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PAK4基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定
1
作者
代炜
张红艳
+2 位作者
李彦姝
李妍
孙长伏
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第1期11-14,F0002,共5页
目的:构建PAK4基因RNAi慢病毒载体,并对其在涎腺腺样囊性癌细胞株SACC-83细胞中干扰效率进行鉴定。方法:针对PAK4基因RNAi有效靶序列,合成Oligo DNA,退火形成双链DNA,与经AgeⅠ和EcoRⅠ酶切后的pGCsil-GFP载体连接产生shPAK4i-LV慢病毒...
目的:构建PAK4基因RNAi慢病毒载体,并对其在涎腺腺样囊性癌细胞株SACC-83细胞中干扰效率进行鉴定。方法:针对PAK4基因RNAi有效靶序列,合成Oligo DNA,退火形成双链DNA,与经AgeⅠ和EcoRⅠ酶切后的pGCsil-GFP载体连接产生shPAK4i-LV慢病毒载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定。用shPAK4i-LV载体、pHelper1.0载体和pHelper 2.0质粒共转染包装细胞293T细胞,包装产生慢病毒,以293T细胞绿色荧光蛋白(GFP)的表达水平测定病毒滴度。结果:PCR扩增出插入片段,测序证实成功构建了PAK4-shRNA慢病毒载体shPAK4i-LV。包装并浓缩慢病毒,滴度为2E+9TU.mL-1。将病毒感染SACC-83细胞,real-time PCR检测PAK4的mRNA表达下调70%以上。结论:成功构建了shPAK4i-LV病毒载体并建立了SACC-83-shPAK4i细胞模型,为PAK4在肿瘤信号转导通路中的研究提供工作基础。
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关键词
RNA干扰
PAK4基因
质粒构建
慢病毒
癌
腺样囊性
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职称材料
题名
PAK4基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定
1
作者
代炜
张红艳
李彦姝
李妍
孙长伏
机构
中国医科大学
口腔医学院口腔颌面外科口腔颌面-头颈肿瘤外科
中国医科大学细胞生物学教研室细胞生物学卫生部重点实验室
出处
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第1期11-14,F0002,共5页
基金
国家自然科学基金资助课题(30871390
30672331
30800415)
文摘
目的:构建PAK4基因RNAi慢病毒载体,并对其在涎腺腺样囊性癌细胞株SACC-83细胞中干扰效率进行鉴定。方法:针对PAK4基因RNAi有效靶序列,合成Oligo DNA,退火形成双链DNA,与经AgeⅠ和EcoRⅠ酶切后的pGCsil-GFP载体连接产生shPAK4i-LV慢病毒载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定。用shPAK4i-LV载体、pHelper1.0载体和pHelper 2.0质粒共转染包装细胞293T细胞,包装产生慢病毒,以293T细胞绿色荧光蛋白(GFP)的表达水平测定病毒滴度。结果:PCR扩增出插入片段,测序证实成功构建了PAK4-shRNA慢病毒载体shPAK4i-LV。包装并浓缩慢病毒,滴度为2E+9TU.mL-1。将病毒感染SACC-83细胞,real-time PCR检测PAK4的mRNA表达下调70%以上。结论:成功构建了shPAK4i-LV病毒载体并建立了SACC-83-shPAK4i细胞模型,为PAK4在肿瘤信号转导通路中的研究提供工作基础。
关键词
RNA干扰
PAK4基因
质粒构建
慢病毒
癌
腺样囊性
Keywords
RNA interference
PAK4 gene
plasmid construction
lentivirus
carcinoma
adenoid cystic
分类号
R739.87 [医药卫生—肿瘤]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
PAK4基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定
代炜
张红艳
李彦姝
李妍
孙长伏
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2012
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