,虽然两种转染试剂本身可导致下游基因的上调,但与空载质粒组相比,两种转染试剂高表达转录因子均对下游靶基因产生了转录激活效应。本试验获得了常用转染试剂Lipofectamine®2000和FuGENE®HD在鲤上皮瘤细胞细胞转染时的最适转染试剂和DNA剂量和最优取样时间,并在一转录调控实例中进行了验证,试验结果为后续充分利用鲤上皮瘤细胞进行基因功能研究提供了数据支持,有助于更好地服务于渔业种质资源育种创新。
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关键词
鲤上皮瘤细胞
细胞转染效率
高不饱和脂肪酸生物合成
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职称材料
题名
鲤两种孕激素受体基因克隆、表达及比较分析
被引量：
2
1
作者
朱锐
叶雨情
王雅欣
杨晨茹
王红伟
孙晓晴
张研
李尚琪
李炯棠
机构
上海海洋大
学
水产
科学
国家级
实验
教
学
示范
中心
中国水产科学研究院生物技术研究中心农业农村部水生动物基因组学重点实验室
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第7期46-53,共8页
基金
国家自然科学基金项目(31672644)
中国水产科学研究院院级基本业务费(2018HY-ZD0207,2018B004)
文摘
孕激素受体(Progesterone receptor,Pgr)是介导孕激素调控鱼类性腺发育和生殖细胞成熟的受体。为研究鲤(Cyprinus carpio)2种Pgr时空表达模式和表达分化趋势,采用cDNA末端快速扩增方法克隆两种Pgr基因(Pgr1和Pgr2)。Pgr1和Pgr2的全长cDNA序列分别为2 713 bp和2 730 bp,均编码628个氨基酸。二者核酸和蛋白质一致性分别为91%和90%。这两个基因都含有锌指结构域和核激素受体域同源超家族两个功能域。进化分析将鲤Pgr1和鲫Pgr1聚在一起,鲤Pgr2和鲫Pgr2聚为一支;这两支再与斑马鱼Pgr汇成一支。鲤Pgr1和Pgr2的非同义替换率与同义替换率比值为0.360,表明Pgr1和Pgr2受负选择压力。实时荧光qPCR分析表明,Pgr1和Pgr2在性腺的表达显著高于其他组织,说明二者可能参与性腺发育过程。催产素诱导后,Pgr1和Pgr2在精液和卵细胞的表达量高于受精卵,表明这两种基因与鲤生殖细胞成熟相关。大多数状态下Pgr1表达量显著高于Pgr2,表明Pgr1是介导鲤性腺发育和生殖细胞成熟的主表达基因。
关键词
孕激素受体
鲤
实时荧光定量PCR
性腺
生殖细胞
Keywords
progesterone receptor(Pgr)
common carp
qRT-PCR
gonad
germ cell
分类号
R73 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
鲤上皮瘤细胞两种转染试剂的条件优化及应用
被引量：
1
2
作者
李尚琪
徐梓明
赵然
孙晓晴
张研
李炯棠
机构
中国
水产
科学研究院
生物技术
研究
中心
中国
水产
科学研究院
渔业工程
研究
所
上海海洋大
学
出处
《水产科学》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第2期252-263,共12页
基金
中国水产科学研究院科技创新团队水产生物遗传大数据研究及应用项目(2020TD24)。
文摘
鲤上皮瘤细胞是常用的鱼类细胞系,广泛使用在各种病毒学和基因功能研究中。利用细胞转染技术在鲤上皮瘤细胞进行基因功能研究时,转染试剂和DNA的剂量以及取样时间没有统一的数据支持。为解决该问题,选取两种常用转染试剂Lipofectamine®2000和FuGENE®HD,分别对荧光蛋白标记的多种质粒进行多配组转染试验,多温度、多时间节点追踪记录转染效率。28℃,以35 mm培养皿铺板,16μL Lipofectamine®2000和4μg DNA在转染后48 h达到最高转染效率(5.92±0.52)%;12μL FuGENE®HD和4μg DNA在转染72 h后转染效率达到(9.81±0.33)%。为验证该条件,构建一个鲤高不饱和脂肪酸合成相关转录因子过氧化物酶体增殖物激活受体蛋白α(PPARα)的EGFP标签载体,该载体利用两种转染试剂分别获得了约4%和约8%的转染效率。以实时荧光定量PCR检测该转录因子对下游脂肪酸去饱和酶2(fads2)基因的转录调控效应,虽然两种转染试剂本身可导致下游基因的上调,但与空载质粒组相比,两种转染试剂高表达转录因子均对下游靶基因产生了转录激活效应。本试验获得了常用转染试剂Lipofectamine®2000和FuGENE®HD在鲤上皮瘤细胞细胞转染时的最适转染试剂和DNA剂量和最优取样时间,并在一转录调控实例中进行了验证,试验结果为后续充分利用鲤上皮瘤细胞进行基因功能研究提供了数据支持,有助于更好地服务于渔业种质资源育种创新。
关键词
鲤上皮瘤细胞
细胞转染效率
高不饱和脂肪酸生物合成
Keywords
epithelioma papulosum cyprinid cell
cell transfection efficiency
highly unsaturated fatty acid biosynthesis
分类号
S917 [农业科学—水产科学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
鲤两种孕激素受体基因克隆、表达及比较分析
朱锐
叶雨情
王雅欣
杨晨茹
王红伟
孙晓晴
张研
李尚琪
李炯棠
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2019
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
鲤上皮瘤细胞两种转染试剂的条件优化及应用
李尚琪
徐梓明
赵然
孙晓晴
张研
李炯棠
《水产科学》
CAS
CSCD
北大核心
2024
1
在线阅读
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职称材料
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