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小鼠Na^+-K^+-2Cl^-共转运蛋白基因启动子克隆及20-HETE对其转录活性的影响
1
作者
武晶晶
孔令慧
贾茹
《中国医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第1期29-33,共5页
目的克隆小鼠Na^+-K^+-2Cl^-共转运蛋白(Nkcc2)基因启动子序列,初步探讨20-HETE对该基因转录活性的调控作用。方法应用生物信息学软件ALiBaba2.1和TRANSFAC TESS分析小鼠Nkcc2基因启动子序列;以小鼠基因组DNA为模板,利用PCR方法扩增得...
目的克隆小鼠Na^+-K^+-2Cl^-共转运蛋白(Nkcc2)基因启动子序列,初步探讨20-HETE对该基因转录活性的调控作用。方法应用生物信息学软件ALiBaba2.1和TRANSFAC TESS分析小鼠Nkcc2基因启动子序列;以小鼠基因组DNA为模板,利用PCR方法扩增得到小鼠Nkcc2基因启动子区片段(-1 462 bp~+40 bp),并克隆入pGL3-Basic载体,构建萤光素酶报告基因载体;脂质体法将重组报告基因载体转染到HEK293T细胞24 h后,再以20-HETE处理转染细胞2 h,利用双萤光素酶报告基因检测系统分析萤光素酶活性。结果成功构建小鼠Nkcc2基因启动子萤光素酶报告基因载体;20-HETE可以显著下调小鼠Nkcc2基因启动子萤光素酶报告基因载体的转录活性。结论 20-HETE通过转录调控机制下调小鼠Nkcc2基因的表达。
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关键词
Na^+-K^+-2Cl^-共转运蛋白
启动子
20-HETE
基因克隆
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题名
小鼠Na^+-K^+-2Cl^-共转运蛋白基因启动子克隆及20-HETE对其转录活性的影响
1
作者
武晶晶
孔令慧
贾茹
机构
中国医科大学
生命科学
学院
医学遗传学教研室
中国医科大学生命科学学院生物科学系
出处
《中国医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第1期29-33,共5页
基金
国家自然科学基金青年科学基金(81400709)
文摘
目的克隆小鼠Na^+-K^+-2Cl^-共转运蛋白(Nkcc2)基因启动子序列,初步探讨20-HETE对该基因转录活性的调控作用。方法应用生物信息学软件ALiBaba2.1和TRANSFAC TESS分析小鼠Nkcc2基因启动子序列;以小鼠基因组DNA为模板,利用PCR方法扩增得到小鼠Nkcc2基因启动子区片段(-1 462 bp~+40 bp),并克隆入pGL3-Basic载体,构建萤光素酶报告基因载体;脂质体法将重组报告基因载体转染到HEK293T细胞24 h后,再以20-HETE处理转染细胞2 h,利用双萤光素酶报告基因检测系统分析萤光素酶活性。结果成功构建小鼠Nkcc2基因启动子萤光素酶报告基因载体;20-HETE可以显著下调小鼠Nkcc2基因启动子萤光素酶报告基因载体的转录活性。结论 20-HETE通过转录调控机制下调小鼠Nkcc2基因的表达。
关键词
Na^+-K^+-2Cl^-共转运蛋白
启动子
20-HETE
基因克隆
Keywords
Na^+-K^+-2Cl^- cotransporter
promoter
20-HETE
gene clone
分类号
R394 [医药卫生—医学遗传学]
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作者
出处
发文年
被引量
操作
1
小鼠Na^+-K^+-2Cl^-共转运蛋白基因启动子克隆及20-HETE对其转录活性的影响
武晶晶
孔令慧
贾茹
《中国医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019
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