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舌鳞癌Tca 8113细胞过表达Twist1促进其侵袭 被引量:1
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作者 代炜 张恩礁 +1 位作者 段维轶 周青 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期1246-1249,共4页
目的:构建人Twist1真核表达载体并检测舌鳞癌Tca8113中过表达Twist1与侵袭转移的关系。方法:从Tca8113细胞中提取mRNA,反转录为cDNA,利用特异PCR引物扩增Twist1基因,将其定向克隆至pcDNA3.1-myc-hisA载体,融合蛋白表达载体命名为Myc-Twi... 目的:构建人Twist1真核表达载体并检测舌鳞癌Tca8113中过表达Twist1与侵袭转移的关系。方法:从Tca8113细胞中提取mRNA,反转录为cDNA,利用特异PCR引物扩增Twist1基因,将其定向克隆至pcDNA3.1-myc-hisA载体,融合蛋白表达载体命名为Myc-Twist1。将Myc-Twist1转染到Tca8113细胞系中,Western blot法检测蛋白表达。共聚焦激光扫描显微镜观察Twist1在Tca8113细胞中的定位。荧光素酶报告基因检测Myc-Twist1对上皮性钙粘素(E-cadherin)启动子活性调节。Transwell检测稳定表达Myc-Twist1的Tca8113细胞侵袭能力。结果:成功构建真核表达载体Myc-Twist1,Western blot法检测到Myc-Twist1融合蛋白表达。人Twist1主要定位于细胞核,少量定位于细胞质。Twsit1明显抑制E-cadherin的启动子活性,增强细胞侵袭能力。结论:Twist1能通过调控E-cadherin的表达促进Tca8113细胞的侵袭。 展开更多
关键词 TWIST1 真核表达载体 免疫荧光 侵袭转移
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