目的构建牙龈卟啉单胞菌毒力岛基因PG0839突变菌株,为研究PG0839基因功能提供实验基础。方法扩增1 584 bp PG0839基因片段,对聚合酶链反应(PCR)产物和pUC19载体进行BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切,连接酶切产物得到质粒pPG0839-1。将2 101 bp er...目的构建牙龈卟啉单胞菌毒力岛基因PG0839突变菌株,为研究PG0839基因功能提供实验基础。方法扩增1 584 bp PG0839基因片段,对聚合酶链反应(PCR)产物和pUC19载体进行BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切,连接酶切产物得到质粒pPG0839-1。将2 101 bp erm基因产物插入到pPG0839-1中PG0839基因的EcoRⅤ位点,构建质粒pPG0839-2,作为电穿孔的供体质粒。电穿孔转化于受体菌牙龈卟啉单胞菌W83菌株,红霉素抗性培养基筛选阳性克隆,命名为PG0839基因突变菌株。结果运用插入失活方法构建PG0839基因突变菌株,进而通过酶切、测序、PCR和反转录PCR对PG0839基因突变菌株进行验证,证实PG0839基因突变菌株构建成功。结论本实验成功构建PG0839基因突变菌株。展开更多
文摘目的构建牙龈卟啉单胞菌毒力岛基因PG0839突变菌株,为研究PG0839基因功能提供实验基础。方法扩增1 584 bp PG0839基因片段,对聚合酶链反应(PCR)产物和pUC19载体进行BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切,连接酶切产物得到质粒pPG0839-1。将2 101 bp erm基因产物插入到pPG0839-1中PG0839基因的EcoRⅤ位点,构建质粒pPG0839-2,作为电穿孔的供体质粒。电穿孔转化于受体菌牙龈卟啉单胞菌W83菌株,红霉素抗性培养基筛选阳性克隆,命名为PG0839基因突变菌株。结果运用插入失活方法构建PG0839基因突变菌株,进而通过酶切、测序、PCR和反转录PCR对PG0839基因突变菌株进行验证,证实PG0839基因突变菌株构建成功。结论本实验成功构建PG0839基因突变菌株。
文摘目的:通过检测凋亡相关基因bcl-2和bax在成釉细胞瘤(am elob lastom a,AB)中的表达,探讨AB发生发展中细胞凋亡的作用及其与AB临床生物学行为的关系。方法:采取免疫组化法对75例AB(原发31例,复发37例,恶变组7例)进行BCL-2和BAX蛋白检测,正常口腔黏膜(norm al oralmucosa,NOM)和牙源性角化囊肿(odontogen ic keratocyst,OKC)做对照。同时采用原位杂交法检测了20例AB、12例OKC中的bcl-2和baxmRNA表达。结果:BCL-2蛋白阳性表达率在AB中为88.0%(66/75),OKC中为74.3%(26/35),NOM中为44.4%(4/9)(P<0.001),主要在AB外周层细胞和少数星网状层细胞中表达。BAX蛋白阳性率AB为74.7%(56/75),OKC为65.7%(23/35),NOM为77.8%(7/9)(P<0.001),BAX在AB的外周层和星网状层细胞都有强度相似的表达。伴随着AB的复发恶变BCL-2蛋白表达增强,而BAX蛋白表达则不同:复发组阳性率较原发组高,但恶变组低。BCL-2与BAX蛋白表达呈中度负相关(rκ=-0.331,P<0.001)。结论:AB中凋亡抑制蛋白表达多于凋亡促进蛋白表达,凋亡抑制在AB的发生、发展中起着重要作用。bcl-2和bax在不同组织及良、恶性AB中的表达方式及强度有差异。
