检索结果-维普期刊中文期刊服务平台

GST-HDAC4融合蛋白载体的构建及其蛋白表达被引量：1: 1; 作者邵阳光刘姣李丰《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期149-151,共3页; 目的构建人HDAC4蛋白与谷胱甘肽转移酶(GST)重组的融合蛋白原核表达载体并进行表达和纯化。方法用EcoRI单酶切pcDNA3.1-HDAC4质粒,得到hHDAC4全长编码序列,并将其克隆至原核表达载体pGEX-5X-1构建成新载体GST-HDAC4,经鉴定完全正确后转... 展开更多; 关键词 GST—HDAC4 原核表达融合蛋白; 在线阅读下载PDF 职称材料

人p21活化激酶6基因截短区域的GST标签原核表达质粒的构建及其重组蛋白的表达: 2; 作者刘彤李洋 +2 位作者李丹妮耿楠希李丰《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期437-440,共4页; 目的:构建人p21活化激酶6(PAK6)的各个截短区域原核表达质粒,并诱导和鉴定其融合蛋白的表达,为探讨PAK6基因的生物学功能提供依据。方法:以真核表达质粒pcDNA3.1-GFP-PAK6为模板,PCR扩增出PAK6基因的各个截短片段。所获得的各截短片段经... 展开更多; 关键词 P21活化激酶截短区域原核表达质粒 GST融合蛋白; 在线阅读下载PDF 职称材料

hFAK基因重组质粒的构建及蛋白表达: 3; 作者李晓东郭冰玉 +1 位作者朱戈李丰《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期584-586,591,共4页; 目的构建hFAK原核、真核表达载体,证实融合蛋白在原核细胞的诱导表达以及在胃癌细胞内的表达、定位。方法提取人胃癌细胞SGC-7901的总mRNA并进行反转。以反转录的cDNA为模板PCR扩增hFAK全长编码基因,分别克隆至pCDNA3.1-Flag以及pGEX-4... 展开更多; 关键词 hFAK 蛋白质印迹融合蛋白免疫荧光胃癌; 在线阅读下载PDF 职称材料

野生型和失活型PAK1基因自我抑制域的GST标签真核表达载体的构建及表达: 4; 作者刘彤李丹妮 +1 位作者李洋李丰《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期27-30,共4页; 目的:构建不同活性的人p21活化激酶1(hPAK1)自我抑制域(AID)谷胱甘肽(GST)标签真核表达载体并鉴定其融合蛋白表达,以探讨PAK1AID的功能及肿瘤治疗的靶向意义。方法:以pcDNA3.1HisC-PAK1全长质粒为模板,利用PCR扩增野生型(WT)PAK1AID片段... 展开更多; 关键词 p21活化激酶1 自我抑制域失活型(L107F) 真核表达 GST标签; 在线阅读下载PDF 职称材料

hTFF3基因真核表达载体构建及表达鉴定: 5; 作者郑倩倩郭文东朱亚勤《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期877-880,共4页; 目的克隆人肠三叶因子基因hTFF3,构建重组真核表达载体pEGFP-C1-TFF3,并在真核细胞中表达。方法应用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从真核细胞中扩增得到人TFF3的全长序列,克隆至表达增强型绿色荧光蛋白载体中,经酶切、PCR鉴定后测... 展开更多; 关键词肠三叶因子克隆表达载体; 在线阅读下载PDF 职称材料

hβ-arrestin1重组蛋白不同亚型筛选及互作鉴定: 6; 作者刘彩红王利利 +1 位作者冯艳玲朱亚勤《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期24-27,共4页; 目的构建GST/β-arrestin1融合蛋白表达载体,筛选其不同亚型重组子,并诱导表达、纯化蛋白,初步进行蛋白亚型互作比较,为进一步功能研究提供实验基础。方法提取人源细胞的mRNA,反转录为cDNA。用PCR法扩增hβ-arrestin1全长编码基因,通过S... 展开更多; 关键词 hβ—arrestin1 克隆重组亚型表达蛋白互作; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名GST-HDAC4融合蛋白载体的构建及其蛋白表达被引量：1: 1; 作者邵阳光刘姣李丰; 机构中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室; 出处《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期149-151,共3页; 基金国家自然科学基金资助项目(30900752 31271389); 文摘目的构建人HDAC4蛋白与谷胱甘肽转移酶(GST)重组的融合蛋白原核表达载体并进行表达和纯化。方法用EcoRI单酶切pcDNA3.1-HDAC4质粒,得到hHDAC4全长编码序列,并将其克隆至原核表达载体pGEX-5X-1构建成新载体GST-HDAC4,经鉴定完全正确后转化大肠埃希菌BL21,通过异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导表达,并纯化获得目的蛋白。Western blot检测重组质粒的表达。结果酶切鉴定和测序结果显示,GST-HDAC4融合蛋白原核表达载体构建成功。考马斯亮蓝染色和Western blot结果显示,成功获得有生物活性的GST-HDAC4融合蛋白。结论成功构建了HDAC4原核表达载体,获得有生物活性的GST-HDAC4蛋白。; 关键词 GST—HDAC4 原核表达融合蛋白; Keywords GST-HDAC4 prokaryotic expression fusion protein; 分类号 Q257 [生物学—细胞生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名人p21活化激酶6基因截短区域的GST标签原核表达质粒的构建及其重组蛋白的表达: 2; 作者刘彤李洋李丹妮耿楠希李丰; 机构中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室中国医科大学; 出处《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期437-440,共4页; 基金国家自然科学基金资助课题(31171360); 文摘目的:构建人p21活化激酶6(PAK6)的各个截短区域原核表达质粒,并诱导和鉴定其融合蛋白的表达,为探讨PAK6基因的生物学功能提供依据。方法:以真核表达质粒pcDNA3.1-GFP-PAK6为模板,PCR扩增出PAK6基因的各个截短片段。所获得的各截短片段经EcoRⅠ/XhoⅠ双酶切后克隆至GST标签的原核表达载体pGEX-5X-1中。将构建的PAK6各截短质粒转化入E.coli BL21中,采用IPTG诱导PAK6基因截短融合蛋白表达,采用Western blotting法鉴定PAK6基因截短融合蛋白的表达。结果:EcoRⅠ/XhoⅠ双酶切后得到与预期大小相符的载体片段(5 000bp)和PAK6 1-55(165bp)、PAK6 56-210(465bp)、PAK6 211-410(600bp)及PAK6 385-681(891bp)4个片段。Western blotting检测,PAK6各截短区域质粒GST-PAK6截短融合蛋白相对分子质量分别为32 000、43 000、48 000和60 000。结论:成功构建PAK6基因各个截短区域GST标签原核表达质粒并表达其重组蛋白。; 关键词 P21活化激酶截短区域原核表达质粒 GST融合蛋白; Keywords p21-activated kinase 6 truncated region prokaryotic expression plasmid GST fusion protein; 分类号 R736 [医药卫生—肿瘤]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名hFAK基因重组质粒的构建及蛋白表达: 3; 作者李晓东郭冰玉朱戈李丰; 机构中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室; 出处《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期584-586,591,共4页; 基金国家自然科学基金资助项目(31000627 30771128 90813038); 文摘目的构建hFAK原核、真核表达载体,证实融合蛋白在原核细胞的诱导表达以及在胃癌细胞内的表达、定位。方法提取人胃癌细胞SGC-7901的总mRNA并进行反转。以反转录的cDNA为模板PCR扩增hFAK全长编码基因,分别克隆至pCDNA3.1-Flag以及pGEX-4T-2表达载体中。原核重组质粒鉴定后转入BL21细胞中并经过诱导表达及纯化,真核表达质粒转入胃癌SGC-7901细胞中,分别利用Western blot和激光共焦扫描显微技术检测重组质粒的表达以及在胃癌细胞中的定位。结果 hFAK全长基因序列克隆到原核、真核表达载体中,酶切鉴定片段为3200bp。原核诱导出GST-hFAK并进行纯化;Western blot检测到真核转染的Flag-hFAK表达,条带为130kD,免疫荧光显示蛋白定位于细胞质,并在细胞膜上有定位。结论成功构建了hFAK原核、真核表达载体,并验证了其表达。; 关键词 hFAK 蛋白质印迹融合蛋白免疫荧光胃癌; Keywords hFAK Western blot fusion protein immunofluorescence gastric cancer; 分类号 Q257 [生物学—细胞生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名野生型和失活型PAK1基因自我抑制域的GST标签真核表达载体的构建及表达: 4; 作者刘彤李丹妮李洋李丰; 机构中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室中国医科大学; 出处《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期27-30,共4页; 基金国家自然科学基金资助课题(31171360,81302238) 辽宁省教育厅科学研究一般项目资助课题(L2013304); 文摘目的:构建不同活性的人p21活化激酶1(hPAK1)自我抑制域(AID)谷胱甘肽(GST)标签真核表达载体并鉴定其融合蛋白表达,以探讨PAK1AID的功能及肿瘤治疗的靶向意义。方法:以pcDNA3.1HisC-PAK1全长质粒为模板,利用PCR扩增野生型(WT)PAK1AID片段,再以此片段为模板采用大引物法扩增其突变体L107F片段,双酶切克隆至GST融合的真核表达载体pEBG。将质粒转染至工具细胞HEK293中,并经免疫印迹鉴定GST融合蛋白的表达。结果:PCR扩增出约200bp大小的野生型和失活型PAK1AID片段,双酶切得到与预期大小相符的载体与PAK1AID片段,野生型与失活型pEBG-PAK1在工具细胞HEK293中表达,蛋白的相对分子质量均为33 000。结论:成功构建野生型和失活型PAK1基因AID的GST标签真核表达载体,并表达出不同活性的GST-PAK1AID的融合蛋白。; 关键词 p21活化激酶1 自我抑制域失活型(L107F) 真核表达 GST标签; Keywords p21-activated kinase 1 autoinhibitory domain inactive type（L107F） eukaryotic expression GST-tag; 分类号 R730.23 [医药卫生—肿瘤] Q782 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名hTFF3基因真核表达载体构建及表达鉴定: 5; 作者郑倩倩郭文东朱亚勤; 机构中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室; 出处《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期877-880,共4页; 基金辽宁省自然科学基金资助项目(20092123) 辽宁省教育厅高校科研计划(2009S108); 文摘目的克隆人肠三叶因子基因hTFF3,构建重组真核表达载体pEGFP-C1-TFF3,并在真核细胞中表达。方法应用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从真核细胞中扩增得到人TFF3的全长序列,克隆至表达增强型绿色荧光蛋白载体中,经酶切、PCR鉴定后测序证实克隆成功。将重组载体转至真核细胞,荧光显微镜观察下转染效率,同时采用RT-PCR、Western blot技术检测外源基因TFF3的表达。结果成功将hTFF3基因克隆到真核表达载体中,酶切片段与预期大小一致(200 bp)。在荧光显微镜下观察转染后的细胞可见明显的绿色荧光,RT-PCR及Western blot结果表明:转染后的细胞中TFF3在转录和翻译水平的表达均有明显提高。结论成功构建了真核表达载体pEGFP-C1-TFF3,并在真核细胞中显著表达,为进一步研究TFF3因子的生物学功能奠定了基础。; 关键词肠三叶因子克隆表达载体; Keywords human Trefoil factor 3 clone expression vector; 分类号 Q291 [生物学—细胞生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名hβ-arrestin1重组蛋白不同亚型筛选及互作鉴定: 6; 作者刘彩红王利利冯艳玲朱亚勤; 机构中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室细胞病理生物学研究室; 出处《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期24-27,共4页; 基金辽宁省自然科学基金项目(20092123) 辽宁省重点实验室项目(2009S108); 文摘目的构建GST/β-arrestin1融合蛋白表达载体,筛选其不同亚型重组子,并诱导表达、纯化蛋白,初步进行蛋白亚型互作比较,为进一步功能研究提供实验基础。方法提取人源细胞的mRNA,反转录为cDNA。用PCR法扩增hβ-arrestin1全长编码基因,通过SalI和NotI酶切位点将hβ-arrestin1全长定向插入pGEX-5X-1中,构建原核表达载体pGEX-5X-1-β-arrestin1,并通过BglⅡ单酶切筛选A、B亚型,然后将重组质粒转入E.coli BL21中,异丙基硫代β-D半乳糖苷诱导表达,用谷胱甘肽-琼脂糖珠亲和纯化表达的GST/β-arrestin1A、B,SDS-PAGE鉴定,互作实验比较亚型的结合能力。结果酶切及测序结果证明,成功构建了β-arrestin1A、B原核表达载体,并通过SDS-PAGE证实:经IPTG诱导表达及亲和纯化,从转化重组质粒的BL21菌株中获得了融合蛋白GST/β-arrestin1A、B亚型,通过GST Pulldown初步比较了重组β-arrestin1A、B蛋白亚型的结合能力。结论成功构建pGEX-5X-1-β-arrestin1A、B原核表达载体并确定了融合蛋白的诱导表达及纯化方法,且互作实验显示β-arrestin1A有较强的结合能力,为进一步研究β-arrestin1的生物学功能奠定了基础。; 关键词 hβ—arrestin1 克隆重组亚型表达蛋白互作; Keywords human β-arrestin1 cloning recombinant isoforms expression interaction of protein; 分类号 Q291 [生物学—细胞生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	GST-HDAC4融合蛋白载体的构建及其蛋白表达	邵阳光刘姣李丰	《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心	2013	1	在线阅读下载PDF 职称材料
2	人p21活化激酶6基因截短区域的GST标签原核表达质粒的构建及其重组蛋白的表达	刘彤李洋李丹妮耿楠希李丰	《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心	2013	0	在线阅读下载PDF 职称材料
3	hFAK基因重组质粒的构建及蛋白表达	李晓东郭冰玉朱戈李丰	《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心	2011	0	在线阅读下载PDF 职称材料
4	野生型和失活型PAK1基因自我抑制域的GST标签真核表达载体的构建及表达	刘彤李丹妮李洋李丰	《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心	2014	0	在线阅读下载PDF 职称材料
5	hTFF3基因真核表达载体构建及表达鉴定	郑倩倩郭文东朱亚勤	《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心	2011	0	在线阅读下载PDF 职称材料
6	hβ-arrestin1重组蛋白不同亚型筛选及互作鉴定	刘彩红王利利冯艳玲朱亚勤	《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心	2012	0	在线阅读下载PDF 职称材料