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激肽释放酶转基因大鼠模型的建立 被引量：3
1
作者 郑志红 杨葳 +7 位作者 周生来 王维 董婉维 李兆阳 孙强 张梅英 李华 王禄增 《中国比较医学杂志》 CAS 2007年第8期463-466,共4页
目的建立KLK1转基因大鼠模型。方法腹腔注射PMSG-HCG（150-150IU/kg）超排不同周龄（4-8周）SD大鼠比较超排效果的差异，以可用于注射胚胎数作为评判标准确定最佳超排周龄。构建pBC-klk1转基因构件，经酶切、纯化后通过显微注射方法导... 目的建立KLK1转基因大鼠模型。方法腹腔注射PMSG-HCG（150-150IU/kg）超排不同周龄（4-8周）SD大鼠比较超排效果的差异，以可用于注射胚胎数作为评判标准确定最佳超排周龄。构建pBC-klk1转基因构件，经酶切、纯化后通过显微注射方法导入SD大鼠受精卵原核并移植到同期受孕的SD受体母鼠输卵管内。出生后仔鼠用PCR和Southern方法检测鼠尾DNA鉴定基因型，通过RT-PCR和免疫组化方法检测klk1基因表达。结果4-8周SD大鼠超排后分别获得受精卵14±14.8、30±15.2、13.3±13.7、13±14.7、8±5.7，5周龄大鼠超排效果最好，与其他周龄大鼠相比有显差异，P〈0.05；显微注射1538枚卵，移植685（44.53%）枚卵于31只受体输卵管中，12（12/31，38.7%）只怀孕，共产仔62只，经PCR检测获得6只阳性鼠，Southern检测3只阳性。对Southern检测阳性转基因大鼠子代进行RT-PCR检测和免疫组化分析证明klk1基因在肾脏、胰腺和乳腺内表达。结论成功建立klk1基因表达的转基因大鼠模型，该模型是高血压病研究的理想动物模型。 展开更多
关键词 大鼠 klk1 转基因 高血压
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稳定转染Dicer基因对HELF细胞功能的影响
2
作者 何琳 王禄增 郑志红 《中国比较医学杂志》 CAS 2010年第4期50-55,90,共7页
目的观察正常人胚肺成纤维细胞(HELF)在稳定转染Dicer基因后增殖能力及迁移能力的变化。方法应用脂质体介导方法转染Dicer基因表达载体于HELF细胞,G418筛选,PCR检测整合情况,RT-PCR检测表达情况,Western-blot检测蛋白表达水平,确定稳定... 目的观察正常人胚肺成纤维细胞(HELF)在稳定转染Dicer基因后增殖能力及迁移能力的变化。方法应用脂质体介导方法转染Dicer基因表达载体于HELF细胞,G418筛选,PCR检测整合情况,RT-PCR检测表达情况,Western-blot检测蛋白表达水平,确定稳定转染细胞株,MTT方法检测细胞增值能力,Transwell方法检测细胞迁移能力。结果Dicer基因稳定转染HELF细胞系建立,用RT-PCR和Western-blot方法检测到Dicer基因mRNA和蛋白表达水平都明显增强。与转染空载体的HELF细胞相比,转染Dicer基因的HELF细胞48、72、96h的MTT光吸收值明显升高(P<0.05),并且穿过人工重构基底膜的细胞数明显增多。结论Dicer基因稳定转染HELF细胞后,HELF细胞增殖能力和迁移能力都明显增强。 展开更多
关键词 DICER HELF 稳定转染
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大鼠脑挫伤后基质金属蛋白酶3的表达 被引量：6
3
作者 郭晓冲 李如波 +2 位作者 梁红霞 王福远 吴旭 《法医学杂志》 CAS CSCD 2009年第1期1-5,共5页
目的检测脑挫伤修复过程中基质金属蛋白酶3(matrixmetalloproteinase-3,MMP-3)的表达,探讨其表达规律与损伤时间的相关性。方法将大鼠分成对照组、假手术组和脑挫伤组。应用免疫组织化学技术和蛋白质印迹(Westernblot)方法检测脑挫伤后... 目的检测脑挫伤修复过程中基质金属蛋白酶3(matrixmetalloproteinase-3,MMP-3)的表达,探讨其表达规律与损伤时间的相关性。方法将大鼠分成对照组、假手术组和脑挫伤组。应用免疫组织化学技术和蛋白质印迹(Westernblot)方法检测脑挫伤后不同时间脑组织中MMP-3的表达变化。结果免疫组化结果:对照组及假手术组脑组织未见MMP-3阳性染色;伤后6h组脑组织出现MMP-3阳性染色,此后24h内染色逐渐增强,伤后5d阳性细胞数及染色强度均达高峰,随之下降,伤后14d仍有少量MMP-3表达。Westernblot结果:对照组及假手术组脑组织未见MMP-3阳性染色;挫伤后6h组出现MMP-3表达,随后表达量逐渐上升,5d达到高峰,以后逐渐下降,14d仍有表达。结论大鼠脑挫伤修复过程中MMP-3的表达呈时序性变化规律,可望用于脑挫伤时间的推断。 展开更多
关键词 法医病理学 脑损伤 基质金属蛋白酶3 免疫组织化学 印迹法 蛋白质 损伤时间推断 大鼠
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高表达β-连环蛋白促进人胚肺成纤维细胞趋化及上皮型钙黏连素的表达 被引量：4
4
作者 赵亚东 李振华 +4 位作者 张梅英 王昆 阎雪 周红梅 张中和 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期1399-1403,共5页
目的:初步探讨β-连环蛋白高表达对成纤维细胞趋化及上皮型钙黏连素表达的影响。方法:利用cDNA文库构建人截短β-连环蛋白表达质粒,重组质粒瞬时转染人胚肺成纤维细胞,检测成纤维细胞趋化性变化,观察上皮型钙黏连素表达情况。结果:成纤... 目的:初步探讨β-连环蛋白高表达对成纤维细胞趋化及上皮型钙黏连素表达的影响。方法:利用cDNA文库构建人截短β-连环蛋白表达质粒,重组质粒瞬时转染人胚肺成纤维细胞,检测成纤维细胞趋化性变化,观察上皮型钙黏连素表达情况。结果:成纤维细胞转染重组质粒后β-连环蛋白转录和翻译水平升高(25806.3±2170.1vs8216.7±833.1,P<0.05;70496.0±1960.0vs25867.3±136.5,P<0.05)。β-连环蛋白高表达促进成纤维细胞趋化(340±38vs80±14,P<0.05)。转染重组质粒后成纤维细胞表达上皮型钙黏连素减少(25806.3±2170.1vs8216.7±833.1,P<0.05;89786.3±276.7vs31876.0±1411.3,P<0.05)。成纤维细胞趋化与上皮型钙黏连素水平存在明显负相关(r=-0.988,P<0.05)。结论:β-连环蛋白高表达可促进成纤维细胞趋化,造成上皮型钙黏连素表达减少。 展开更多
关键词 肺纤维化 β-catenin 钙黏着糖蛋白类
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