免疫学和分子生物学技术在水产动物疾病诊断中的应用 被引量：6

1

作者 曾伟伟 王庆 +1 位作者 石存斌 吴淑勤 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2010年第6期111-117,共7页

目前,各种免疫学和分子生物学技术的发展和在水产养殖病原微生物检测和诊断中的广泛应用,对水产养殖病害的有效防控起到了巨大的促进作用。论文回顾了主要免疫学技术(单克隆抗体、酶免疫、凝集反应、荧光抗体、胶体金)和分子生物学技术... 目前,各种免疫学和分子生物学技术的发展和在水产养殖病原微生物检测和诊断中的广泛应用,对水产养殖病害的有效防控起到了巨大的促进作用。论文回顾了主要免疫学技术(单克隆抗体、酶免疫、凝集反应、荧光抗体、胶体金)和分子生物学技术(核酸杂交、基于PCR的分子生物学检测技术、限制性内切酶分析、16 S rRNA、基因芯片)的特点以及其在水产动物疾病诊断中的研究及应用情况,并分析了今后水产动物疾病诊断技术的发展方向。 展开更多

关键词 免疫学技术 分子生物学技术 水产动物 疾病诊断

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3个广东鲂地理种群肌肉营养成分及能量密度比较研究 被引量：5

2

作者 刘亚秋 刘明典 +1 位作者 李新辉 李捷 《南方水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期163-169,共7页

为比较万泉河、漠阳江和西江广东鲂(Megalobrama terminalis)地理种群的肌肉营养成分与能量密度差异,采用常规生化分析方法检测了3个广东鲂种群肌肉中的水分、粗蛋白、粗脂肪、灰分、脂肪酸和氨基酸含量及能量密度。结果表明,西江种群... 为比较万泉河、漠阳江和西江广东鲂(Megalobrama terminalis)地理种群的肌肉营养成分与能量密度差异,采用常规生化分析方法检测了3个广东鲂种群肌肉中的水分、粗蛋白、粗脂肪、灰分、脂肪酸和氨基酸含量及能量密度。结果表明,西江种群的肌肉粗蛋白质量分数最高[(20.2±0.5)%],万泉河种群肌肉水分质量分数最高[(79.0±0.5)%]。西江种群的肌肉能量密度显著高于万泉河和漠阳江种群。西江种群的肌肉总氨基酸含量(Total amino acids,TAA)和必需氨基酸指数(Essential amino acid index,EAAI)高于万泉河和漠阳江种群。3个广东鲂种群均检测出23种常见脂肪酸,万泉河种群的单不饱和脂肪酸(Monounsaturated fatty acid,MUFA)总量最低,而多不饱和脂肪酸(Polyunsaturated fatty acids,PUFA)含量最高。西江种群的二十二碳六希酸(DHA)含量显著高于万泉河和漠阳江种群。3个广东鲂种群肌肉中矿物元素含量最高的均为钾(K),最低的均为铜(Cu)。西江种群的铁(Fe)和锰(Mn)含量显著高于漠阳江和万泉河种群,而锌(Zn)含量显著低于漠阳江种群。 展开更多

关键词 广东鲂 营养成分 矿质元素 氨基酸 脂肪酸

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锦鲤摩氏摩根氏菌的鉴定及致病性研究 被引量：30

3

作者 陆小萏 邹为民 +1 位作者 谭爱萍 梁爱玲 《淡水渔业》 CSCD 北大核心 2005年第2期3-5,共3页

从患病的锦鲤分离出菌株MMGN02 -J2, 经人工感染均可使健康锦鲤发病, 并从濒死的试验鱼中再次分离出相同的细菌。经ATBExpression细菌鉴定系统及常规细菌学鉴定为摩氏摩根氏菌 (Morganellamorganii)。药敏试验结果表明该菌株对氧氟沙星... 从患病的锦鲤分离出菌株MMGN02 -J2, 经人工感染均可使健康锦鲤发病, 并从濒死的试验鱼中再次分离出相同的细菌。经ATBExpression细菌鉴定系统及常规细菌学鉴定为摩氏摩根氏菌 (Morganellamorganii)。药敏试验结果表明该菌株对氧氟沙星、阿米卡星、环丙沙星、氯霉素、壮观霉素、诺氟沙星和链霉素敏感。 展开更多

关键词 发病 氧氟沙星 阿米卡星 细菌学鉴定 环丙沙星 诺氟沙星 细菌鉴定 锦鲤 致病性 人工感染

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大口黑鲈虹彩病毒病研究进展 被引量：16

4

作者 王庆 李凯彬 +3 位作者 曾伟伟 刘春 石存斌 吴淑勤 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2011年第2期73-76,共4页

大口黑鲈虹彩病毒(LMBV;又称SCRV)引起的病毒病是迄今为止国内外大口黑鲈病害研究报道最多的病毒性疾病之一。在大口黑鲈原产地美国,LMBV广泛的感染性和致病性引起科研人员和养殖人员的高度关注。论文综述了大口黑鲈虹彩病毒病的来源、... 大口黑鲈虹彩病毒(LMBV;又称SCRV)引起的病毒病是迄今为止国内外大口黑鲈病害研究报道最多的病毒性疾病之一。在大口黑鲈原产地美国,LMBV广泛的感染性和致病性引起科研人员和养殖人员的高度关注。论文综述了大口黑鲈虹彩病毒病的来源、地理分布、传播途径、致病性及防控措施等方面的研究进展,并对该病的防控进行了展望,对于国内大口黑鲈病毒病的研究和预防具有借鉴意义。 展开更多

关键词 大口黑鲈 虹彩病毒 蛙病毒属

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华南地区大刺鳅的遗传结构与群体动态历史研究 被引量：3

5

作者 高尚 李跃飞 +1 位作者 李捷 陈蔚涛 《南方水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期42-49,共8页

为掌握华南地区大刺鳅(Mastacembelus armatus)的遗传种质资源现状,并为其管理和保护提供科学依据,采集了华南地区7个独立水系的16个地理群体共计140尾大刺鳅样本,基于Sanger测序获得了2个线粒体基因(COI和Cytb),综合多种分析方法对其... 为掌握华南地区大刺鳅(Mastacembelus armatus)的遗传种质资源现状,并为其管理和保护提供科学依据,采集了华南地区7个独立水系的16个地理群体共计140尾大刺鳅样本,基于Sanger测序获得了2个线粒体基因(COI和Cytb),综合多种分析方法对其遗传结构和群体动态史展开研究。结果表明,华南地区大刺鳅群体形成了3个谱系(I、II和III),分化时间介于0.596~0.676 Ma(百万年前)。此外,单倍型网状图发现不同谱系群体存在共域分布的现象,并提示海南岛群体与大陆群体之间可能存在两条扩散路线。群体遗传分析发现大刺鳅群体间存在显著的遗传分化(F_(ST)=0.676,P<0.001),并且符合距离隔离模式(R=0.463,P=0.001),暗示空间距离是造成大刺鳅遗传分化的一个重要因素。种群动态历史分析表明,大刺鳅群体可能在0.025 Ma经历了种群扩张事件。 展开更多

关键词 大刺鳅 遗传结构 遗传分化 种群动态历史

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3月龄草鱼种免疫器官组织学及其免疫后免疫基因的转录差异 被引量：1

6

作者 张鹏英 常藕琴 +1 位作者 石存斌 吴淑勤 《淡水渔业》 CSCD 北大核心 2016年第6期64-71,共8页

为研究处于同一时期但养殖条件不同的草鱼(Ctenopharyngodon idellus)鱼体规格与发育状态间是否具有一致性,观察压塘3月龄草鱼与普通3月龄草鱼头肾、中肾、肠道和脾脏的显微结构,并对压塘3月龄草鱼与普通3月龄草鱼进行腹腔注射疫苗处理... 为研究处于同一时期但养殖条件不同的草鱼(Ctenopharyngodon idellus)鱼体规格与发育状态间是否具有一致性,观察压塘3月龄草鱼与普通3月龄草鱼头肾、中肾、肠道和脾脏的显微结构,并对压塘3月龄草鱼与普通3月龄草鱼进行腹腔注射疫苗处理,实时荧光定量PCR检测免疫7 d后、14 d后各期草鱼头肾、中肾、肠道和脾脏中IgM与MHCⅠ的表达量。结果显示,压塘3月龄草鱼各组织发育较普通3月龄草鱼迟缓。压塘3月龄草鱼与普通3月龄草鱼在免疫后,头肾、中肾、肠道与脾脏中IgM和MHCⅠ的表达量均有上升,且IgM与MHCⅠ的相对表达量峰值均出现在普通3月龄草鱼免疫14 d后的中肾中(IgM为74.51倍;MHCⅠ为56.02倍。结果表明,草鱼出血病活疫苗可以增强草鱼头肾、中肾、肠道和脾脏中IgM和MHCⅠ的表达,且在3月龄时期进行注射免疫效果最佳。 展开更多

关键词 草鱼(Ctenopharyngodon idellus) 免疫器官组织学 疫苗免疫 IgM MHCⅠ

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广东沿海养殖牡蛎中多氯联苯残留水平及人体饮食暴露风险评估 被引量：7

7

作者 马丽莎 谢文平 +4 位作者 田斐 尹怡 单奇 郑光明 李恒翔 《南方水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期11-19,共9页

文章利用气相色谱质谱法测定了广东沿海主要养殖区(汕头、汕尾、深圳、珠海、江门、阳江、湛江)养殖牡蛎体内30种多氯联苯(Polychlorinated biphenys,PCBs)的含量,评价了其污染水平和致癌风险。结果表明,广东养殖牡蛎中普遍检出PCBs,检... 文章利用气相色谱质谱法测定了广东沿海主要养殖区(汕头、汕尾、深圳、珠海、江门、阳江、湛江)养殖牡蛎体内30种多氯联苯(Polychlorinated biphenys,PCBs)的含量,评价了其污染水平和致癌风险。结果表明,广东养殖牡蛎中普遍检出PCBs,检出率为97.6%,其质量分数为nd~8.62 ng·g^(-1)(湿质量,下同),平均值为(0.57±1.23)ng·g^(-1),其中以深圳水域养殖牡蛎体内的PCBs含量最高,珠海次之,汕头、阳江、江门、湛江及汕尾较低。不同地区养殖牡蛎中PCBs的组成模式类似,均以五氯代和六氯代PCBs为主。与国内外部分沿海海域贝类相比,广东省养殖牡蛎中PCBs含量处于较低水平。广东省养殖牡蛎中PCBs残留量低于中国《食品安全国家标准食品中污染物限量》及欧盟国家的贝类卫生标准,食用牡蛎的致癌风险及危害商数均小于美国环保局(EPA)推荐的可接受风险水平,致癌风险处于可接受风险水平。 展开更多

关键词 牡蛎 多氯联苯残留 风险评估 广东

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云斑尖塘鳢肿大细胞病毒属虹彩病毒的分离与鉴定 被引量：15

8

作者 王庆 曾伟伟 +5 位作者 刘春 李凯彬 常藕琴 潘加雄 石存斌 吴淑勤 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期1150-1156,共7页

2009年10月,广东顺德地区一云斑尖塘鳢养殖场暴发不明病因疾病,发病尖塘鳢体长15—18 cm不等,死亡率约85%,濒死尖塘鳢从池塘底层游至水面,呈现游动失衡状态直至死亡。死亡尖塘鳢腹部膨大,剖检可见肝脏、脾脏、肾脏肿大,有出血斑点,从内... 2009年10月,广东顺德地区一云斑尖塘鳢养殖场暴发不明病因疾病,发病尖塘鳢体长15—18 cm不等,死亡率约85%,濒死尖塘鳢从池塘底层游至水面,呈现游动失衡状态直至死亡。死亡尖塘鳢腹部膨大,剖检可见肝脏、脾脏、肾脏肿大,有出血斑点,从内脏器官肝脏、脾脏和肾脏未分离到致病菌。病鱼内脏组织研磨过滤除菌后,腹腔注射20尾尖塘鳢,7d后开始出现死亡,10d后全部死亡,对照组无死亡。自然发病鱼和人工感染鱼的病理切片显示肝脏、脾脏和肾脏出现大量肿大细胞,超薄切片经电子显微镜观察,肝脏、脾脏和肾脏观察到大量病毒颗粒。电镜下病毒呈六边形,直径约135 nm,形态与虹彩病毒相似。针对虹彩病毒主衣壳蛋白(Major capsid protein,MCP)序列设计引物,提取自然发病鱼和人工感染鱼的DNA作为模板,均能扩增出预期大小的特异性产物。利用NCBI的Blast搜索,结果显示扩增序列与肿大细胞病毒属的传染性脾肾坏死病毒(ISKNV)、闪电丽鱼虹彩病毒(DGIV)和条石鲷虹彩病毒(RBIV)MCP核苷酸序列同源性分别为98.8%、98.1%和94.7%。利用MCP序列构建的系统发育树显示,导致云斑尖塘鳢发病死亡的病毒为肿大细胞病毒属虹彩病毒,暂命名云斑尖塘鳢虹彩病毒(MSGIV)。 展开更多

关键词 云斑尖塘鳢 虹彩病毒 肿大细胞病毒 MCP

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地图鱼迟钝爱德华氏菌病病原菌的鉴定及毒力基因的检测 被引量：12

9

作者 赵飞 邹为民 +3 位作者 谭爱萍 罗理 姜兰 陆小萏 《大连水产学院学报》 CSCD 北大核心 2007年第6期403-408,共6页

从患病地图鱼Astronotus ocellatus肝脏组织中分离到菌株AO1,经人工感染试验证实其为致病菌。通过ATB Expression半自动细菌鉴定仪和常规生理生化特性的分析,初步鉴定该菌株为迟钝爱德华氏菌Ed-wardsiella tarda。测定菌株AO1的16S rRN... 从患病地图鱼Astronotus ocellatus肝脏组织中分离到菌株AO1,经人工感染试验证实其为致病菌。通过ATB Expression半自动细菌鉴定仪和常规生理生化特性的分析,初步鉴定该菌株为迟钝爱德华氏菌Ed-wardsiella tarda。测定菌株AO1的16S rRNA基因序列并进行分析,结果显示,该菌株与迟钝爱德华氏菌的同源性最高,达99.9%。因此,可鉴定该菌株为迟钝爱德华氏菌。根据迟钝爱德华氏菌的毒力基因菌毛亚基(fimA)基因序列设计引物,进行PCR扩增,得到383 bp序列,该序列与迟钝爱德华氏菌的fimA基因序列相似性达99.0%,进一步说明菌株AO1具有fimA基因,有一定的致病力。药物敏感试验结果表明,菌株AO1对阿米卡星、氧氟沙星、庆大霉素、新生霉素、氨苄西林、氨曲南、卡那霉素、头孢咪啉、诺氟沙星、环丙沙星、呋喃妥因、妥布霉素、氨苄青霉素13种抗生素较为敏感。 展开更多

关键词 地图鱼 迟钝爱德华氏菌 16SRRNA基因 fimA基因

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黄喉拟水龟体表溃疡病原菌SG_(24)的分类鉴定 被引量：7

10

作者 谭爱萍 邹为民 +4 位作者 姜兰 陆小萏 陈永乐 赵飞 梁爱玲 《广东海洋大学学报》 CAS 2007年第3期64-68,共5页

从患溃疡的黄喉拟水龟病灶中分离到一株病原菌SG24。对菌株SG24进行了常规生理生化测定和ATBExpression半自动细菌鉴定仪鉴定,并测定16S rRNA序列,分析其与相关细菌相应序列的同源性,构建了系统进化树。普通细菌学方法结果显示菌株SG24... 从患溃疡的黄喉拟水龟病灶中分离到一株病原菌SG24。对菌株SG24进行了常规生理生化测定和ATBExpression半自动细菌鉴定仪鉴定,并测定16S rRNA序列,分析其与相关细菌相应序列的同源性,构建了系统进化树。普通细菌学方法结果显示菌株SG24为黏质沙雷氏菌(Serratia marcescens)。以沙雷氏菌属的16S rRNA基因序列设计一对引物进行PCR扩增,获得了菌株SG24大小约950 bp的16S rRNA部分基因片段,测序结果显示菌株SG24与黏质沙雷氏菌同类,与已登录的黏质沙雷氏菌(S.marcescensDQ207558)的16S rRNA同源性大于99%。综合以上分类鉴定结果,确定菌株SG24属于沙雷氏菌属的黏质沙雷氏菌。药物敏感试验结果表明:菌株SG24对链霉素、庆大霉素、壮观霉素、强力霉素、卡那霉素、阿米卡星、诺氟沙星、氧氟沙星和复方新诺明敏感。 展开更多

关键词 黄喉拟水龟 体表溃疡 生理生化特性 16S RRNA 分类鉴定 黏质沙雷氏菌

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鱼源嗜水气单胞菌疫苗生产菌株与分离株的抗原性分析 被引量：2

11

作者 任燕 张德峰 +5 位作者 孙承文 陶家发 李宁求 刘礼辉 石存斌 吴淑勤 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期207-210,共4页

为分析商品化嗜水气单胞菌（Ah）败血症灭活疫苗生产菌株J-1与近年来分离的YYK090901菌株的抗原性是否存在差异,本研究应用western blot检测了抗J-1血清和抗YYK090901血清识别28株嗜水气单胞菌全菌蛋白情况,并通过细菌凝集试验测定了这... 为分析商品化嗜水气单胞菌（Ah）败血症灭活疫苗生产菌株J-1与近年来分离的YYK090901菌株的抗原性是否存在差异,本研究应用western blot检测了抗J-1血清和抗YYK090901血清识别28株嗜水气单胞菌全菌蛋白情况,并通过细菌凝集试验测定了这2种抗血清与28株菌株的凝集效价。结果表明2种抗血清均能够识别25株菌株的大多数全菌蛋白,但识别GYK1、G060718-2L、Ah120606L 3株菌株的蛋白条带较少,2种抗血清识别同一株菌的全菌蛋白条带不完全一致。抗YYK090901血清对YYK090901、Ah120606L、JX120701具有较高的凝集价（211）,对J-1、GYK1等16株菌的凝集价为26~210,其中对J-1、GYK1的凝集价分别为27、210;对N-1-2、TTF20130613L等9株菌的凝集价较低,为24~25。抗J-1血清对1990s年和2012年~2013年分离的大部分菌株均具有较高的凝集价（211~212）,仅对GYK1、TTF20130613L等6菌株凝集价较低,为24~25。本研究结果表明,J-1与YYK090901的抗原性存在一定的差异。 展开更多

关键词 嗜水气单胞菌 商品化疫苗 抗原性 凝集效价

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贺江典型海弯水虱种群动态监测及生物防控

12

作者 赵飞 谭爱萍 +2 位作者 罗理 王伟利 邹为民 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期512-517,共6页

2006-2010年通过"人工诱捕"和"天然捕获"的方法对贺江典型海弯水虱种群动态进行监测,评价生物防控的效果。结果显示:典型海弯水虱在4-6月的寄生数量最少;推测其生命周期为1a,6月是世代交替期,种群世代不重叠或重叠... 2006-2010年通过"人工诱捕"和"天然捕获"的方法对贺江典型海弯水虱种群动态进行监测,评价生物防控的效果。结果显示:典型海弯水虱在4-6月的寄生数量最少;推测其生命周期为1a,6月是世代交替期,种群世代不重叠或重叠不明显;试验发现草鱼、青鱼、鲤能主动捕食典型海弯水虱。选择典型海弯水虱寄生数量最少的4-6月作为放流时间,于2007-2009年在贺江人工放流草鱼、青鱼、鲤156万尾;比较2006-2010年人工诱捕的典型海弯水虱的数量,发现从2008年开始,典型海弯水虱的数量逐年减少,2010年诱捕到的典型海弯水虱的数量比2006年减少85.1%;天然捕获贺江野生鲮和,发现在2009年9月至2010年8月,典型海弯水虱对鲮和的感染率、平均感染强度和平均密度均比2006年9月至2007年8月显著降低。以上结果初步表明生物防控取得了一定的效果。 展开更多

关键词 典型海弯水虱 种群动态 生物防控 感染参数 贺江

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两株草鱼源维氏气单胞菌菌株的主要表型特征及致病力比较 被引量：15

13

作者 任燕 高彩霞 +6 位作者 曾伟伟 王庆 王英英 李莹莹 尹纪元 常藕琴 石存斌 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期145-150,共6页

维氏气单胞菌(A.veronii)是严重危害草鱼的一种病原。本研究从电镜观察、Biolog微生物自动分析仪鉴定、细菌游动能力、胞外产物活性、细胞黏附性、对草鱼致病力和毒力基因等方面,比较草鱼源A.veronii菌株GZ09007和FS12001的表型特征和... 维氏气单胞菌(A.veronii)是严重危害草鱼的一种病原。本研究从电镜观察、Biolog微生物自动分析仪鉴定、细菌游动能力、胞外产物活性、细胞黏附性、对草鱼致病力和毒力基因等方面,比较草鱼源A.veronii菌株GZ09007和FS12001的表型特征和致病性差异。结果显示,两株细菌菌体均呈短杆状或弧形、两端钝圆,在透射电镜下可见单鞭毛。Biolog微生物自动分析仪鉴定结果显示菌株均为A.veronii,两株细菌均具有游动能力,胞外产物具有溶血活性、溶蛋白活性和脂肪酶活性,但GZ09007的游动能力、溶血活性、蛋白酶活性均显著强于FS12001 (p<0.05)。GZ09007对EPC、CIK细胞黏附性弱,FS12001的细胞黏附性强,两株细菌的细胞黏附性差异显著(p<0.05)。菌株GZ09007具有aerA、act、lip、ser、exu、fla毒力基因,但未检测到ast、alt、gcaT、ahyB等毒力基因;菌株FS12001具有aerA、act、alt、ast、lip、ser、ahyB、exu毒力基因,但未检测到gcaT、fla毒力基因。两株细菌均可以造成草鱼发病死亡,GZ09007对草鱼的LD_(50)为5.6×10~6cfu,而FS12001的LD_(50)则高于1.5×10~8cfu。表明GZ09007为强毒株,FS12001为弱毒株。推测A.veronii胞外产物的溶血活性和溶蛋白活性在其感染和致死草鱼过程中起到了关键作用。本研究结果为进一步探究A.veronii菌株的致病机理提供依据。 展开更多

关键词 维氏气单胞菌 毒力 表型 致病性

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黄金鲫源霍乱弧菌的分离鉴定及毒力检测 被引量：6

14

作者 任燕 王庆 +4 位作者 王英英 李莹莹 曾伟伟 高彩霞 石存斌 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期891-896,共6页

为研究引起江苏连云港某水产养殖场黄金鲫死亡的病原,本研究对黄金鲫内脏进行细菌分离、鉴定,并将获得的优势菌株进行动物回归实验、毒力因子检测和药物敏感试验。细菌的表型特征、16SrRNA和gyrB基因进化分析及血清型鉴定结果显示该菌... 为研究引起江苏连云港某水产养殖场黄金鲫死亡的病原,本研究对黄金鲫内脏进行细菌分离、鉴定,并将获得的优势菌株进行动物回归实验、毒力因子检测和药物敏感试验。细菌的表型特征、16SrRNA和gyrB基因进化分析及血清型鉴定结果显示该菌株为非O1/非O139群霍乱弧菌(Vibrio cholerae),编号为YQ1。该菌株具有lolB、ompU、hlyAClass、hlyAET、toxR等毒力基因,但不具有ctxA、ctxB、tcpAClass、tcpAET、tcpI、zot、stn/sto等毒力基因。动物回归实验显示该菌为致病菌,能够导致健康黄金鲫鱼死亡,其半数致死量LD50为3.0×10~5cfu。该菌株对萘啶酸、恩诺沙星等12种抗生素敏感,对新霉素中度敏感,对磺胺间甲氧嘧啶、氨苄西林耐药。研究结果确定非O1/非O139群V.choleraeYQ1为引起黄金鲫大量死亡的致病菌。本研究为该病的诊断和防治提供实验依据。 展开更多

关键词 黄金鲫 非O1/非O139群霍乱弧菌 鉴定 毒力基因 药物敏感性

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Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒三种定量检测方法的比较与评价 被引量：1

15

作者 曾伟伟 王英英 +7 位作者 尹纪元 汤亚方 李莹莹 王庆 高彩霞 任燕 刘春 石存斌 《淡水渔业》 CSCD 北大核心 2019年第6期63-69,共7页

为了解决Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒(grass carp reovirus genotypeⅡ,GCRV-Ⅱ)含量和滴度测定方法的选择问题,本研究利用荧光定量PCR(quantitative PCR,qPCR)、免疫过氧化物酶单层细胞试验(immunoperoxidase monolayer assay,IPMA)和间接免疫... 为了解决Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒(grass carp reovirus genotypeⅡ,GCRV-Ⅱ)含量和滴度测定方法的选择问题,本研究利用荧光定量PCR(quantitative PCR,qPCR)、免疫过氧化物酶单层细胞试验(immunoperoxidase monolayer assay,IPMA)和间接免疫荧光试验(indirect fluorescent assay,IFA)三种方法来对GCRV-Ⅱ进行检测和含量测定,从特异性、敏感性、可靠性和检测结果的相关性来比较这三种方法对于GCRV-Ⅱ定量检测的差异。结果显示:qPCR、IPMA和IFA三种方法检测GCRV-Ⅱ的最低限分别为8.6、86和86拷贝/μL,qPCR的检测灵敏度比IPMA和IFA高一个数量级;特异性分析表明,qPCR、IPMA和IFA三种方法均只能检测出GCRV-Ⅱ型分离株,而其它病毒和未感染病毒的阴性对照细胞均为检测阴性,表明这三种方法均具有较高的特异性;3种方法分别检测60份已知临床样品,qPCR、IPMA和IFA的诊断敏感性和特异性分别为96.7%(29/30)和100%(30/30)、100%(30/30)和93.3%(28/30)及100%(30/30)和100%(30/30);三种方法对于GCRV-Ⅱ的定量检测结果中病毒拷贝数和病毒滴度之间具有较好的相关性,其拟合曲线分别为:Y(IPMA,TCID 50/mL)=23.629 X-536174(qPCR,拷贝/mL)(R 2=0.996)、Y(IFA,TCID 50/mL)=20.318 X-575062(qPCR,拷贝/mL)(R^2=0.995)和Y(IPMA,TCID 50/mL)=1.161 X-1176(IFA,TCID 50/mL)(R^2=0.999)。结果表明,GCRV-Ⅱ病毒滴度的测定,除了用IPMA和IFA外,也可以采用qPCR方法通过测定病毒的核酸拷贝数来测算其病毒滴度。 展开更多

关键词 草鱼呼肠孤病毒 荧光定量PCR 免疫过氧化物酶单层细胞试验 间接免疫荧光试验 病毒滴度

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