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表达OVA和GFP的MC38细胞株构建及其肿瘤免疫评价初探
1
作者
王宁
杨影
+3 位作者
田欣欣
庞丽云
张海玲
冷希岗
《生物医学工程与临床》
CAS
2019年第3期324-330,共7页
目的构建过表达肿瘤模式抗原——鸡卵白蛋白(OVA)和绿色荧光蛋白(GFP)的结肠癌细胞系OVA-GMC38及荷瘤小鼠模型,初步探索其在肿瘤免疫评价的应用。方法采用携带OVA和GFP双基因的慢病毒感染结肠癌细胞系MC38细胞,分别用荧光显微镜和流式...
目的构建过表达肿瘤模式抗原——鸡卵白蛋白(OVA)和绿色荧光蛋白(GFP)的结肠癌细胞系OVA-GMC38及荷瘤小鼠模型,初步探索其在肿瘤免疫评价的应用。方法采用携带OVA和GFP双基因的慢病毒感染结肠癌细胞系MC38细胞,分别用荧光显微镜和流式细胞仪观察MC38细胞感染后GFP表达水平,并用定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western blot方法检测OVA表达水平。将6～8周雌性C57BL/6小鼠随机分为2组(MC38组、OVAGMC38组),每组9只,分别种植MC38和OVA-GMC38细胞观察致瘤率,评价基因转染对致瘤率的影响。6～8周雌性C57BL/6小鼠种植OVA-GMC38细胞,小鼠根据肿瘤大小平均分为2组[磷酸盐缓冲溶液(PBS)组、OVA免疫组],每组6只,荷瘤小鼠3周内用OVA免疫3次,记录各小鼠体质量、肿瘤体积变化及免疫后肿瘤的质量,评价OVA-GMC38荷瘤小鼠模型的肿瘤免疫效果;流式细胞仪检测被免疫的荷瘤小鼠脾脏中T细胞的比例,评价肿瘤模式抗原免疫对体内T细胞的影响。结果荧光显微镜和流式细胞仪观察结果表明,慢病毒成功感染95.1%MC38细胞。qRT-PCR结果显示OVA-GMC38细胞表达OVA mRNA水平显著高于MC38细胞。Western blot结果表明OVA-GMC38细胞有OVA表达(阳性对照光密度比值为0.71,OVA-GMC38光密度比值为1.11),而MC38细胞不表达。小鼠种植肿瘤结果表明OVAGMC38细胞与MC38相比,致瘤能力不受影响。荷瘤小鼠OVA免疫后肿瘤更小(t=3.590,P=0.004 9),说明免疫后肿瘤生长延缓。另外,PBS组与OVA免疫组小鼠体质量均无明显变化(t=1.796,P=0.102 7);OVA免疫组脾脏中CD8^+(t=7.218,P<0.000 1)和CD4^+(t=4.685,P<0.000 1)T细胞比例明显高于PBS组,差异有显著统计学意义。结论成功建立稳定表达OVA和GFP的OVA-GMC38细胞株,能够作为肿瘤特异抗原细胞模型来进行肿瘤免疫评价的研究。
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关键词
结直肠癌
肿瘤模式抗原
卵清白蛋白
免疫疗法
肿瘤模型
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题名
表达OVA和GFP的MC38细胞株构建及其肿瘤免疫评价初探
1
作者
王宁
杨影
田欣欣
庞丽云
张海玲
冷希岗
机构
中国医学科学院.北京协和医学院生物医学工程研究所天津市生物医学材料重点实验室
出处
《生物医学工程与临床》
CAS
2019年第3期324-330,共7页
基金
国家自然科学基金资助项目(31300794)
天津市自然科学基金重点项目(16JCZDJC35800)
文摘
目的构建过表达肿瘤模式抗原——鸡卵白蛋白(OVA)和绿色荧光蛋白(GFP)的结肠癌细胞系OVA-GMC38及荷瘤小鼠模型,初步探索其在肿瘤免疫评价的应用。方法采用携带OVA和GFP双基因的慢病毒感染结肠癌细胞系MC38细胞,分别用荧光显微镜和流式细胞仪观察MC38细胞感染后GFP表达水平,并用定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western blot方法检测OVA表达水平。将6～8周雌性C57BL/6小鼠随机分为2组(MC38组、OVAGMC38组),每组9只,分别种植MC38和OVA-GMC38细胞观察致瘤率,评价基因转染对致瘤率的影响。6～8周雌性C57BL/6小鼠种植OVA-GMC38细胞,小鼠根据肿瘤大小平均分为2组[磷酸盐缓冲溶液(PBS)组、OVA免疫组],每组6只,荷瘤小鼠3周内用OVA免疫3次,记录各小鼠体质量、肿瘤体积变化及免疫后肿瘤的质量,评价OVA-GMC38荷瘤小鼠模型的肿瘤免疫效果;流式细胞仪检测被免疫的荷瘤小鼠脾脏中T细胞的比例,评价肿瘤模式抗原免疫对体内T细胞的影响。结果荧光显微镜和流式细胞仪观察结果表明,慢病毒成功感染95.1%MC38细胞。qRT-PCR结果显示OVA-GMC38细胞表达OVA mRNA水平显著高于MC38细胞。Western blot结果表明OVA-GMC38细胞有OVA表达(阳性对照光密度比值为0.71,OVA-GMC38光密度比值为1.11),而MC38细胞不表达。小鼠种植肿瘤结果表明OVAGMC38细胞与MC38相比,致瘤能力不受影响。荷瘤小鼠OVA免疫后肿瘤更小(t=3.590,P=0.004 9),说明免疫后肿瘤生长延缓。另外,PBS组与OVA免疫组小鼠体质量均无明显变化(t=1.796,P=0.102 7);OVA免疫组脾脏中CD8^+(t=7.218,P<0.000 1)和CD4^+(t=4.685,P<0.000 1)T细胞比例明显高于PBS组,差异有显著统计学意义。结论成功建立稳定表达OVA和GFP的OVA-GMC38细胞株,能够作为肿瘤特异抗原细胞模型来进行肿瘤免疫评价的研究。
关键词
结直肠癌
肿瘤模式抗原
卵清白蛋白
免疫疗法
肿瘤模型
Keywords
colorectal cancer
tumor pattern antigen
ovalbumin
immunotherapy
tumor model
分类号
R392.2 [医药卫生—免疫学]
R735.35 [医药卫生—肿瘤]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
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1
表达OVA和GFP的MC38细胞株构建及其肿瘤免疫评价初探
王宁
杨影
田欣欣
庞丽云
张海玲
冷希岗
《生物医学工程与临床》
CAS
2019
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