泡菜等产品中寄生虫卵的检验方法研究 被引量：7

1

作者 吴绍强 林祥梅 +4 位作者 葛建军 韩雪清 刘建 贾广乐 梅琳 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期173-174,177,共3页

泡菜等相关产品中携带寄生虫卵的潜在威胁不容忽视。在调查、取样的基础上,本研究进行了泡菜等产品中寄生虫卵分离方法的研究,并用模拟阳性泡菜样品进行了猪蛔虫卵的回收率实验。经采用泡菜、辣椒酱等样品进行验证,本研究建立了包括过... 泡菜等相关产品中携带寄生虫卵的潜在威胁不容忽视。在调查、取样的基础上,本研究进行了泡菜等产品中寄生虫卵分离方法的研究,并用模拟阳性泡菜样品进行了猪蛔虫卵的回收率实验。经采用泡菜、辣椒酱等样品进行验证,本研究建立了包括过滤、离心、漂浮、麦克马斯特(McMaster)虫卵计数板观察等程序的虫卵检验操作规程。回收率实验表明,本方法对泡菜样品中猪蛔虫卵的回收率为35.49%,可以满足相关产品的检验需求。 展开更多

关键词 泡菜 寄生虫卵 检验 回收率

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全球植物重要害虫种类数量及中国发生比例 被引量：5

2

作者 陈乃中 杨晓军 +1 位作者 马菲 安榆林 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期122-122,共1页

关键词 植物害虫 种类数量 中国 全球 进境植物检疫 湿地松粉蚧 美洲斑潜蝇 红脂大小蠹 美国白蛾

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应用TaqMan探针进行马铃薯金线虫实时荧光PCR检测技术研究 被引量：8

3

作者 葛建军 曹爱新 +1 位作者 陈洪俊 Marice Moens 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期105-109,共5页

马铃薯孢囊线虫是全球性的植物检疫性线虫,亦是我国重点关注的有害生物。针对马铃薯金线虫ITS序列,设计了引物和TaqMan探针,使用15个马铃薯孢囊线虫群体和4个其他孢囊线虫样品进行验证,可高度灵敏地检测单个马铃薯金线虫的孢囊或幼虫,... 马铃薯孢囊线虫是全球性的植物检疫性线虫,亦是我国重点关注的有害生物。针对马铃薯金线虫ITS序列,设计了引物和TaqMan探针,使用15个马铃薯孢囊线虫群体和4个其他孢囊线虫样品进行验证,可高度灵敏地检测单个马铃薯金线虫的孢囊或幼虫,并可进行定量;最高检测灵敏度达到10fg;同时开展了混合样品和未知样品的检测,证明了引物的专化性和TaqMan探针的特异性。该检测方法可自动化检测马铃薯金线虫并进行定量,适合进行标准化的常规检测。 展开更多

关键词 马铃薯金线虫 分子检测 实时荧光PCR

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假病毒在RNA病毒检测中的应用研究进展 被引量：8

4

作者 邓俊花 林祥梅 吴绍强 《中国动物检疫》 CAS 2009年第11期67-69,共3页

由于核酸检测对于病毒感染的早期诊断和抗病毒治疗疗效的动态观察具有重要价值，近年来，基于RNA的核酸检测技术，如RT—PCR扩增（Mulder，1994）、核酸依赖的序列扩增（NASBA）（Van Gemen，1994）、分枝链DNA（Pachl，1995）、转录调... 由于核酸检测对于病毒感染的早期诊断和抗病毒治疗疗效的动态观察具有重要价值，近年来，基于RNA的核酸检测技术，如RT—PCR扩增（Mulder，1994）、核酸依赖的序列扩增（NASBA）（Van Gemen，1994）、分枝链DNA（Pachl，1995）、转录调控扩增等技术快速发展起来并广泛应用于RNA病毒的检测。在RNA病毒的定性和定量核酸检测中，实验人员操作中的随机误差、扩增仪孔间温度的差异、标本核酸提取后抑制物的残留、待扩增靶核酸的浓度和逆转录的效率及试剂的问题等， 展开更多

关键词 RNA病毒 病毒检测 应用 假病毒 核酸检测 检测技术 抗病毒治疗 PCR扩增

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基于PCR及焦磷酸测序技术的单孢子虫鉴定技术研究与应用 被引量：2

5

作者 王彩霞 林祥梅 +1 位作者 邓俊花 吴绍强 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2011年第5期92-96,共5页

为适应口岸单孢子虫快速、准确、高通量检测的需求,建立一种基于PCR及焦磷酸测序技术平台的单孢子虫鉴定方法。以OIE推荐的PCR扩增方法获得单孢子虫特异基因,根据此基因的保守序列利用焦测序软件PyroMarkQ96ID设计专用引物进行PCR扩增... 为适应口岸单孢子虫快速、准确、高通量检测的需求,建立一种基于PCR及焦磷酸测序技术平台的单孢子虫鉴定方法。以OIE推荐的PCR扩增方法获得单孢子虫特异基因,根据此基因的保守序列利用焦测序软件PyroMarkQ96ID设计专用引物进行PCR扩增及焦磷酸测序,测得序列经比对分析确定为单孢子虫序列。同时采用PCR焦磷酸测序方法和OIE推荐的PCR方法对牡蛎样品进行检测。结果表明,所建立的检测方法可从基因序列水平上准确鉴定牡蛎样品中的单孢子虫,且检测结果与OIE方法的检测结果一致。 展开更多

关键词 尼氏单孢子虫 牡蛎 聚合酶链反应 焦磷酸测序 鉴定

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食源性寄生虫病的危害及检测研究现状 被引量：9

6

作者 孙晓智 吴绍强 《中国畜牧兽医》 CAS 2007年第8期104-106,共3页

作者就近年来国内外危害严重的蛔虫、广州管圆线虫、异尖线虫、弓形虫、贾第鞭毛虫和隐孢子虫、卫氏并殖吸虫、华支睾吸虫等几种寄生虫引起的食源性寄生虫病的危害和检测研究现状进行了综述。

关键词 食源性线虫 食源性原虫 吸虫

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荧光定量PCR技术及其在动物检疫中的应用 被引量：2

7

作者 孙晓智 石鑫 吴绍强 《中国动物检疫》 CAS 北大核心 2006年第12期46-48,共3页

关键词 PCR技术 荧光定量 动物检疫 应用 PCR反应体系 交叉污染 chain PCR方法

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基于分子遗传标记技术的舞毒蛾种群遗传关系研究进展 被引量：2

8

作者 周贤 陈乃中 杨定 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期1-5,共5页

在简要介绍以形态、行为、生态学为依据的舞毒蛾分类发展的基础上,概述了分子遗传标记技术在舞毒蛾种群鉴定、起源、分化、入侵和扩散方面的研究进展,初步分析了我国舞毒蛾种群遗传关系研究的现存问题,并提出建议。

关键词 舞毒蛾 分子遗传标记 种群遗传关系

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转人乳铁蛋白基因奶牛多重PCR检测方法的研究 被引量：1

9

作者 朱振营 李风翠 +7 位作者 林祥梅 吴绍强 仇松寅 李宁 王建武 薛振华 刘建 张书霞 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第11期73-76,共4页

本研究旨在建立转基因奶牛多重PCR快速检测方法,为转基因动物及产品出入境检测技术平台的建立提供技术支持,并为转基因动物及产品检测技术标准的制定提供参考。根据牛物种特异性基因(mtDNA)设计奶牛内源基因引物,根据外源基因人乳铁蛋... 本研究旨在建立转基因奶牛多重PCR快速检测方法,为转基因动物及产品出入境检测技术平台的建立提供技术支持,并为转基因动物及产品检测技术标准的制定提供参考。根据牛物种特异性基因(mtDNA)设计奶牛内源基因引物,根据外源基因人乳铁蛋白基因(human lactoferrin,hLF)和新霉素磷酸转移酶基因(NPTⅡ)设计特异性引物,优化反应条件,建立转基因奶牛多重PCR检测方法。本方法敏感、快速、特异,一个反应可以检测多个基因片段,可有效用于转基因奶牛外源基因的检测。 展开更多

关键词 转基因奶牛 多重PCR hLF基因

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牡蛎包拉米虫病的研究进展 被引量：5

10

作者 李海艳 吴绍强 《中国畜牧兽医》 CAS 2008年第10期104-107,共4页

作者从病原分类学、形态学、流行病学、病理学、检测手段的角度,阐述了牡蛎包拉米虫病的现状及研究进展,为进一步研究牡蛎包拉米虫病提供参考。

关键词 牡蛎包拉米虫 病原 流行病学 诊断

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重组红火蚁毒素蛋白SoliⅣ致病机理的初步研究 被引量：1

11

作者 王建峰 林祥梅 +3 位作者 张书霞 韩雪清 吴绍强 杨泽晓 《中国畜牧兽医》 CAS 2008年第1期83-86,共4页

作者通过研究重组红火蚁毒素蛋白Solenopsis invicta Ⅳ(Soli Ⅳ)对兔及外周血淋巴细胞的影响,探讨红火蚁毒素蛋白致病机制。通过分离兔外周血淋巴细胞进行培养,经不同浓度的重组红火蚁毒素蛋白Soli Ⅳ分别和细菌脂多糖(LPS)、刀豆蛋白(... 作者通过研究重组红火蚁毒素蛋白Solenopsis invicta Ⅳ(Soli Ⅳ)对兔及外周血淋巴细胞的影响,探讨红火蚁毒素蛋白致病机制。通过分离兔外周血淋巴细胞进行培养,经不同浓度的重组红火蚁毒素蛋白Soli Ⅳ分别和细菌脂多糖(LPS)、刀豆蛋白(ConA)共同刺激后,MTT法测定淋巴细胞的增殖情况;体内试验:用重组蛋白Soli Ⅳ从兔背部皮下注入,观察兔的临床反应,定期采血,用ELISA方法测定兔血清中白介素-4(IL-4)和总IgE的变化。重组红火蚁毒素蛋白Soli Ⅳ浓度为25、50、75μg/ml和LPS共刺激时,与单独LPS刺激对照组相比,淋巴细胞增殖活性显著增高(P<0.05);浓度为15、25、50、75μg/ml和ConA共刺激时,与单独ConA刺激对照组比较,淋巴细胞增殖活性显著增高(P<0.05);重组Soli Ⅳ过敏兔的血清中IL-4和总IgE的水平升高,在20 h左右达到最高值。试验结果表明,一定浓度的重组红火蚁毒素蛋白Soli Ⅳ能引起体外培养的T、B淋巴细胞增殖,过敏体质兔在重组红火蚁毒素蛋白Soli Ⅳ刺激后能引起Ⅰ型变态反应。 展开更多

关键词 重组红火蚁毒素蛋白SoliⅣ 过敏反应 淋巴细胞 MTT ELISA

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胶体金免疫层析法快速检测李痘病毒的研究

12

作者 陈定虎 朱祺钢 +5 位作者 苏斐 陈萍 陈文聪 郑传发 吴颖儿 魏梅生 《科技创新与应用》 2017年第2期12-13,共2页

用RT-PCR的方法克隆李痘病毒的外壳蛋白(CP)基因,然后将其连接到原核表达载体p ET29(a)上,得到p ET29a-PPV重组载体,然后将该载体转化大肠杆菌BL21(DE3),经过IPTG诱导PPV CP基因在大肠杆菌中得到了高效表达。回收表达蛋白后免疫家兔,获... 用RT-PCR的方法克隆李痘病毒的外壳蛋白(CP)基因,然后将其连接到原核表达载体p ET29(a)上,得到p ET29a-PPV重组载体,然后将该载体转化大肠杆菌BL21(DE3),经过IPTG诱导PPV CP基因在大肠杆菌中得到了高效表达。回收表达蛋白后免疫家兔,获得PPV特异性抗血清,经过酶联免疫吸附法测定其效价达到3.2×104,然后采用该抗血清制备出专门检测李痘病毒的胶体金免疫试纸条,测试结果表明,该试纸条不仅特异性强、稳定性好,灵敏度也高,可以检测到1μg/m L粗提病毒和稀释100倍的病汁液,操作简便,10分钟之内即可出检测结果,特别适宜口岸检疫和田间快速诊断。 展开更多

关键词 李痘病毒 免疫层析 检测

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基于CLIMEX与GARP的三叶草斑潜蝇在中国的潜在分布预测 被引量：8

13

作者 刘海军 陈洪俊 +2 位作者 吴佳教 胡学难 李镇宇 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期88-91,F0002,共5页

运用适生性分析软件CLIMEX与GARP对三叶草斑潜蝇Liriomyza trifolii(Burgess)在我国的潜在分布区进行预测。CLIMEX预测结果显示,全国638个气候站点中有415个站点的生态气候指数Ei﹥0,分布于30个省(或地区),在这些地区三叶草斑潜蝇存在... 运用适生性分析软件CLIMEX与GARP对三叶草斑潜蝇Liriomyza trifolii(Burgess)在我国的潜在分布区进行预测。CLIMEX预测结果显示,全国638个气候站点中有415个站点的生态气候指数Ei﹥0,分布于30个省(或地区),在这些地区三叶草斑潜蝇存在定殖的潜在性。同时,GARP预测认为三叶草斑潜蝇的适生区主要覆盖我国东北地区、华北地区、华中地区和华南地区。将两个软件预测结果进行叠加分析显示预测结果基本吻合。潜在适生区叠加区域位于东北地区、华北地区、华中地区以及华南的部分地区,这些地区属于三叶草斑潜蝇的高度危险区域。 展开更多

关键词 三叶草斑潜蝇 CLIMEX GARP 潜在分布区预测

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我国木本植物致病性土壤杆菌的分子检测和比较鉴定 被引量：5

14

作者 田国忠 李永 +2 位作者 朱水芳 贾瑞祥 王慧敏 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第2期63-72,共10页

根据根癌土壤杆菌Ti质粒的保守序列设计了2对引物,对我国不同木本植物上分离鉴定的10株致病性根癌土壤杆菌进行PCR,致瘤性根癌土壤杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)扩增出427bp和338bp的特异性DNA片段,而发根土壤杆菌(A.rhizogenes)仅扩... 根据根癌土壤杆菌Ti质粒的保守序列设计了2对引物,对我国不同木本植物上分离鉴定的10株致病性根癌土壤杆菌进行PCR,致瘤性根癌土壤杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)扩增出427bp和338bp的特异性DNA片段,而发根土壤杆菌(A.rhizogenes)仅扩增出338bp片段,放线土壤杆菌(A.radiobacter)、丁香假单胞菌(Pseudomonassyringae)和泡桐丛枝病植原体(phytoplasma)皆未有特异扩增带。用CYTCYT’引物对也可鉴定TDNA遗传转化瘤组织,而VirD2AVirD2E可用于工程土壤杆菌株侵染能力鉴定。从北京通州杨树苗圃和河北廊坊桃园的病树冠瘿组织和土壤中经选择培养基分离菌株,然后PCR筛选出6个致病性根癌土壤杆菌菌株,而未能从施用过抗根癌生防制剂的北京玉渊潭公园樱花根癌病园中分离和鉴定出典型的致病根癌土壤杆菌株。将杨树根癌土壤杆菌菌株(CFCC1001)异戊烯基转移酶基因(ipt)片段克隆和序列测定结果显示与A.tumefaciensTi15955菌株的ipt基因序列同源性为83.64%。用此片段制备的iptcRNA基因探针进行斑点杂交和Northernblot,结果显示此探针与杨树根癌土壤杆菌以及玫瑰、樱花、海棠、桃树等木本植物上分离鉴定的致病土壤杆菌菌株所扩增出的427bp片段都有明显杂交信号,但与引起泡桐丛枝病植原体染色质和染色质外DNA均未有明显杂交信号。 展开更多

关键词 土壤杆菌 多聚酶链式反应 ipt和VirD2基因 核酸杂交 泡桐丛枝植原体

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松材线虫rDNA-ITS2的Taq Man探针实时荧光PCR检测 被引量：23

15

作者 王明旭 朱水芳 +2 位作者 罗宽 周李华 赵文军 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第2期82-85,共4页

以松材线虫rDNA -ITS2为靶区 ,建立松材线虫的TaqMan探针实时荧光PCR检测方法。对松材线虫大量DNA和单条线虫的检测结果表明 ,探针检测松材线虫和拟松材线虫时 ,前者产生明显的荧光信号 ,后者无荧光信号 ,表明探针具有高度的特异性 ;探... 以松材线虫rDNA -ITS2为靶区 ,建立松材线虫的TaqMan探针实时荧光PCR检测方法。对松材线虫大量DNA和单条线虫的检测结果表明 ,探针检测松材线虫和拟松材线虫时 ,前者产生明显的荧光信号 ,后者无荧光信号 ,表明探针具有高度的特异性 ;探针检测到最低模板浓度为 1pg·μL- 1 。 展开更多

关键词 TAQMAN探针 RDNA-ITS2 实时荧光PCR检测方法 荧光信号 拟松材线虫 DNA测序 检测结果 模板浓度 特异性

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泡菜中蛔虫卵荧光PCR检测方法的建立及应用 被引量：8

16

作者 吴绍强 林祥梅 +5 位作者 韩雪清 贾广乐 刘建 梅琳 石鑫 孙晓智 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第11期345-349,共5页

在模拟阳性泡菜样品中寄生虫卵分离的基础上,本研究通过对单蛔虫卵分别进行加热、液氮/37℃反复冻融、PCR缓冲液冻融、裂解液消化等四种前处理后进行荧光PCR检测,表明将虫卵进行液氮/37℃反复冻融15次后用于荧光PCR检测的效果确实而稳... 在模拟阳性泡菜样品中寄生虫卵分离的基础上,本研究通过对单蛔虫卵分别进行加热、液氮/37℃反复冻融、PCR缓冲液冻融、裂解液消化等四种前处理后进行荧光PCR检测,表明将虫卵进行液氮/37℃反复冻融15次后用于荧光PCR检测的效果确实而稳定。所建立的蛔虫卵荧光PCR检测方法特异性好,与鞭虫、毛圆线虫等动物寄生虫线虫不存在交叉反应,可以很好的区分蛔虫与其它动植物线虫卵。敏感性可以满足单个蛔虫卵的检测需要。本方法的建立为泡菜等植物性产品中携带的疑似蛔虫卵的鉴定提供了科学依据。 展开更多

关键词 泡菜 蛔虫卵 鉴定 荧光PCR 食品 寄生虫

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环介导恒温扩增技术快速检测非洲猪瘟病毒 被引量：17

17

作者 王彩霞 刘建 +1 位作者 林祥梅 吴绍强 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2010年第2期15-19,共5页

以人工合成的非洲猪瘟病毒(ASFV)P72全长基因为模板,利用在线软件Primer Explorer4设计环介导恒温扩增(LAMP)的内、外引物,通过对反应体系和反应条件进行优化,建立了ASFV的LAMP检测方法,同时进行了敏感性和特异性试验。结果表明,所建立... 以人工合成的非洲猪瘟病毒(ASFV)P72全长基因为模板,利用在线软件Primer Explorer4设计环介导恒温扩增(LAMP)的内、外引物,通过对反应体系和反应条件进行优化,建立了ASFV的LAMP检测方法,同时进行了敏感性和特异性试验。结果表明,所建立的LAMP检测方法最低检测限可达10拷贝质粒DNA,且具有良好的特异性,LAMP产物的酶切鉴定也验证了反应的特异性。对凝胶电泳后紫外观察、肉眼观察颜色变化、生成沉淀观察以及实时荧光PCR扩增曲线Ct值判定等不同判定方法进行比较表明,以上结果判定方法各有其优缺点,其中荧光PCR的敏感性最高,染色法相对较方便直观,电泳法敏感性稍低。 展开更多

关键词 非洲猪瘟病毒 环介导恒温扩增 敏感性 特异性

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马铃薯X病毒和马铃薯Y病毒胶体金免疫层析试纸条的研制 被引量：29

18

作者 魏梅生 刘洪义 +1 位作者 李桂芬 陈燕芳 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期139-141,共3页

采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记马铃薯X病毒和马铃薯Y病毒的兔多克隆抗体。用微定量喷头在硝酸纤维素膜上喷好病毒检测线和羊抗兔抗体质控线,制成免疫层析检测试纸条。马铃薯X病毒试纸条检测烟草病汁液可稀释10000倍(重量/体... 采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记马铃薯X病毒和马铃薯Y病毒的兔多克隆抗体。用微定量喷头在硝酸纤维素膜上喷好病毒检测线和羊抗兔抗体质控线,制成免疫层析检测试纸条。马铃薯X病毒试纸条检测烟草病汁液可稀释10000倍(重量/体积)马铃薯Y病毒试纸条检测烟草病汁液可稀释1000倍。10min内即可出检测结果。两种试纸条相互测试,未出现交叉反应。用健康和缓冲液对照测试,两种试纸条结果都为阴性。田间采集的马铃薯叶片用试纸条检测的结果和酶联结果相吻合。在密封、干燥、低温的条件下保存,有利于维持试纸条的稳定性。 展开更多

关键词 马铃薯X病毒 马铃薯Y病毒 胶体金免疫层析法 免疫试纸条

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基于ITS序列的菟丝子PCR鉴定 被引量：10

19

作者 高必达 程毅 +1 位作者 朱水芳 喻锦秀 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期368-370,共3页

提取了7个药用菟丝子种样品的DNA,采用ITS序列扩增通用引物对其进行PCR扩增,并对PCR产物进行克隆和测序.根据所测得菟丝子ITS全长序列与其常见易混品所在属的代表植物ITS序列比对,设计了一对特异性引物并进行了PCR检测.结果表明,此对引... 提取了7个药用菟丝子种样品的DNA,采用ITS序列扩增通用引物对其进行PCR扩增,并对PCR产物进行克隆和测序.根据所测得菟丝子ITS全长序列与其常见易混品所在属的代表植物ITS序列比对,设计了一对特异性引物并进行了PCR检测.结果表明,此对引物能将药用菟丝子种子与4种易混品区分开来,可以用于药用菟丝子的真伪鉴定. 展开更多

关键词 菟丝子 ITS序列 分子鉴定

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桃蛀螟在新疆的适生区预测 被引量：12

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作者 马菲 何友元 +1 位作者 赵林忠 陈乃中 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期136-138,170,共3页

为确定桃蛀螟在新疆的检疫重要性,运用Desktop GARP软件预测了该虫在我国新疆的适生区。结果表明,桃蛀螟在新疆北部和西部有较大的适生区域,主要位于阿勒泰、塔城、昌吉三地的交界区域和阿克苏、喀什一带。桃蛀螟有从内地传入新疆地区... 为确定桃蛀螟在新疆的检疫重要性,运用Desktop GARP软件预测了该虫在我国新疆的适生区。结果表明,桃蛀螟在新疆北部和西部有较大的适生区域,主要位于阿勒泰、塔城、昌吉三地的交界区域和阿克苏、喀什一带。桃蛀螟有从内地传入新疆地区并定殖扩散的风险,具有检疫意义。 展开更多

关键词 桃蛀螟 GARP 新疆 适生区

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