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JCV病毒T抗原诱发晶状体上皮肿瘤动物模型建立 被引量:5
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作者 王建平 张梅英 +6 位作者 徐小燕 王巍 夏蒲 郑志宏 王禄增 高野康雄 郑华川 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期27-29,共3页
目的利用α-crystallin启动子构建晶状体上皮细胞中JCV T抗原表达转基因鼠,试图建立晶状体自发肿瘤动物模型。方法利用限制性内切酶BclI分离pBSK(pBluescript SK)-T抗原,BamH I同尾连接插入以pBSK为载体的α-crystallin启动子下游,通过N... 目的利用α-crystallin启动子构建晶状体上皮细胞中JCV T抗原表达转基因鼠,试图建立晶状体自发肿瘤动物模型。方法利用限制性内切酶BclI分离pBSK(pBluescript SK)-T抗原,BamH I同尾连接插入以pBSK为载体的α-crystallin启动子下游,通过NciI酶切电泳分离带有α-crystallin启动子的T抗原核酸序列后显微注射入C57BL/6J小鼠受精卵中。PCR检测转基因阳性鼠及JCV病毒T抗原拷贝数,大体和组织学观察眼球及病变组织,免疫组织化学观察T抗原、p53和β-catenin表达。结果成功构建α-crystallin JCV T抗原表达质粒,转基因阳性鼠中2号鼠(αAT-2)拷贝数最高,该鼠眼球于11个月表现出肿瘤样改变,肿瘤细胞中T抗原、p53和β-catenin呈强阳性表达。结论 JCV T抗原直接诱发晶状体上皮肿瘤动物模型建立为JCV T抗原嵌入所致上皮肿瘤提供了直接实验依据,为JCV所致上皮肿瘤发生和演进分子机理研究奠定坚实基础,同时为抗肿瘤药物筛选及基因治疗监控提供了良好的动物模型。 展开更多
关键词 JC病毒 T抗原 转基因鼠 晶状体
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突变DJ-1转基因小鼠模型的建立 被引量:3
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作者 张梅英 吴红联 +6 位作者 蔺美娜 李兆阳 周生来 于洋 王惟 吕相川 王禄增 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期820-823,共4页
目的探讨DJ-1L166P突变基因在帕金森病发生中的作用。方法构建pcDNA3.1-myc-his-DJ-1L166P真核表达载体,利用显微注射方法将DJ-1L166P基因片段(约3.9kb)导入BDF1小鼠受精卵雄原核并移植到同期受孕的ICR假孕母鼠输卵管中,对产出仔鼠的鼠... 目的探讨DJ-1L166P突变基因在帕金森病发生中的作用。方法构建pcDNA3.1-myc-his-DJ-1L166P真核表达载体,利用显微注射方法将DJ-1L166P基因片段(约3.9kb)导入BDF1小鼠受精卵雄原核并移植到同期受孕的ICR假孕母鼠输卵管中,对产出仔鼠的鼠尾组织DNA进行聚合酶链反应和Southern blot检测,对Southern blot鉴定阳性的转基因小鼠进行逆转录聚合酶链反应和Western blot检测。结果共产生20只子代小鼠,1号和7号为DJ-1L166P转基因阳性小鼠。1号转基因小鼠大脑、小脑、肝、肺、肾、睾丸有不同程度的DJ-1mRNA表达,均高于正常对照小鼠,但只有大脑中DJ-1mRNA的表达水平显著高于正常对照小鼠(P<0.05);7号转基因小鼠只有肝、肺组织中有DJ-1mRNA表达,也高于正常对照小鼠,但差异无统计学意义。只有1号小鼠大脑有His标签蛋白的表达。结论成功获得1只DJ-1L166P基因突变转基因小鼠模型,为课题的下一步实验研究打下良好的基础。 展开更多
关键词 DJ-1基因 帕金森症 转基因小鼠
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晶状体自发肿瘤转基因鼠脑横截面标本制备及鉴定 被引量:4
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作者 王建平 张梅英 +2 位作者 勾文峰 高野康雄 郑华川 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期673-675,共3页
目的确定JCV T抗原诱发晶状体肿瘤转基因鼠脑中肿瘤来源及路径。方法 18月龄转基因鼠麻醉后4%多聚甲醛灌流固定,EDTA脱钙颅骨软化后脑经横截制备石蜡标本并进行HE染色。免疫组化和免疫荧光确定脑组织T抗原表达。结果经过脱钙处理后颅骨... 目的确定JCV T抗原诱发晶状体肿瘤转基因鼠脑中肿瘤来源及路径。方法 18月龄转基因鼠麻醉后4%多聚甲醛灌流固定,EDTA脱钙颅骨软化后脑经横截制备石蜡标本并进行HE染色。免疫组化和免疫荧光确定脑组织T抗原表达。结果经过脱钙处理后颅骨组织非常软,横截后发现白色肿瘤组织蔓延至脑组织中,HE染色确定眼部和脑部白色组织均为晶状体肿瘤细胞,免疫组化和免疫荧光结果显示细胞核中存在T抗原强阳性表达。结论 JCV T抗原诱发晶状体肿瘤是经过视神经孔进入脑组织,鼠头横截面组织标本制备对研究头部肿瘤的毗邻关系和肿瘤组织在脑组织中侵袭部位极具应用价值。 展开更多
关键词 转基因鼠 晶状体自发肿瘤 头横截面 免疫组化 T抗原
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急性白血病患者P-糖蛋白的表达及功能分析 被引量:2
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作者 高峰 何娟 +4 位作者 李艳 郑志红 侯科佐 卢香兰 刘云鹏 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期462-463,468,共3页
目的:研究P-糖蛋白(P-gp)在急性白血病(AL)患者中的表达及功能。方法:用免疫组化检测CD34、P-gp的表达,用流式细胞术检测P-gp的表达、功能。结果:CD34表达与P-gp表达、功能呈正相关(P=0.001,r=0.475;P=0.003,r=0.429),P-gp表达与功能呈... 目的:研究P-糖蛋白(P-gp)在急性白血病(AL)患者中的表达及功能。方法:用免疫组化检测CD34、P-gp的表达,用流式细胞术检测P-gp的表达、功能。结果:CD34表达与P-gp表达、功能呈正相关(P=0.001,r=0.475;P=0.003,r=0.429),P-gp表达与功能呈正相关(P=0.031,r=0.341)。初治急性早幼粒细胞白血病(APL)组中无P-gp表达+、P-gp功能+,明显低于初治急性髓细胞白血病(AML)组(41.1%,35.3%,P<0.05)。初治急性淋巴细胞白血病(ALL)组中P-gp表达+28.6%,P-gp功能+28.6%,与初治AML组无差异(P>0.05)。初治AL组P-gp表达+25%,复发/难治组中P-gp表达+33.3%,两组无差异(P>0.05);P-gp功能+22.7%,低于复发/难治组P-gp功能+66.7%(P<0.05)。<50岁初治AL组P-gp表达+26.3%,与≥50岁初治AL组无差异(P>0.05);P-gp功能+15.8%,低于≥50岁初治AL组(P<0.05)。结论:P-gp功能的检测对AL的化疗更有临床指导意义。 展开更多
关键词 多药耐药 急性白血病 P-糖蛋白
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RNA干扰下调Slug表达对肺癌细胞A549的细胞周期、增殖和侵袭的影响 被引量:1
5
作者 何巍 李玉霞 +1 位作者 刘佳 李巍 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期685-689,共5页
目的:应用RNA干扰技术下调肺癌A549细胞中Slug基因的表达,探讨其对A549细胞增殖、细胞周期和细胞侵袭能力的影响。方法:构建靶向Slug基因的shRNA真核表达质粒pGPU6-GFP-Neo-Slug,与阴性对照质粒pNeg-shRNA分别用脂质体法转染A549细胞。R... 目的:应用RNA干扰技术下调肺癌A549细胞中Slug基因的表达,探讨其对A549细胞增殖、细胞周期和细胞侵袭能力的影响。方法:构建靶向Slug基因的shRNA真核表达质粒pGPU6-GFP-Neo-Slug,与阴性对照质粒pNeg-shRNA分别用脂质体法转染A549细胞。Real-time PCR和Western blotting验证转染后Slug mRNA和蛋白的表达。CCK-8法、流式细胞术和Transwell实验分别检测下调Slug表达对A549细胞增殖、细胞周期和侵袭能力的影响。结果:成功构建pGPU6-GFP-NeoSlug载体并转染A549细胞,转染率达90%。与pNeg-shRNA组和空白对照组相比,pSlug-shRNA组A549细胞中Slug mRNA[(0.23±0.01)vs(0.97±0.08)、(1.0±0.09),P<0.05]和蛋白[(0.20±0.09)vs(1.0±0.32)、(1.13±0.26),P<0.05]表达量显著降低;细胞增殖抑制率明显上升[(35.3±5.4)%vs(1.5±0.2)%、(3.3±0.7)%,均P<0.01];细胞增殖指数显著降低[(32.92±0.69)%vs(48.19±0.71)%、(42.88±0.75)%,均P<0.05],并且处于G1期细胞数明显增多[(67.08±0.92)%vs(52.81±0.78)%、(56.12±0.73)%,均P<0.05];细胞侵袭能力显著降低[穿透基底膜细胞数:(55±9)vs(169±12)、(173±15),均P<0.01]。结论:pGPU6-GFP-Neo-Slug转染肺癌A549细胞能有效下调Slug基因的表达,从而抑制A549的增殖侵袭能力、阻滞细胞周期于G1期。 展开更多
关键词 RNA干扰 SLUG基因 肺癌 A549细胞 增殖 细胞周期 侵袭
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RPS12基因表达与胃癌进展及淋巴结转移的研究
6
作者 刘言厚 孙秀菊 +5 位作者 付浩 郑志红 陈芳杰 徐惠绵 王梅先 孙开来 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期522-523,共2页
目的探讨核糖体蛋白S12(RPS12)基因表达与胃癌进展及淋巴结转移的关系。方法采用原位杂交方法检测39例进展期胃癌组织、17例正常胃黏膜中RPS12mRNA表达。结果胃癌中RPS12mRNA表达阳性表达率(87.2%)显著高于正常胃黏膜(17.6%),P<0.01... 目的探讨核糖体蛋白S12(RPS12)基因表达与胃癌进展及淋巴结转移的关系。方法采用原位杂交方法检测39例进展期胃癌组织、17例正常胃黏膜中RPS12mRNA表达。结果胃癌中RPS12mRNA表达阳性表达率(87.2%)显著高于正常胃黏膜(17.6%),P<0.01;淋巴结转移阳性的胃癌中RPS12mRNA表达阳性率(96.2%)显著高于淋巴结转移阴性者(69.2%),P<0.05。结论RPS12基因高表达与胃癌进展及淋巴结转移有关。 展开更多
关键词 核糖体蛋白S12 胃癌 原位杂交
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