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SYBR GreenⅠ定量RT-PCR快速检测H5亚型禽流感病毒方法的建立
被引量：
6
1
作者
马莉
汤承
+3 位作者
李明义
岳华
张彬
张兆敏
《中国家禽》
北大核心
2008年第20期18-21,共4页
针对H5亚型禽流感H基因保守序列设计引物,建立基于SYBR GreenⅠ检测模式的荧光定量RT-PCR(real-time RT-PCR,RRT-PCR),最低检测限为2.1×102拷贝质粒DNA,扩增产物的熔解曲线分析只出现1个单特异峰,无引物二聚体,Tm=(79.5±0.3)...
针对H5亚型禽流感H基因保守序列设计引物,建立基于SYBR GreenⅠ检测模式的荧光定量RT-PCR(real-time RT-PCR,RRT-PCR),最低检测限为2.1×102拷贝质粒DNA,扩增产物的熔解曲线分析只出现1个单特异峰,无引物二聚体,Tm=(79.5±0.3)℃,对H5N1亚型和H5N2亚型禽流感病毒灭活抗原均有阳性扩增,对H7、H9亚型禽流感病毒、健康鸡、鸭组织及其它家禽常见病原RNA无扩增,可重复性好,批内变异系数及批间变异系数分别为2.99%和5.12%;检测速度快,从样本处理到报告结果仅需5h。
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关键词
H5亚型禽流感病毒
SYBR
Green
I
荧光定量反转录聚合酶链式反应
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职称材料
基于荧光熔解曲线模式RT-PCR快速检测H_5N_1亚型禽流感病毒
被引量：
1
2
作者
岳华
李明义
+3 位作者
马莉
汤承
张兆敏
张斌
《南京农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第4期116-121,共6页
针对H5N1亚型禽流感病毒(AIV)的HA、NA基因保守序列设计2对引物,建立了SYBR GreenⅠ双重荧光RT-PCR(RRT-PCR)方法,实现了同一反应管内同时检测AIV的H5和N1亚型基因。熔解曲线分析显示,H5和N1扩增片段的熔解温度分别为(79.5±0.3)℃...
针对H5N1亚型禽流感病毒(AIV)的HA、NA基因保守序列设计2对引物,建立了SYBR GreenⅠ双重荧光RT-PCR(RRT-PCR)方法,实现了同一反应管内同时检测AIV的H5和N1亚型基因。熔解曲线分析显示,H5和N1扩增片段的熔解温度分别为(79.5±0.3)℃和(83.3±0.3)℃,无引物二聚体形成,扩增产物片段大小分别为150 bp和474bp,与预期大小相符,测序结果证实为H5和N1亚型基因的靶序列。该方法能从H5N1样本中检出阳性扩增信号,熔解曲线可见H5和N1双特异峰;而H5N2样本有阳性扩增,熔解曲线仅见H5单特异峰。AIV的其他HA亚型和其他病毒的RNA、DNA无扩增信号。本法最低可检测21.0拷贝.μL-1和19.5拷贝.μL-1H5和N1重组质粒,敏感度分别是RT-PCR的100、1 000倍。本研究建立的基于荧光熔解曲线模式RT-PCR可用于HN亚型AIV的检测。
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关键词
禽流感病毒
H5N1亚型
双重荧光RT—PCR
熔解曲线
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职称材料
双重RT-PCR同时快速检测H5亚型禽流感病毒和新城疫病毒强毒株
3
作者
张斌
汤承
+4 位作者
张兆敏
马莉
刘小银
李明义
岳华
《中国动物检疫》
CAS
2009年第2期24-28,共5页
本研究针对AIV H5的血凝素(HA)基因和vNDV的融合蛋白(F)基因设计两对引物,建立了单管同时检测AIVH5和vNDV的双重RT-PCR(dRT-PCR),该方法能在单一反应管内同时检测AIVH5和vNDV,不与其它亚型AIV、弱毒NDV毒株以及其它病原体发生非特异性扩...
本研究针对AIV H5的血凝素(HA)基因和vNDV的融合蛋白(F)基因设计两对引物,建立了单管同时检测AIVH5和vNDV的双重RT-PCR(dRT-PCR),该方法能在单一反应管内同时检测AIVH5和vNDV,不与其它亚型AIV、弱毒NDV毒株以及其它病原体发生非特异性扩增;对含有AIV H5 HA基因和vNDV F基因重组质粒DNA的最低检测限分别为20.6和406fg,敏感性与单项RT-PCR相同;从样本处理到报告结果仅需5h。对24份临床疑似样本进行检测,AIVH5均为阴性,vNDV阳性18份,PCR产物测序证明为靶基因序列,其具有vNDV F基因的特征性序列,随机选9份vNDV阳性样本接种SPF鸡胚,分离出6株vNDV,病毒分离率为6/9;对100 ELD50的AIV H5N1和100 ELD50的vNDV人工同时感染5日龄SPF鸡的脑、肝脏、肺脏和泄殖腔棉拭子进行dRT-PCR检测,AIV H5的检测率为4/5,3/5,5/5,4/5,vNDV的检测率为3/5,5/5,4/5,3/5,而对H9N2和LaSota毒株实验同时感染样本及阴性对照样本的检测均为阴性。可见本研究建立的dRT-PCR为AIV H5和vNDV诊断、监测、检疫及分子流行病学调查提供了特异性强、操作简单、检测速度快、成本低廉的新方法。
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关键词
禽流感H5亚型
强毒力新城疫
双重RT-PCR
快速检测
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职称材料
题名
SYBR GreenⅠ定量RT-PCR快速检测H5亚型禽流感病毒方法的建立
被引量：
6
1
作者
马莉
汤承
李明义
岳华
张彬
张兆敏
机构
西南民族大学生命
科学
与技术
学院
中国医学科学院成都输血研究所
中国
动物卫生与流行病学中心
出处
《中国家禽》
北大核心
2008年第20期18-21,共4页
基金
“十一五”国家科技支撑计划(2006BAD06A11)
文摘
针对H5亚型禽流感H基因保守序列设计引物,建立基于SYBR GreenⅠ检测模式的荧光定量RT-PCR(real-time RT-PCR,RRT-PCR),最低检测限为2.1×102拷贝质粒DNA,扩增产物的熔解曲线分析只出现1个单特异峰,无引物二聚体,Tm=(79.5±0.3)℃,对H5N1亚型和H5N2亚型禽流感病毒灭活抗原均有阳性扩增,对H7、H9亚型禽流感病毒、健康鸡、鸭组织及其它家禽常见病原RNA无扩增,可重复性好,批内变异系数及批间变异系数分别为2.99%和5.12%;检测速度快,从样本处理到报告结果仅需5h。
关键词
H5亚型禽流感病毒
SYBR
Green
I
荧光定量反转录聚合酶链式反应
Keywords
H5 subtype avian influenza virus
SYBR Green I
real-time RT-PCR
分类号
S858.305.3 [农业科学—临床兽医学]
S763.7 [农业科学—森林保护学]
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职称材料
题名
基于荧光熔解曲线模式RT-PCR快速检测H_5N_1亚型禽流感病毒
被引量：
1
2
作者
岳华
李明义
马莉
汤承
张兆敏
张斌
机构
西南民族大学生命
科学
与技术
学院
四川省高等院校动物
医学
重点实验室
中国
动物卫生与流行病学中心
中国医学科学院成都输血研究所
出处
《南京农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第4期116-121,共6页
基金
国家"十一五"科技支撑计划项目(2006BAD06A11)
文摘
针对H5N1亚型禽流感病毒(AIV)的HA、NA基因保守序列设计2对引物,建立了SYBR GreenⅠ双重荧光RT-PCR(RRT-PCR)方法,实现了同一反应管内同时检测AIV的H5和N1亚型基因。熔解曲线分析显示,H5和N1扩增片段的熔解温度分别为(79.5±0.3)℃和(83.3±0.3)℃,无引物二聚体形成,扩增产物片段大小分别为150 bp和474bp,与预期大小相符,测序结果证实为H5和N1亚型基因的靶序列。该方法能从H5N1样本中检出阳性扩增信号,熔解曲线可见H5和N1双特异峰;而H5N2样本有阳性扩增,熔解曲线仅见H5单特异峰。AIV的其他HA亚型和其他病毒的RNA、DNA无扩增信号。本法最低可检测21.0拷贝.μL-1和19.5拷贝.μL-1H5和N1重组质粒,敏感度分别是RT-PCR的100、1 000倍。本研究建立的基于荧光熔解曲线模式RT-PCR可用于HN亚型AIV的检测。
关键词
禽流感病毒
H5N1亚型
双重荧光RT—PCR
熔解曲线
Keywords
avian influenza virus
H5N1 subtype
duplex real-time RT-PCR
melting curve analysis
分类号
S852.65 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
双重RT-PCR同时快速检测H5亚型禽流感病毒和新城疫病毒强毒株
3
作者
张斌
汤承
张兆敏
马莉
刘小银
李明义
岳华
机构
西南民族大学生命
科学
与技术
学院
中国医学科学院成都输血研究所
四川大学华西第二医院发育与干细胞生物学
研究所
中国
动物卫生与流行病学中心
出处
《中国动物检疫》
CAS
2009年第2期24-28,共5页
基金
"十一五"国家科技支撑计划(2006BAD06A11)
文摘
本研究针对AIV H5的血凝素(HA)基因和vNDV的融合蛋白(F)基因设计两对引物,建立了单管同时检测AIVH5和vNDV的双重RT-PCR(dRT-PCR),该方法能在单一反应管内同时检测AIVH5和vNDV,不与其它亚型AIV、弱毒NDV毒株以及其它病原体发生非特异性扩增;对含有AIV H5 HA基因和vNDV F基因重组质粒DNA的最低检测限分别为20.6和406fg,敏感性与单项RT-PCR相同;从样本处理到报告结果仅需5h。对24份临床疑似样本进行检测,AIVH5均为阴性,vNDV阳性18份,PCR产物测序证明为靶基因序列,其具有vNDV F基因的特征性序列,随机选9份vNDV阳性样本接种SPF鸡胚,分离出6株vNDV,病毒分离率为6/9;对100 ELD50的AIV H5N1和100 ELD50的vNDV人工同时感染5日龄SPF鸡的脑、肝脏、肺脏和泄殖腔棉拭子进行dRT-PCR检测,AIV H5的检测率为4/5,3/5,5/5,4/5,vNDV的检测率为3/5,5/5,4/5,3/5,而对H9N2和LaSota毒株实验同时感染样本及阴性对照样本的检测均为阴性。可见本研究建立的dRT-PCR为AIV H5和vNDV诊断、监测、检疫及分子流行病学调查提供了特异性强、操作简单、检测速度快、成本低廉的新方法。
关键词
禽流感H5亚型
强毒力新城疫
双重RT-PCR
快速检测
Keywords
Subtype H5 avian influenza virus, velogenic Newcastle disease virus, duplex RT-PCR, rapid detection
分类号
S852.659.5 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
SYBR GreenⅠ定量RT-PCR快速检测H5亚型禽流感病毒方法的建立
马莉
汤承
李明义
岳华
张彬
张兆敏
《中国家禽》
北大核心
2008
6
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
基于荧光熔解曲线模式RT-PCR快速检测H_5N_1亚型禽流感病毒
岳华
李明义
马莉
汤承
张兆敏
张斌
《南京农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
双重RT-PCR同时快速检测H5亚型禽流感病毒和新城疫病毒强毒株
张斌
汤承
张兆敏
马莉
刘小银
李明义
岳华
《中国动物检疫》
CAS
2009
0
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