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肺动脉高压模型大鼠肺动脉平滑肌RyR结合特性及基因C-末端序列的研究 被引量：4
1
作者 承伟 叶兆伟 +3 位作者 王佩琪 赵文明 张壮 李智 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期1306-1310,共5页
目的分析肺动脉高压时肺动脉平滑肌Ryanodine受体(ryanodine receptor,RyR)的结合功能改变及基因序列的变化。方法梯度离心法提取肺动脉平滑肌肌浆网膜蛋白组分,放射配基结合方法测定平衡解离常数(Kd)、最大结合容量(Bmax)的变化;体外... 目的分析肺动脉高压时肺动脉平滑肌Ryanodine受体(ryanodine receptor,RyR)的结合功能改变及基因序列的变化。方法梯度离心法提取肺动脉平滑肌肌浆网膜蛋白组分,放射配基结合方法测定平衡解离常数(Kd)、最大结合容量(Bmax)的变化;体外提取肺动脉平滑肌细胞总RNA,反转录合成RyR2cDNA,以cDNA为模板使用特异性引物对目的片段进行PCR扩增,切胶回收后Sanger双脱氧末端终止法测定序列。结果野百合碱(monocrotaline,MCT)所致肺动脉高压组RyR最大结合容量(Bmax)为(197±21.4)nmol.g-1protein,较对照组(168±13.7)nmol·g-1protein明显增加(P<0.01);平衡解离常数(Kd)为(0.276±0.026)nmol·L-1与对照组(0.282±0.031)nmol·L-1相比差异无显著性(P>0.05);野百合组RyR2C-末端基因序列与对照组无差异。结论MCT所致肺动脉高压大鼠RyR最大结合容量(Bmax)增加,提示受体的数量发生了上调;Kd无明显变化,说明与受体的亲和力无改变。MCT所致肺动脉高压大鼠2型RyR(RyR2)C-末端基因序列无变化。 展开更多
关键词 肺动脉高压 RYANODINE受体 肌浆网 放射配基 平衡解离常数 最大结合容量 基因序列
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藻酸双酯钠对2型糖尿病心血管并发症防治作用的研究 被引量：3
2
作者 于丽凤 赵金生 +3 位作者 于龙 赵美眯 齐贺 李智 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期630-635,共6页
目的观察藻酸双酯钠(PSS)对2型糖尿病并发的心血管疾病危险因素的影响,并探讨其可能机制。方法高糖高脂饮食加小剂量链脲佐菌素(STZ 20mg·kg-1)制作2型糖尿病Wister大鼠模型,并将其随机平均分为5组:正常对照(NC)组、模型(Mod)组、... 目的观察藻酸双酯钠(PSS)对2型糖尿病并发的心血管疾病危险因素的影响,并探讨其可能机制。方法高糖高脂饮食加小剂量链脲佐菌素(STZ 20mg·kg-1)制作2型糖尿病Wister大鼠模型,并将其随机平均分为5组:正常对照(NC)组、模型(Mod)组、藻酸双酯钠(PSS)组、二甲双胍(Met)组、洛伐他汀(Lov)组,并给予相应的药物治疗8wk。实验过程中观察血糖、血脂的变化;发色底物法检测血清中组织纤溶酶原激活物(t-PA)、组织纤溶酶原激活抑制物(PAI-1)的活性;22wk后处死大鼠,取其主动脉,透射电镜观察主动脉的超微结构;免疫组织化学及Western blot方法检测动脉内核转录因子(NF-κB)及细胞间粘附分子(ICAM-1)的表达水平。结果PSS组的空腹血糖(FBG)、血脂(TG、TC、LDL)水平及PAI-1的活性均明显低于模型组(P<0.05),而t-PA的活性则明显高于模型组(P<0.05);同时PSS组NF-κB和ICAM-1的表达比模型组明显减少(P<0.05);PSS组主动脉损伤明显轻于模型组。结论藻酸双酯钠能抑制2型糖尿病大鼠并发的心血管疾病的发生、发展,其机制可能与其降低血糖、血脂水平,改善t-PA和PAI-1的活性,抑制核因子NF-κB的活化及细胞间粘附分子ICAM-1的表达有关。 展开更多
关键词 藻酸双酯钠 2型糖尿病心血管并发症 核转录因子 细胞间粘附分子 组织纤溶酶原激活物
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M_2-G_(i1α)融合蛋白在Sf9细胞中的表达及M_2AChR特异性药物的鉴别
3
作者 张雪薇 郭政东 +2 位作者 白立川 姜爱民 孙科 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期428-431,共4页
目的通过杆状病毒-Sf9细胞系统表达M2-Gi1α融合蛋白,并利用M2-Gi1α融合蛋白为工具筛选毒蕈碱性乙酰胆碱受体亚型2(M2AChR)特异性配体,探讨M2-Gi1α融合蛋白中两组分相互作用的机制。方法通过两步PCR反应建立M2AChR与Gi1α融合cDNAs,并... 目的通过杆状病毒-Sf9细胞系统表达M2-Gi1α融合蛋白,并利用M2-Gi1α融合蛋白为工具筛选毒蕈碱性乙酰胆碱受体亚型2(M2AChR)特异性配体,探讨M2-Gi1α融合蛋白中两组分相互作用的机制。方法通过两步PCR反应建立M2AChR与Gi1α融合cDNAs,并在Sf9昆虫细胞中表达M2-Gi1α融合蛋白。通过[3H]羟苯二乙酸奎宁酯([3H]QNB)配体饱和结合实验及[35S]GTPγS竞争性替代结合实验,检测M2-Gi1α融合蛋白表达水平,并筛选M2AChR的特异性配体。结果 M2-Gi1α融合蛋白的表达水平为(8.44±0.39)nmol·g-1膜蛋白。不同配体使M2-Gi1α融合蛋白中Gi1α与GDP的亲和力发生变化,乙酰胆碱、氧化震颤素、槟榔碱、阿托品、fangchinoline、levitimide的IC50值分别为:21.35,23.86,11.91,0.13,1.05,1.75μmol·L-1,无配体存在时为2.50μmol·L-1。结论杆状病毒-Sf9细胞表达系统表达的M2-Gi1α融合蛋白具备M受体与配体结合的特性和组分间的耦联功能,通过检测GDP亲和力的大小有利于筛选和鉴别M2受体亚型特异性药物。 展开更多
关键词 融合蛋白 毒蕈碱型乙酰胆碱受体 G蛋白耦联受体 兴奋剂 拮抗剂
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哮喘豚鼠气道平滑肌细胞内钙释放通道的变化 被引量：11
4
作者 封瑞 李智 +1 位作者 滕赞 曹禹 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期47-51,共5页
目的检测哮喘豚鼠气道平滑肌细胞(ASMCs)内钙释放通道功能的改变,探讨与支气管哮喘的关系,同时,寻找传代培养ASMCs的方法。方法以Flou-3/AM为细胞内钙离子示踪剂,观察ASMCs在工具药作用下细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)的改变。结果①在ASMC... 目的检测哮喘豚鼠气道平滑肌细胞(ASMCs)内钙释放通道功能的改变,探讨与支气管哮喘的关系,同时,寻找传代培养ASMCs的方法。方法以Flou-3/AM为细胞内钙离子示踪剂,观察ASMCs在工具药作用下细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)的改变。结果①在ASMCs外无钙情况下,不同浓度ryanodine(5×10-5,10-4,2×10-4mol·L-1)作用于原代培养正常与哮喘ASMCs,[Ca2+]i迅速升高,哮喘组明显高于正常组(P<0·01)。10-4mol·L-1的组织胺(hista-mine)作用于原代培养的正常组与哮喘组ASMCs,[Ca2+]i升高无差异(P>0·05)。②传代培养哮喘ASMCs在10-4、2×10-4mol·L-1ryanodine作用下,[Ca2+]i迅速升高,与原代细胞比较无差异(P>0·05)。在浓度为5×10-5mol·L-1时,原代明显高于传代(P<0.01)。哮喘组传代ASMCs对10-4mol·L-1的histamine反应不明显。结论哮喘豚鼠ASMCs内钙释放通道(RyRs)功能升高,特定条件下,哮喘传代细胞仍然保持原代细胞内钙释放通道的特性。 展开更多
关键词 哮喘 气道平滑肌细胞(ASMCs) 钙离子
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野百合碱对培养的肺动脉内皮细胞NO含量、eNOS蛋白表达及肺动脉平滑肌细胞收缩性的影响 被引量：4
5
作者 承伟 马洪林 +2 位作者 王佩琦 赵文明 李智 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期1171-1174,共4页
目的研究野百合碱(monocrotaline pyrrole,MCTP)对培养的牛肺动脉内皮细胞(calf pulmonary artery endothelial cells,CPAEs)一氧化氮(NO)含量、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)蛋白表达及肺动脉平滑肌细胞收缩的影响。方法采用荧光共聚焦激... 目的研究野百合碱(monocrotaline pyrrole,MCTP)对培养的牛肺动脉内皮细胞(calf pulmonary artery endothelial cells,CPAEs)一氧化氮(NO)含量、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)蛋白表达及肺动脉平滑肌细胞收缩的影响。方法采用荧光共聚焦激光显微镜检测培养的牛肺动脉内皮细胞的NO含量;Western blot检测eNOS蛋白表达;胶原凝胶实验分析肺动脉平滑肌细胞收缩性。结果经野百合碱处理的牛肺动脉内皮细胞NO含量和eNOS蛋白表达较对照组明显减少、肺动脉平滑肌细胞收缩性增强。结论MCTP可抑制eNOS蛋白表达,肺动脉内皮细胞NO产生受到抑制,使肺动脉平滑肌细胞收缩性增强,这些改变与肺动脉高压的形成可能存在一定关系。 展开更多
关键词 野百合碱 内皮细胞 平滑肌细胞 一氧化氮 表达
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兰尼碱受体mRNA在哮喘豚鼠气道平滑肌细胞中表达的改变 被引量：3
6
作者 封瑞 滕赞 +2 位作者 赵美眯 郝丽英 李智 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期137-139,共3页
目的明确兰尼碱受体(RyR)与哮喘发病的关系,为哮喘的防治提供一条新的途径。方法以酶消化法分离培养正常与哮喘豚鼠气道平滑肌细胞(ASMCs),应用RT-PCR方法测定每组细胞RyR各亚型RyR1,RyR2和RyR3的mRNA表达。结果正常与哮喘豚鼠ASMCs中,R... 目的明确兰尼碱受体(RyR)与哮喘发病的关系,为哮喘的防治提供一条新的途径。方法以酶消化法分离培养正常与哮喘豚鼠气道平滑肌细胞(ASMCs),应用RT-PCR方法测定每组细胞RyR各亚型RyR1,RyR2和RyR3的mRNA表达。结果正常与哮喘豚鼠ASMCs中,RyR1和RyR2的mRNA均见表达,未见RyR3mRNA的表达,并以表达RyR2mRNA为主。哮喘时,RyR1和RyR2的mRNA相对吸光度值分别为0.43±0.05和1.5±0.6,明显高于正常组RyR1mRNA的吸光度值0.34±0.03(n=6,P<0.01)。结论RyR1mRNA表达上调可能与哮喘发病相关。 展开更多
关键词 哮喘 受体 兰尼碱 肌 平滑 气道
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肺动脉高压大鼠肺动脉平滑肌上calponin和TGFβ1的变化 被引量：8
7
作者 曹禹 李智 封瑞 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期277-278,共2页
关键词 调宁蛋白 转化生长因子Β1 肺动脉高压
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滨蒿内酯对哮喘豚鼠脾淋巴细胞转化和IL-2生成的影响 被引量：4
8
作者 迟天燕 李智 范颖 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期130-131,共2页
目的:研究哮喘豚鼠脾淋巴细胞转化和白细胞介素2(IL-2)含量的变化及滨蒿内酯(Sco)对其的影响。方法:建立卵蛋白致敏的哮喘豚鼠模型。MTT比色分析法测定光密度值,比较不同浓度Sco对淋巴细胞增殖、植物血凝素(PHA)诱导的T淋巴细胞转化以... 目的:研究哮喘豚鼠脾淋巴细胞转化和白细胞介素2(IL-2)含量的变化及滨蒿内酯(Sco)对其的影响。方法:建立卵蛋白致敏的哮喘豚鼠模型。MTT比色分析法测定光密度值,比较不同浓度Sco对淋巴细胞增殖、植物血凝素(PHA)诱导的T淋巴细胞转化以及脾细胞分泌IL-2活性的影响。结果:Sco剂量依赖地对哮喘豚鼠淋巴细胞增殖有抑制作用;Sco能够抑制PHA诱导的哮喘豚鼠T淋巴细胞转化;哮喘豚鼠IL-2生成水平高于正常对照组,Sco也可抑制哮喘豚鼠IL-2的活性。结论:Sco在体外抑制哮喘豚鼠脾淋巴细胞转化和脾淋巴细胞产生IL-2的水平,可能是其治疗哮喘的免疫学机制之一。 展开更多
关键词 滨蒿内酯 哮喘 淋巴细胞转化 白细胞介素2
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肺动脉高压模型大鼠肺动脉平滑肌细胞内钙的改变 被引量：4
9
作者 承伟 李智 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期593-596,共4页
目的分析肺动脉高压时肺动脉平滑肌细胞Ryanod-ine受体[Ca2+]i释放功能的改变。方法腹腔注射野百合碱建立大鼠肺动脉高压模型,原代培养肺动脉平滑肌细胞,Fura-2/AM负载培养细胞,荧光测钙技术测量Ryanodine受体激动剂对[Ca2+]i变化的影... 目的分析肺动脉高压时肺动脉平滑肌细胞Ryanod-ine受体[Ca2+]i释放功能的改变。方法腹腔注射野百合碱建立大鼠肺动脉高压模型,原代培养肺动脉平滑肌细胞,Fura-2/AM负载培养细胞,荧光测钙技术测量Ryanodine受体激动剂对[Ca2+]i变化的影响。结果10nmol.L-1Ry-anodine使对照组[Ca2+]i平均增加(93.31±12.41)nmol.L-1,使PAH组[Ca2+]i平均增加(141.71±13.59)nmol.L-1。两组样本[Ca2+]i增加的数值差异有显著性(P<0.01);10mmol.L-1Caffine使对照组[Ca2+]i平均增加(149.02±13.02)nmol.L-1,使PAH大鼠PASMC的[Ca2+]i平均增加(191.2±21.26)nmol.L-1,两组样本[Ca2+]i数值的变化差异有显著性(P<0.01)。结论肺动脉高压大鼠原代培养的肺动脉平滑肌细胞对Ryanodine受体激动剂的敏感性增强,提示肺动脉高压时Ryanodine受体释放[Ca2+]i的功能发生了异常改变。 展开更多
关键词 肺动脉高压 RYANODINE受体 肺动脉平滑肌细胞 细胞内钙 激动剂 荧光测钙技术
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钌红、丁卡因对肺动脉高压模型大鼠肺动脉平滑肌细胞[Ca^(2＋)]i释放功能的影响 被引量：1
10
作者 承伟 李智 《中国循环杂志》 CSCD 北大核心 2012年第2期149-152,共4页
目的:分析肺动脉高压时肺动脉平滑肌细胞雷诺定(Ryanodine)受体[Ca2+]i释放功能的改变及钌红(Rutheniumred)、丁卡因对肺动脉高压模型大鼠肺动脉平滑肌细胞[Ca2+]i释放功能的影响。方法:清洁级Wister大白鼠25只,腹腔注射野百合碱,建立... 目的:分析肺动脉高压时肺动脉平滑肌细胞雷诺定(Ryanodine)受体[Ca2+]i释放功能的改变及钌红(Rutheniumred)、丁卡因对肺动脉高压模型大鼠肺动脉平滑肌细胞[Ca2+]i释放功能的影响。方法:清洁级Wister大白鼠25只,腹腔注射野百合碱,建立大鼠肺动脉高压模型,死亡2只,最终23只;原代培养肺动脉平滑肌细胞;Fura-2/AM(钙离子荧光指示剂)负载培养细胞;荧光测钙技术比较雷诺定诱导的野百合碱组(n=15)及对照组(n=8)[Ca2+]i数值,观测钌红、丁卡因对雷诺定受体激动剂雷诺定诱导的[Ca2+]i变化的影响。结果:10 nmol/L雷诺定使对照组[Ca2+]i平均增加(93.31±12.41)nmol/L,使野百合碱组[Ca2+]i平均增加(141.71±13.59)nmol/L;两组样本[Ca2+]i增加的数值比较差异有统计学意义(P<0.01)。钌红浓度为0.5～10μmol/L、丁卡因浓度为2～40μmol/L时,可使雷诺定受体激动剂雷诺定诱导的[Ca2+]i值最大下降(115.32±7.47)nmol/L和(107.97±7.11)nmol/L。结论:肺动脉高压大鼠肺动脉平滑肌细胞对雷诺定受体激动剂雷诺定的敏感性增强;钌红、丁卡因对雷诺定诱导的肺动脉高压大鼠肺动脉平滑肌细胞[Ca2+]i上升有明显的抑制作用。 展开更多
关键词 肺动脉高压 雷诺定受体 细胞内钙
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