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异硫氰酸苯酯柱前衍生化反相高效液相色谱法同时测定18种氨基酸 被引量:103
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作者 杨菁 孙黎光 +1 位作者 白秀珍 周海涛 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期369-371,共3页
建立了一种利用反相高效液相色谱同时测定 18种氨基酸的方法。以正亮氨酸为内标物 ,异硫氰酸苯酯为柱前衍生剂 ,用C18色谱柱在柱温 38℃下采用二元梯度洗脱 ,于 2 5 4nm波长处检测。氨基酸质量浓度在 3 5mg/L~ 5 5 6mg/L时 ,其峰面积... 建立了一种利用反相高效液相色谱同时测定 18种氨基酸的方法。以正亮氨酸为内标物 ,异硫氰酸苯酯为柱前衍生剂 ,用C18色谱柱在柱温 38℃下采用二元梯度洗脱 ,于 2 5 4nm波长处检测。氨基酸质量浓度在 3 5mg/L~ 5 5 6mg/L时 ,其峰面积与内标物峰面积的比值和氨基酸的质量浓度的线性相关系数 ,除胱氨酸 (0 96 2 )外均大于 0 99;18种氨基酸的加标回收率在 96 0 %~ 10 2 .4 %。信噪比为 2时 ,亮氨酸最低检测限为 0 5mg/L。应用该方法对小牛血去蛋白注射液中的游离氨基酸含量进行了测定 。 展开更多
关键词 同时测定 高效液相色谱法 柱前衍生化 异硫氰酸苯酯 正亮氨酸 氨基酸 分析
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胃癌腹腔冲洗液多巴脱羧酶mRNA的检测 被引量:4
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作者 赵丹懿 徐惠绵 +1 位作者 关一夫 安丽文 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期85-87,91,共4页
目的:通过检测胃癌腹腔冲洗液中DDC mRNA的表达,探讨多巴胶羟酶(DDC)与胃癌腹膜转移的关系,并为胃癌腹膜转移预测和亚临床转移的筛检提供新的方法。方法:用RNA提取和RT-PCR方法检测92例胃癌腹腔冲洗液中DDC mRNA的表达,同时做腹腔冲洗... 目的:通过检测胃癌腹腔冲洗液中DDC mRNA的表达,探讨多巴胶羟酶(DDC)与胃癌腹膜转移的关系,并为胃癌腹膜转移预测和亚临床转移的筛检提供新的方法。方法:用RNA提取和RT-PCR方法检测92例胃癌腹腔冲洗液中DDC mRNA的表达,同时做腹腔冲洗细胞学(PLC)检查;10例良性疾病的腹腔冲洗液作为阴性对照。结果:92例胃癌腹腔冲洗液中有57例检测到DDC mRNA的表达(62.0%),其表达阳性率与胃癌腹膜转移的PS因素密切相关(P<0.05);且胃癌腹腔冲洗液中DDC mRNA的表达水平还与胃癌浸润深度、浆膜类型、PLC检查结果以及是否存在肉眼腹膜转移有关,浸润深度深、浆膜受侵程度重、PLC检查结果阳性及存在肉眼腹膜转移病灶者的DDC mRNA表达相对值明显升高(P<0.05);而10例良性疾病腹腔冲洗液均未检测到DDC mRNA的表达。结论:胃癌腹腔液中DDC mRNA的表达与胃癌腹膜转移密切相关,通过RT-PCR来检测DDC mRNA适用于胃癌腹膜转移的预测和亚临床转移的筛检。 展开更多
关键词 胃癌 多巴脱羧酶 腹膜转移
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Genistein对涎腺腺样囊性癌细胞生长及Survivin表达的影响 被引量:2
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作者 马杰 宗志红 +1 位作者 王兆元 钟鸣 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期97-99,共3页
目的研究酪氨酸蛋白激酶抑制剂Genistein对人涎腺腺样囊性癌细胞株SACC-83细胞增殖及Survivin表达的影响。方法以不同浓度Genistein作用于SACC-83细胞不同时间后,用MTT法分析细胞的生长增殖,用流式细胞术检测细胞凋亡,用Western印迹分... 目的研究酪氨酸蛋白激酶抑制剂Genistein对人涎腺腺样囊性癌细胞株SACC-83细胞增殖及Survivin表达的影响。方法以不同浓度Genistein作用于SACC-83细胞不同时间后,用MTT法分析细胞的生长增殖,用流式细胞术检测细胞凋亡,用Western印迹分析及电泳凝胶成像分析软件定量检测Survivin的表达。结果Genistein对SACC-83细胞有一定的抗增殖作用,且当其作用到一定时间达到一定的浓度后,该作用与浓度及时间呈依赖关系;SACC-83细胞经220μmol/L Genistein作用3 d其生长明显受到抑制,并显著诱导细胞凋亡(P<0.01),同时伴有抗凋亡蛋白Survivin的表达下调。结论Genistein能明显抑制人涎腺腺样囊性癌细胞株SACC-83细胞生长并诱导凋亡;Survivin的表达减少可能是Genistein诱导凋亡的机制之一。 展开更多
关键词 GENISTEIN 涎腺腺样囊性癌 SURVIVIN 细胞凋亡
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诱发大鼠肝癌早期病变中蛋白激酶和磷脂的变化 被引量:1
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作者 刘毅 于秉治 +1 位作者 林峰 陈惠黎 《生物化学杂志》 CSCD 1991年第1期125-128,共4页
近年来发现蛋白激酶不但参与细胞的代谢调节,还与细胞的增殖和分化密切相关。除酪氨酸蛋白激酶是某些癌基因的表达产物外,钙-磷脂依赖性蛋白激酶(又称蛋白激酶C,PK-C)是促癌剂TPA(12-O-tetradecanoyl-phorbol-13-aeetatc)的受体。作者... 近年来发现蛋白激酶不但参与细胞的代谢调节,还与细胞的增殖和分化密切相关。除酪氨酸蛋白激酶是某些癌基因的表达产物外,钙-磷脂依赖性蛋白激酶(又称蛋白激酶C,PK-C)是促癌剂TPA(12-O-tetradecanoyl-phorbol-13-aeetatc)的受体。作者在前文中曾报导:分化诱导剂视黄酸可使人肝癌细胞株SMMC-7721中蛋白激酶C的活力明显降低;而蛋白激酶A(cAMP依赖性蛋白激酶,PKA)则明显增加。本文研究化学诱发大鼠肝癌早期病变中这两种蛋白激酶的变化,观察有无和视黄酸处理时相反的改变。 展开更多
关键词 肝癌 蛋白激酶 磷脂
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肺癌患者胸腔积液中CK19 mRNA的转录表达及临床意义
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作者 张珊珊 吴广平 +3 位作者 赵雨杰 王绍成 宗志宏 王恩华 《中国肺癌杂志》 CAS 2007年第3期212-215,共4页
背景与目的常规细胞学诊断肺癌患者胸腔积液中的癌细胞具有重要的应用价值,然而对胸膜微转移的诊断是有限的。本研究拟探讨CK19mRNA在肺癌患者胸腔积液中表达的临床意义。方法应用RT-PCR方法,分别检测86例肺癌患者和40例良性疾病患者胸... 背景与目的常规细胞学诊断肺癌患者胸腔积液中的癌细胞具有重要的应用价值,然而对胸膜微转移的诊断是有限的。本研究拟探讨CK19mRNA在肺癌患者胸腔积液中表达的临床意义。方法应用RT-PCR方法,分别检测86例肺癌患者和40例良性疾病患者胸腔积液中CK19mRNA的表达,并与常规细胞学诊断进行对比。结果肺癌组胸腔积液中CK19mRNA阳性表达率为93.0%(80/86),肺良性疾病组胸腔积液中CK19mRNA阳性表达率为20.0%(8/40),两组间CK19mRNA阳性表达率有显著性差异(χ2=65.69,P<0.01)。肺癌组胸腔积液中CK19mRNA阳性表达率与病理类型无关(P>0.05)。检测肺癌患者胸腔积液中的CK19mRNA,明显优于常规细胞学诊断的敏感性和准确性(P<0.01)。结论CK19mRNA可作为检测肺癌患者胸膜微转移的分子标志物,是诊断肺癌患者胸腔积液中脱落癌细胞及其临床分期的重要参考指标。 展开更多
关键词 肺肿瘤 胸腔积液 逆转录聚合酶链反应 细胞角蛋白
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抗Ⅳ型胶原抗体与金雀异黄素耦联方法的建立及测定 被引量:1
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作者 刘芳 孔珺 +1 位作者 张劲松 贾秀坤 《眼科研究》 CSCD 北大核心 2005年第5期453-455,共3页
目的初步探讨金雀异黄素(genistein)与抗Ⅳ型胶原抗体耦联的方法。方法采用活性酯法将抗Ⅳ型胶原抗体与金雀异黄素进行耦联;采用凝胶层析对耦联物提纯;紫外吸收光谱法和Bradford蛋白检测法检测耦联物中的金雀异黄素与抗Ⅳ型胶原抗体的... 目的初步探讨金雀异黄素(genistein)与抗Ⅳ型胶原抗体耦联的方法。方法采用活性酯法将抗Ⅳ型胶原抗体与金雀异黄素进行耦联;采用凝胶层析对耦联物提纯;紫外吸收光谱法和Bradford蛋白检测法检测耦联物中的金雀异黄素与抗Ⅳ型胶原抗体的克分子比;免疫组织化学法检测耦联物与人晶状体囊膜结合的特异性。结果抗Ⅳ型胶原抗体与金雀异黄素成功耦联,耦联产物中抗Ⅳ型胶原抗体与金雀异黄素克分子比为1∶439,耦联物与晶状体囊膜可特异结合。结论采用活性酯法可成功地将抗Ⅳ型胶原抗体与金雀异黄素耦联,耦联物的免疫活性良好。 展开更多
关键词 抗Ⅳ型胶原抗体 金雀异黄素 免疫耦联物 晶状体
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小肠平滑肌胰岛素受体的特征及其蛋白激酶活性
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作者 武海枫 王殿鸿 +1 位作者 郑博 刘励 《生物化学杂志》 CSCD 1990年第5期408-412,共5页
本实验对狗小肠平滑肌中胰岛素受体的结构和特征进行了分析研究。通过麦胚凝集素琼脂糖和两次Sepharose-CL-6B凝胶层析从平滑肌中纯化胰岛素受体,达到电泳纯。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳证明胰岛素受体是由两个亚基组成的,分子量分别为135k... 本实验对狗小肠平滑肌中胰岛素受体的结构和特征进行了分析研究。通过麦胚凝集素琼脂糖和两次Sepharose-CL-6B凝胶层析从平滑肌中纯化胰岛素受体,达到电泳纯。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳证明胰岛素受体是由两个亚基组成的,分子量分别为135kD和90kD。磷酸化实验证明平滑肌胰岛素受体具有胰岛素依赖性蛋白激酶活性,能催化自身的β亚基磷酸化和底物的磷酸化。Scatchard分析表明胰岛素和受体的结合呈(?)协同效应,最大结合率为13μg胰岛素/mg蛋白质。 展开更多
关键词 胰岛素受体 蛋白激酶
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小鼠抗人胰岛素受体单克隆抗体的制备、纯化及鉴定
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作者 宋晓宇 刘素嫒 王殿鸿 《生物化学杂志》 CSCD 1990年第4期289-293,共5页
M11D杂交瘤细胞株是由人胎盘细胞膜纯化所得胰岛素受体免疫BALB/C小鼠后,取其脾细胞与同系小鼠骨髓瘤细胞株NS-1细胞融合所得。该杂交瘤细胞分泌的抗体经ELISA及放射免疫沉淀法证实为胰岛素受体特异的单克隆抗体。该抗体经Protein A-Sep... M11D杂交瘤细胞株是由人胎盘细胞膜纯化所得胰岛素受体免疫BALB/C小鼠后,取其脾细胞与同系小鼠骨髓瘤细胞株NS-1细胞融合所得。该杂交瘤细胞分泌的抗体经ELISA及放射免疫沉淀法证实为胰岛素受体特异的单克隆抗体。该抗体经Protein A-Sepharose亲和层析分离、纯化,SDS-聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳鉴定得分子量分别为53000及23000的两条区带,免疫双扩证明为IgGl。该抗体特异地沉淀125Ⅰ-人胎盘细胞膜胰岛素受体,沉淀经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳后放射自显影得分子量为135000的特异显影带,与胰岛素受体α亚基分子量相同,说明M11D为抗胰岛素受体α亚基的单克隆抗体。 展开更多
关键词 抗胰岛素受体 单克隆抗体 制备
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