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先天性巨结肠组织蛋白质组成分的双向凝胶电泳分析 被引量:2
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作者 高红 吕良英 +4 位作者 白伟良 王大佳 黄英 张志波 王维林 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期761-763,共3页
目的分析先天性巨结肠(HD)狭窄段及正常段肠管组织双向凝胶电泳的蛋白质表达图谱,寻找差异表达的蛋白质。方法采用固相pH梯度双向聚丙烯酰胺凝胶电泳(2-DE)分离20例HD患者配对狭窄段及正常段肠管组织的总蛋白,银染显色,Image Master 2D ... 目的分析先天性巨结肠(HD)狭窄段及正常段肠管组织双向凝胶电泳的蛋白质表达图谱,寻找差异表达的蛋白质。方法采用固相pH梯度双向聚丙烯酰胺凝胶电泳(2-DE)分离20例HD患者配对狭窄段及正常段肠管组织的总蛋白,银染显色,Image Master 2D Platinum 6.0软件分析差异表达的蛋白质点。结果获得了重复性较好的2-DE银染图谱。图像分析显示,狭窄段和正常段肠管组织凝胶的平均匹配率分别为78.1%和86.7%。差异分析共获得103个差异表达的蛋白质点。结论采用2-DE分离HD肠管组织的总蛋白可获得重复性较好的结果。获得的差异蛋白质点为寻找HD早期诊断的分子标记物提供了基础资料。 展开更多
关键词 先天性巨结肠 蛋白质组学 双向凝胶电泳 差异表达
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COLIA1调控小鼠神经细胞迁移在神经管畸形中的作用 被引量:1
2
作者 黄天楚 黄琬淇 +1 位作者 顾卉 袁正伟 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期966-969,共4页
目的探讨Ⅰ型胶原蛋白α1(COLIA1)调控神经细胞迁移活动对小鼠神经管闭合的作用。方法利用全反式维甲酸(ATRA)诱导建立神经管畸形(NTDs)小鼠模型。采用Western blotting检测COLIA1,上皮细胞间质转化(EMT)相关指标E-cadherin、Snail、Vim... 目的探讨Ⅰ型胶原蛋白α1(COLIA1)调控神经细胞迁移活动对小鼠神经管闭合的作用。方法利用全反式维甲酸(ATRA)诱导建立神经管畸形(NTDs)小鼠模型。采用Western blotting检测COLIA1,上皮细胞间质转化(EMT)相关指标E-cadherin、Snail、Vimentin表达情况。在C17.2神经干细胞中沉默COLIA1后,Western blotting检测COLIA1对E-cadherin、Snail和Vimentin表达的调节作用,通过Transwell细胞迁移实验和细胞划痕实验观察细胞迁移生物学活动变化。结果在ATRA诱导的NTDs小鼠模型中,COLIA1表达下调,迁移相关的EMT指标Snail、Vimentin表达下调,E-cadherin表达上调。在C17.2神经干细胞中,沉默COLIA1表达后,EMT指标Snail、Vimentin表达下调,E-cadherin表达上调,细胞迁移能力降低。结论COLIA1通过影响细胞迁移抑制NTDs的形成。 展开更多
关键词 Ⅰ型胶原蛋白α1 神经管畸形 细胞迁移 上皮细胞间质转化
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利用同位素标记相对和绝对定量技术筛查神经管畸形胚胎孕鼠血清差异蛋白质谱 被引量:2
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作者 安东 袁正伟 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期315-319,323,共6页
目的筛查神经管畸形相关血清标记物,为阐明神经管畸形的发病机制提供理论依据。方法应用维甲酸在大鼠神经管闭合的关键期(孕10 d,E10)给药,建立脊柱裂大鼠模型,选取致畸早期孕11、13 d (E11、E13)显性脊柱裂胚胎孕鼠和正常胚胎孕鼠血清... 目的筛查神经管畸形相关血清标记物,为阐明神经管畸形的发病机制提供理论依据。方法应用维甲酸在大鼠神经管闭合的关键期(孕10 d,E10)给药,建立脊柱裂大鼠模型,选取致畸早期孕11、13 d (E11、E13)显性脊柱裂胚胎孕鼠和正常胚胎孕鼠血清各5例,应用同位素标记相对和绝对定量技术(iTRAQ)和液相色谱质谱鉴定技术分析2组蛋白质,定量信息以蛋白的丰度比差异倍数1.5倍以上(P <0.05)为差异蛋白质。结果质谱共得到谱图157 422张,鉴定出390种蛋白质,发现E11维甲酸致畸组与正常对照组差异蛋白40种,E13维甲酸致畸组与正常对照组差异蛋白26种。结论筛选出致畸早期大量神经管畸形和正常孕鼠血清差异蛋白,差异蛋白通过直接或间接相互作用,促进或抑制神经管畸形的发生与发展。 展开更多
关键词 神经管畸形 同位素标记相对和绝对定量技术 蛋白组学
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SELDI技术对开放性脊柱裂胎鼠羊水蛋白质组学的初步分析 被引量:1
4
作者 刘振江 袁正伟 赵群 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期26-30,33,共6页
目的利用表面增强激光解析/离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术对脊柱裂胎鼠模型的羊水进行初步的蛋白质组学分析。方法将25只雌性Wistar大鼠随机分为脊柱裂组(n=15)和对照组(n=10)。于妊娠第10日(E10)8时,脊柱裂组孕鼠经胃管注入全... 目的利用表面增强激光解析/离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术对脊柱裂胎鼠模型的羊水进行初步的蛋白质组学分析。方法将25只雌性Wistar大鼠随机分为脊柱裂组(n=15)和对照组(n=10)。于妊娠第10日(E10)8时,脊柱裂组孕鼠经胃管注入全反式维甲酸与矿物油的混合物(140 mg/kg);对照组孕鼠给予等量的橄榄油。于妊娠第17日(E17)取胎鼠,立体显微镜下抽取羊水(0.2 mL/只)并确定开放性脊柱裂胎鼠。选取60只脊柱裂胎鼠和55只对照组胎鼠的羊水离心取上清。采用PBSⅡC型蛋白质芯片阅读机读取数据。采用Ciphergen protein chip 3.1.1软件对数据进行统计分析。SELDI数据结果采用分类与回归树分析建立诊断模型,用于区分脊柱裂组胎鼠与对照组胎鼠。结果脊柱裂胎鼠羊水中共检测到55个差异蛋白峰,有统计学意义的差异蛋白峰有9个。包括5种蛋白峰高表达,优化相对分子质量(m/z)分别为11 658,27 387,7 898,11 603,13 831 Da;4种蛋白峰低表达,m/z分别为5 124,14 702,5 403,13 626 Da。选取m/z 13 831 Da和m/z 17 798 Da用于建立决策分类树诊断模型,诊断灵敏度93.33%,特异度96.36%,阳性预测值96.55%,阴性预测值96.36%。结论 SELDI技术可初步筛选出脊柱裂胎鼠羊水中的差异蛋白峰,这些蛋白可能是脊柱裂胎鼠羊水中的特异性羊水标志物。 展开更多
关键词 神经管缺陷 脊柱裂 表面增强激光解析 离子化飞行时间质谱 羊水 蛋白标志物
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表面增强激光解析离子化飞行时间质谱技术研究神经管缺陷胎儿母亲尿液中蛋白质谱改变规律 被引量:1
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作者 刘振江 袁正伟 赵群 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期220-224,共5页
目的探讨表面增强激光解析离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术在筛选神经管缺陷胎儿母亲尿液中蛋白质标志物的应用。方法经超声确诊为神经管缺陷胎儿的孕妇20例和正常孕妇15例。神经管缺陷包括脊柱裂10例,无脑儿5例,脑积水5例。所有... 目的探讨表面增强激光解析离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术在筛选神经管缺陷胎儿母亲尿液中蛋白质标志物的应用。方法经超声确诊为神经管缺陷胎儿的孕妇20例和正常孕妇15例。神经管缺陷包括脊柱裂10例,无脑儿5例,脑积水5例。所有孕妇均取清晨空腹尿5ml,离心后取上清,选用CM10芯片检测。采用PBSⅡC型蛋白质芯片阅读机读取数据。设定优化相对分子质量范围1000~30000Da。数据分析使用Ciphergen protein chip 3.1.1软件。结果共检测到39个尿液差异蛋白质峰,有统计学意义的差异蛋白质峰5个。病例组中有4种蛋白质高表达,相对分子质量分别为8320,8209,9099,10567;1种蛋白质低表达,相对分子质量3458。建立决策分类树,得到带有3个终结点的决策分类树,获得2个标志性蛋白质,分子量为9096,8244。进行留一法交叉验证后,神经管缺陷诊断模型的灵敏度为80.0%,特异度为93.3%。结论应用SELDI-TOF-MS技术可以在孕妇尿液中筛查出神经管缺陷的特异性蛋白质标志物,进一步可用于神经管缺陷产前早期无创诊断。 展开更多
关键词 神经管缺陷 表面增强激光解析离子化飞行时间质谱 产前诊断 蛋白质标志物
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脑脊液中微量的可溶型晚期糖基化终末产物受体检测方法建立与初步应用
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作者 李慧 袁正伟 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期175-177,共3页
目的利用电化学和纳米金颗粒相结合的技术检测脑脊液中的可溶型晚期糖基化终末产物受体(sRAGE)表达水平。方法依次利用肝素和特异性抗体的层析柱纯化sRAGE蛋白,把纯化的蛋白作为标准品检测电化学和纳米金颗粒相结合技术的准确性和灵敏度... 目的利用电化学和纳米金颗粒相结合的技术检测脑脊液中的可溶型晚期糖基化终末产物受体(sRAGE)表达水平。方法依次利用肝素和特异性抗体的层析柱纯化sRAGE蛋白,把纯化的蛋白作为标准品检测电化学和纳米金颗粒相结合技术的准确性和灵敏度,建立稳定的检测方法后,检查脑脊液中sRAGE的表达。结果重组sRAGE蛋白经2次纯化后,纯度超过95%。利用电化学和纳米金颗粒相结合的技术检测标准品的标准曲线,其R2值达到了0.96。利用其检测脑脊液样本证明sRAGE确实在脑脊液中表达,其表达量在pg水平。结论sRAGE存在于脑脊液中,电化学和纳米金颗粒相结合的技术可作为更灵敏的检测方法应用于临床及科研中。 展开更多
关键词 可溶性晚期糖基化终末产物受体 脑脊液
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孕妇血清淀粉样P物质作为神经管缺陷产前标志物的研究 被引量:5
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作者 董乃萱 顾卉 +4 位作者 刘丹 魏晓伟 马巍 马玲 袁正伟 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期883-886,共4页
目的验证血清淀粉样P物质(SAP)在正常孕妇和有神经管缺陷患儿的孕妇血清中的表达情况,探讨其作为神经管缺陷产前诊断标志物的可能。方法于清晨空腹抽取病例组(12例胎儿患神经管缺陷的孕妇)和对照组(12例胎儿正常的孕妇)外周静脉血5 mL... 目的验证血清淀粉样P物质(SAP)在正常孕妇和有神经管缺陷患儿的孕妇血清中的表达情况,探讨其作为神经管缺陷产前诊断标志物的可能。方法于清晨空腹抽取病例组(12例胎儿患神经管缺陷的孕妇)和对照组(12例胎儿正常的孕妇)外周静脉血5 mL后静置离心,抽取上层血清,用Western blotting方法检测SAP表达水平,并计算受试者操作特征(ROC)曲线,评估SAP诊断神经管缺陷的价值。结果在妊娠12~19周、21~28周时,病例组孕妇血清中SAP表达明显下调,差异有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线下面积(AUC)=0.770 8(95%CI:0.573 9~0.967 8,P<0.05)。当敏感度为83.33%时,其特异度为66.67%。结论胎儿神经管缺陷的孕妇血清中SAP表达显著降低,提示SAP有作为神经管缺陷的产前诊断标志物的潜在可能。 展开更多
关键词 血清淀粉样P物质 神经管缺陷 产前诊断 生物标志物
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氯胺酮长期滥用后小鼠海马区caspase-3和PSD-95的表达变化 被引量:2
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作者 杜傲 任鹏 +7 位作者 何柏林 杨顺成 丁润涛 沈瑞鹏 李延柠 董志斌 卢岩 吴旭 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期193-196,共4页
目的研究氯胺酮长期滥用模型中海马区半胱氨酸蛋白酶(caspase)3和突触后密度蛋白(PSD)95的表达变化。方法每日小鼠腹腔注射氯胺酮(30 mg/kg)、持续3个月建立小鼠氯胺酮长期滥用模型,采用免疫组化及Western blotting检测小鼠氯胺酮长期... 目的研究氯胺酮长期滥用模型中海马区半胱氨酸蛋白酶(caspase)3和突触后密度蛋白(PSD)95的表达变化。方法每日小鼠腹腔注射氯胺酮(30 mg/kg)、持续3个月建立小鼠氯胺酮长期滥用模型,采用免疫组化及Western blotting检测小鼠氯胺酮长期滥用后caspase-3和PSD-95的表达情况。结果免疫组化结果显示caspase-3表达增强,PSD-95表达减弱。Western blotting结果显示caspase-3活化片段蛋白表达升高,PSD-95蛋白表达下降。结论氯胺酮长期滥用致小鼠脑海马区caspase-3表达增加、PSD-95表达减弱,这一结果揭示了长期滥用氯胺酮所致神经毒性作用的可能机制。 展开更多
关键词 氯胺酮 半胱氨酸蛋白酶3 突触后密度蛋白95 海马
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