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TRMT61A在肝癌细胞中的功能及其机制研究
1
作者
胡哲轩
张欣
+4 位作者
沃璐璐
李静池
王娇
周佽想
赵倩
《上海交通大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第6期742-750,共9页
目的·探究N1-甲基腺苷(N1-methyladenosine,m1A)甲基转移酶催化亚基(tRNA methyltransferase 61 Homolog A,TRMT61A)对肝癌细胞功能的影响及其潜在机制。方法·通过生物信息学软件分析TCGA数据库中TRMT61A在肝细胞肝癌患者样...
目的·探究N1-甲基腺苷(N1-methyladenosine,m1A)甲基转移酶催化亚基(tRNA methyltransferase 61 Homolog A,TRMT61A)对肝癌细胞功能的影响及其潜在机制。方法·通过生物信息学软件分析TCGA数据库中TRMT61A在肝细胞肝癌患者样本中的表达情况并绘制相关生存曲线。通过CRISPR-Cas9技术构建稳定敲低TRMT61A表达的肝癌细胞系Huh7细胞和HepG2细胞,通过蛋白质印记法(Western blotting)检测对照组和敲低组细胞TRMT61A蛋白水平;通过斑点印迹实验检测2组细胞总RNA的m1A修饰水平。利用CCK-8法和平板克隆形成实验检测2组细胞增殖能力。使用碘化丙啶(propidium iodide,PI)染色和流式细胞术检测细胞周期;通过Western blotting检测细胞周期相关蛋白表达水平。使用Annexin V/PI细胞凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡情况;通过Western blotting检测细胞凋亡相关蛋白表达水平。结果·经生物信息学软件分析,TCGA数据库中TRMT61A在肝癌患者癌组织中高表达,通过绘制生存曲线发现TRMT61A与肝癌患者的预后呈负相关。在肝癌细胞系Huh7和HepG2中稳定敲低TRMT61A后,细胞中TRMT61A蛋白水平下降,总RNA的m1A修饰水平下降。CCK-8实验结果显示在Huh7和HepG2细胞中稳定敲低TRMT61A后细胞增殖明显受到抑制;平板克隆实验结果显示在Huh7和HepG2细胞中稳定敲低TRMT61A后,克隆形成数目显著降低。TRMT61A敲低的Huh7和HepG2细胞出现G0/G1期细胞周期阻滞,细胞中P21蛋白水平显著上升,cyclin D1蛋白水平下降。此外,细胞凋亡检测结果显示敲低TRMT61A后Huh7和HepG2细胞凋亡率上升,而细胞剪切活化caspase3蛋白水平也明显上升。结论·敲低TRMT61A可抑制肝癌细胞增殖,并诱导其发生凋亡。
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关键词
N1-甲基腺苷甲基化修饰
TRMT61A
肝细胞肝癌
细胞增殖
细胞凋亡
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题名
TRMT61A在肝癌细胞中的功能及其机制研究
1
作者
胡哲轩
张欣
沃璐璐
李静池
王娇
周佽想
赵倩
机构
上海交通大学
医学
院病理生理学系
中国医学科学院
应
激
与肿瘤
创新
单元
(
出处
《上海交通大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第6期742-750,共9页
基金
国家自然科学基金(81772831)。
文摘
目的·探究N1-甲基腺苷(N1-methyladenosine,m1A)甲基转移酶催化亚基(tRNA methyltransferase 61 Homolog A,TRMT61A)对肝癌细胞功能的影响及其潜在机制。方法·通过生物信息学软件分析TCGA数据库中TRMT61A在肝细胞肝癌患者样本中的表达情况并绘制相关生存曲线。通过CRISPR-Cas9技术构建稳定敲低TRMT61A表达的肝癌细胞系Huh7细胞和HepG2细胞,通过蛋白质印记法(Western blotting)检测对照组和敲低组细胞TRMT61A蛋白水平;通过斑点印迹实验检测2组细胞总RNA的m1A修饰水平。利用CCK-8法和平板克隆形成实验检测2组细胞增殖能力。使用碘化丙啶(propidium iodide,PI)染色和流式细胞术检测细胞周期;通过Western blotting检测细胞周期相关蛋白表达水平。使用Annexin V/PI细胞凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡情况;通过Western blotting检测细胞凋亡相关蛋白表达水平。结果·经生物信息学软件分析,TCGA数据库中TRMT61A在肝癌患者癌组织中高表达,通过绘制生存曲线发现TRMT61A与肝癌患者的预后呈负相关。在肝癌细胞系Huh7和HepG2中稳定敲低TRMT61A后,细胞中TRMT61A蛋白水平下降,总RNA的m1A修饰水平下降。CCK-8实验结果显示在Huh7和HepG2细胞中稳定敲低TRMT61A后细胞增殖明显受到抑制;平板克隆实验结果显示在Huh7和HepG2细胞中稳定敲低TRMT61A后,克隆形成数目显著降低。TRMT61A敲低的Huh7和HepG2细胞出现G0/G1期细胞周期阻滞,细胞中P21蛋白水平显著上升,cyclin D1蛋白水平下降。此外,细胞凋亡检测结果显示敲低TRMT61A后Huh7和HepG2细胞凋亡率上升,而细胞剪切活化caspase3蛋白水平也明显上升。结论·敲低TRMT61A可抑制肝癌细胞增殖,并诱导其发生凋亡。
关键词
N1-甲基腺苷甲基化修饰
TRMT61A
肝细胞肝癌
细胞增殖
细胞凋亡
Keywords
N1-methyladenosine(m1A)methylation
TRMT61A
hepatocellular carcinoma
cell proliferation
cell apoptosis
分类号
R735.7 [医药卫生—肿瘤]
R34 [医药卫生—基础医学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
TRMT61A在肝癌细胞中的功能及其机制研究
胡哲轩
张欣
沃璐璐
李静池
王娇
周佽想
赵倩
《上海交通大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2022
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